TGF-β3、FN在绝经后子宫肌瘤及肌壁组织中的表达及意义

申彩云 吴 蕾

(武警新疆总队医院妇产科,新疆 乌鲁木齐 830091)

绝经后妇女子宫肌瘤临床治疗中，常采用促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)，使得子宫肌瘤萎缩、变小；也有患者在进行激素类似物治疗后出现肌瘤持续增长，并表现出临床症状，具体原因仍难以准确解释。有相关研究表明〔1〕，子宫肌瘤若存在于妇女绝经前，则体内多种生长因子，如转化生长因子(TGF)-β3、纤维连接蛋白(FN)均对子宫肌瘤产生重要作用，在TGF等作用下，肌细胞出现异常增殖，细胞外基质也发生聚集，两种因素共同作用，使得子宫肌瘤出现明显增长；在细胞外基质中，存在FN这类重要因子，其可以促进体内多种肿瘤增殖。现阶段，子宫肌瘤萎缩与妇女绝经期后与子宫肌瘤内多种因子如TGF-β3、FN表达水平与二者联系的意义研究较少〔2〕。本文旨在探究非萎缩性与萎缩性子宫肌瘤中TGF-β3、FN的表达及其意义。

1 资料与方法

1.1临床资料 选择2010～2012年到本院就医的绝经后子宫肌瘤患者100例，年龄45～80岁，平均(53±2.1)岁。将研究对象按照是否出现萎缩性子宫肌瘤为标准分为两组，非萎缩组64例，其分组标准〔3〕为绝经前患者无子宫肌瘤或是子宫肌瘤体积较小，随绝经期结束，肌瘤持续增大，并无萎缩状态，临床症状逐渐明显，后临床观察、影像学检测确诊为子宫肌瘤，作为手术指征；萎缩组36例，分组标准〔4〕为子宫肌瘤在绝经前出现，但绝经后肌瘤体积变小萎缩，临床表现并不明显，常在单纯性卵巢囊肿、子宫脱垂或是盆腔炎症等手术过程中发现，并最终切除。两组患者均已绝经1年或1年以上，且手术前并未服用激素类药物等，由影像学检查以及病理生理学确诊为子宫肌瘤，对纳入本次研究知情同意，排除严重肝肾疾病、肺部感染、精神疾病。

1.2TGF-β3及FN检测及结果判定 运用免疫组化(SP)法，采用TGF-β3及FN一抗和免疫组化SP试剂盒对其进行检测，具体操作方式〔5〕：将采集到的子宫肌瘤样本做成蜡块，并存档；将标本进行连续切片，得到4 μm厚组织数张，作为备用材料，SP法取其中两张进行染色。在本次实验全过程，阳性对照选用已经测定为阳性的切片，胎盘组织切片作为TGF-β3阳性对照切片，正常肾组织作为FN对照，阴性对照选择PBC作为一抗代替品。TGF-β3、FN的半定量定性评分是采用免疫反应评分来测定其表达水平。切片观察阳性结果表现是细胞质、细胞膜以及细胞间质中存在棕黄色颗粒，其中细胞质中主要是TGF-β3表达；细胞内以及细胞外基质内主要是FN表达。观察结果评判依据主要是着色面积以及着色反应强度二者相结合，每张切片阳性强度按无着色、淡黄色、棕黄色和棕褐色分别计 0、1、2、3分，阳性着色面积按无着色、着色面积<25%、25%～50%、51%～75%、>75%分别计0、1、2、3、4 分，两项评分之积作为最终结果。TGF-β3、FN表达量通过评分积表现。

1.3统计学方法 应用SPSS18.0软件进行分析，计数资料用χ2表示，两组间比较用t检验。

2 结 果

2.1两组 TGF-β3 表达情况 在本次研究中，两组研究对象生长因子检测中，在肌瘤以及肌层壁中均有TGF-β3表达，胞质着色明显。非萎缩组TGF-β3 相对表达量比较中，子宫肌瘤中(3.68±1.94)明显高于肌壁(2.25±1.48)(P<0.05)；萎缩组TGF-β3相对表达量中，子宫肌瘤中为2.91±1.91，肌壁组织为1.83±1.10(P>0.05)。在组间比较中，萎缩组TGF-β3相对表达量评分均大于非萎缩组，但无统计学差异(P>0.05)。

2.2两组FN表达情况 FN阳性大多来自于所有观察标本的细胞间质部分，阳性表现主要是以棕褐色或淡黄色为主，形态主要是呈网状或线状分布，此外，FN也可在少数细胞内部表达。非萎缩组FN相对表达量比较中，子宫肌瘤中(5.31±2.93)明显高于肌壁(3.94±2.13)(P<0.05)；萎缩组FN相对表达量中，子宫肌瘤中为4.86±2.43，肌壁组织为4.46±2.67(P>0.05)。在组间比较中，萎缩压组FN 相对表达量评分均大于非萎缩组，但无统计学意义(P>0.05)。

3 讨 论

作为一种多肽类生长因子，TGF-β呈现一种多效性特点，且人体内多数细胞内存在转换生长因子受体，几乎所有细胞都可以产生TGF-β。其主要存在五种同工型，包括TGF-β1～TGF-β5，生殖系统内主要表达的TGF-β亚型主要是产生于间充质细胞的TGF-β3。TGF-β3主要表现的生物学功能有组织细胞的创伤修复、细胞增殖、分化、凋亡和迁移的生物调节、促进血管化进程、对免疫反应进行诱导、肿瘤相关疾病也与TGF-β3有关〔6〕，其中最主要生物学功能是促进细胞外基质形成。现阶段，针对TGF-β3的研究大多主要集中于其与妇女绝经期前发生子宫肌瘤间的相关性，有相关研究结果显示在妇女绝经前，TGF-β3在子宫肌瘤肿瘤组织与正常平滑肌壁组织中表达水平比较中，前者内TGF-β3水平远高于后者。TGF-β3〔7〕发挥生物学作用的方式主要是通过旁分泌以及自分泌形式对正常子宫肌细胞增殖进行有效抑制，对于其肌瘤细胞增殖起重要推动作用，细胞外基质的重要组成胶原蛋白也相应增加，此外FN、蛋白聚糖表达水平也升高。

本研究结果可知，子宫肌瘤可在绝经后持续增长的重要原因之一很可能在于TGF-β3的作用。此外，还有相关研究表明〔8〕，采用GnRHa治疗方式，可以显著控制和缩小子宫肌瘤体积，在进行体内TGF- β3水平检测时，发现治疗组内TGF-β3表达水平明显低于未治疗组，据此可以猜测与GnRHa有关，GnRHa可以显著提升血雌激素和孕激素水平，恢复到绝经前水平，从而影响TGF-β3分泌。

FN作为一种大分子非胶原糖蛋白，主要分布于软组织基质、多数基膜以及全身体液，尤以血液内较为广泛，其中血浆细胞型FN，可分为可溶性、不可溶两种类型，都是构成细胞外基质的重要组成，蛋白聚糖、胶原与细胞型FN等物质是致密结构的组成成分，还能对细胞外基质形成以及创伤后修复起到重要重塑作用。在体内大分子协助下，FN还可以对细胞骨架形成起到重要作用，此外还在细胞分化，甚至细胞的致癌性转化方面发挥重要作用。有学者〔9〕研究发现，与瘢痕疙瘩形成类似，子宫肌瘤也通过细胞基质蓄积以及紊乱结构对肿瘤体积以及质地造成影响，而FN正是参与肌瘤组织细胞基质形成从而影响肌瘤生长过程；还有学者研究发现，FN细胞外基质形成过程以及子宫肌瘤细胞功能中均有FN参与；绝经前子宫肌瘤的一项研究结果表明〔10〕，在子宫肌瘤组织与正常子宫肌层中比较中，FN mRNA 表达量前者明显高于后者。本研究表明FN表达水平提高对绝经后子宫肌瘤增大有促进作用。

4 参考文献

1Joseph DS,Malik M,Nurudeen S,etal.Myometrial cells undergo fibrotic transformation under the influence of transforming growth factor beta-3〔J〕.Fertil Steril,2010;93(5):1500-8.

2De Falco M,Staibano S,Armiento FP,etal.Preoperative treatment of uterine leiomyomas:clinical findings and expression of transforming growth factor-beta3 and connective tissue growth factor〔J〕.J Soc Gynecol Investig,2006;13(4):297-303.

3Leppert PC,Catherino WH,Segars JH.A new hypothesis about the origin of uterine fibroids based on gene expression profiling with microarrays〔J〕.Am J Obstet Gynecol,2006;195(2):415-20.

4Labat-Robert J.Cell-Matrix interactions,the role of fibronectin and integrins.A survey〔J〕.Pathol Biol(Paris),2012;60(1):15-9.

5Arici A,Sozen I.Transforming growth factor-beta3 is expressed at high levels in leiomyoma where it stimulates fibronectin expression and cell proliferation〔J〕.Fertil Steril,2000;73(5):1006-11.

6Laverty HG,Wakefield LM,Occleston NL,etal.TGF-beta 3 and cancer:a review〔J〕.Cytokine Growth Factor Rev,2009;20(4):305-17.

7Norian JM,Malik M,Parker CY,etal.Transforming growth factor beta-3 regulates the versican variants in the extracellular matrix-tich uterine leiomyomas〔J〕.Reprod Sci,2009;16(12):1153-64.

8Ishikawa H,Ishi K,Serna VA,etal.Progesterone is essential for maintenance and growth of uterine leiomyoma〔J〕.Endocrinology,2010;151(6):2433-42.

9Malik M,Mendoza M,Payson M,etal.Curcumin,a nutritional supplement with antineoplastic activity,enhances leiomyoma cell apoptosis and decreases fibronectin expression〔J〕.Fertil Steril,2009;91(5):2177-84.

10Ciarmela P,Islam MS,Reis FM,etal.Growth factors and myometrium :biological effects in uterine fibroid and possible clinical implications〔J〕.Hum Reprod Update,2011;17(6):772-90.