五味子粗多糖与顺铂抑制脑胶质瘤细胞增殖的作用

温 娜 唐泽波 金 宏 田 晶 王玮瑶 齐 玲 于洪泉

(吉林医药学院实验中心，吉林 吉林 132013)

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤，恶性程度高，约占颅内肿瘤的45%〔1〕。目前在全球范围内呈上升趋势，复发率、死亡率高和治愈率低是其显著特点。目前尚无根治方法〔2〕。因此，如何有效地控制甚至治愈胶质瘤仍是亟待解决的难题。五味子粗多糖(FSP)是从五味子干燥成熟果实中提取的总多糖，具有保肝、抗疲劳、抗衰老、增强免疫等功效〔3〕，但对脑肿瘤的治疗作用少有研究。本实验旨在研究FSP作用于脑胶质瘤SHG-44细胞后发生的效应，以及该药协同常规化疗药物顺铂作用细胞后的反应，为临床治疗肿瘤提供新的思路和实验依据。

1 材料与方法

1.1细胞株 SHG-44细胞(由吉林大学第一医院神经外科提供)。

1.2主要试剂 细胞培养基RPMI-1640 (Thermo公司)、小牛血清、0.25%胰酶(美国Gibco公司)，FSP(北华大学提供)，顺铂(阿拉丁公司，中国)，四甲基偶氮唑(MTT)(Sigma公司)，二甲基亚砜(DMSO)(Thermo公司)。

1.3SHG-44细胞的培养 将配制好的RPMI-1640培养基置于培养箱中预热，自-80℃冰箱中取出脑胶质瘤SHG-44细胞，迅速置于37℃水浴箱中复苏，然后将细胞接种于培养瓶中，加入10 ml含10%小牛血清的RPMI-1640细胞培养液，将其置入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。倒置显微镜下观察细胞生长状态，待80%～90%融合时进行传代。

1.4MTT法检测FSP对SHG-44细胞的作用 将FSP用含5%小牛血清RPMI-1640细胞培养液溶解后，配制成终浓度为0、200、400、800 μg/ml的含药培养基。取对数生长期的脑胶质瘤SHG-44细胞，胰酶消化后，用含5%小牛血清RPMI-1640细胞培养液调整细胞浓度为6×103/ml。将细胞悬液均匀接种于96孔板中，100 μl/孔，置入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养24 h，使细胞同步化。弃去上清液，加入含不同浓度FSP的培养基，每个浓度重复5次。作用48 h时，加入MTT 20 μl/孔，37℃继续孵育4 h，弃上清液，加DMSO 150 μl/孔，震荡均匀使MTT沉淀完全溶解，15 min后在酶联免疫检测仪上490 nm波长处测定各孔吸光度(A)值，用不加细胞的空白孔调零。

1.5MTT法检测FSP联合顺铂对SHG-44细胞的影响 将细胞以6×103个/孔接种于96孔板培养24 h后，将细胞分为4组，分别为FSP组(200 μg/ml)，顺铂组(10 μg/ml)，联合用药组(FSP 200 μg/ml +顺铂10 μg/ml)，对照组使用基础培养液。余下步骤同前。

2 结 果

2.1FSP对SHG-44细胞增殖的抑制作用 不同浓度FSP作用SHG-44细胞后，均可以抑制细胞的增殖， 与空白对照组(1.43±0.03)相比，200 μg/ml FSP组(1.04±0.04)细胞增殖明显受抑制(P<0.05)，而400 μg/ml组(0.72±0.04)和800 μg/ml FSP组(0.65±0.03)细胞增殖受抑制更加明显(P<0.01)，并且药物对细胞增殖的抑制作用具有明显的浓度依赖性。

2.2FSP联合顺铂抑制SHG-44细胞的增殖 SHG-44细胞经FSP单独或与顺铂联合作用，MTT检测发现，顺铂与FSP单独作用均可以明显抑制细胞的增殖作用(A值0.83±0.04,0.81±0.03)，与空白对照组(1.37±0.04)比较，差异具有统计学意义(P<0.01)；当FSP与顺铂联合作用时，与空白对照组比较，抑制增殖作用更加明显(A值0.69±0.02)(P<0.01)，与FSP组比较，也明显抑制细胞的增殖作用(P<0.05)。

3 讨 论

脑胶质瘤是最常见的颅内恶性肿瘤，发病率和死亡率都很高，病程难以控制，目前治疗方案仍然是手术切除辅以放疗和化疗等综合治疗为主。但肿瘤呈高度浸润性生长，与脑组织无明显分界，手术无法全切，放疗很难完全确定靶区，化疗极易出现耐药性，因此导致患者最终死亡，具有较高的致死率〔4,5〕。异常过度增殖是肿瘤细胞与正常细胞最主要的区别，因此抑制肿瘤细胞增殖是抗肿瘤治疗的一个重要环节〔6〕。

中药五味子是长白山特色中药，具有产量大、毒性低的特点〔7〕，药理学研究发现，五味子具有包括抗肿瘤作用在内的多种活性作用〔8～11〕。本研究结果与此前的研究结果一致〔12〕。提示FSP可以有效抑制脑肿瘤细胞的增殖。

顺铂是临床上肿瘤常规化疗药物之一，长期使用可对人体造成严重毒副反应和耐药反应〔13〕。本研究结果提示FSP联合顺铂可以更加有效地抑制脑肿瘤细胞的增殖，两者可以发挥协同作用。

本实验有力证实了FSP联合化疗药物顺铂可以加强药物的抑制肿瘤细胞增殖的作用，但机制尚不明确。联合用药是否可以降低顺铂的用量，在降低毒副作用的同时达到最佳治疗效果，这些都有待于进一步研究。总之，FSP具有抗肿瘤作用，对其深入的研究将有助于肿瘤的预防和治疗。

4 参考文献

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12温 娜,唐泽波，袁 瑞，等.五味子粗多糖对脑胶质瘤细胞生长的作用〔J〕.中国老年学杂志,2013；33(6):2837-8.

13张祥麟.配合物化学〔M〕.北京:中国高教出版社,1991:455.