基因芯片技术分析舒郁胶囊对抑郁症肝气郁结证大鼠模型的干预作用

徐凯勇，李自发，高 杰

（山东中医药大学1.实验动物中心、2.基础医学院，山东济南 250355）

中医认为，抑郁症基本机制是肝失疏泄，基础证候是肝气郁结，基本治疗原则是调肝［1］。中药舒郁胶囊主疏肝解郁、调畅情志，临床证实疗效确切。该复方主成分为柴胡皂苷可调理气机、疏肝解郁。本研究通过慢性温和应激（CMS）刺激方法［2］，复制抑郁症肝气郁结证大鼠模型，通过基因芯片技术探讨舒郁胶囊及其主成分柴胡皂苷的干预作用，筛选药物作用基因靶点。

1 材料与方法

1.1 实验动物 Wistar大鼠60只，体质量120～150 g，♂，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，生产许可证号：SCXK（京）2002－0003。

1.2 药物 舒郁胶囊（批号：2011L06107）和柴胡皂苷（批号：20110526）由青岛阳光海川医药科技发展有限公司提供；阳性药：氟西汀胶囊（批号：H20050463）由礼来苏州制药有限公司提供。

1.3 抑郁症肝气郁结证大鼠模型复制及给药 大鼠通过1周适应性喂养后，依据糖水偏好实验与旷场实验基线期数据分为5组，每组12只。即正常对照组（生理盐水，1 ml／200 g）、抑郁症肝气郁结证模型组（生理盐水，1 ml／200 g）、舒郁胶囊组（4.08 mg·kg－1）、柴胡皂苷组（0.72 mg·kg－1）、阳性药对照组（氟西汀胶囊，2.67 mg·kg－1）；给药与人当量［3］，每天灌胃1次，连续4周。除正常对照组，其他组均给予CMS刺激4周。

1.4 基因芯片制备 取大鼠脑区海马组织后；由上海康成生物工程有限公司制备基因芯片：Agilent Rat 4×44K Gene Expression Microarrays。

1.5 数据处理 通过Graphpad Prism 5.0软件对糖水偏好实验和旷场实验数据进行双因素方差分析。应用GeneSpring GX v11.5.1软件分析基因芯片数据获取Ratio（Cy3／Cy5）比值，Volcano Plot方法筛选差异表达基因（Ratio值＞1.5）；并进行Pathway分析和GO分析。

2 结果

给药发现，舒郁胶囊组、阳性药对照组及柴胡皂苷组与模型组相比，旷场实验得分均明显升高（P＜0.05）；但给药组间差异均无显著性（P＞0.05）。舒郁胶囊组、阳性药对照组与模型组相比，糖水偏好值均明显升高（P＜0.05）；但两给药组间差异无显著性（P＞0.05）。

基因芯片结果显示，模型组与正常对照组相比，其差异表达基因为280个；舒郁胶囊组、阳性药对照组及柴胡皂苷组与模型组相比，差异表达基因分别为248、2 208和643个。另外，舒郁胶囊、氟西汀胶囊、柴胡皂苷，改变GO分析中分子功能分别为55、190、110个，细胞组成分别为 43、169、122个，生物过程分别为235、928、699个；改变Pathway通路分别为 6、33、18个。

3 讨论

本研究行为学测定结果中，3种药针对抑郁症肝气郁结证的疗效，氟西汀＞舒郁胶囊＞柴胡皂苷。前期，舒郁胶囊作为临床疗效确切的治疗该证的中药复方，未发现有临床不良反应，而其主成分柴胡皂苷却有肝脏毒性［4］。另外，舒郁胶囊在GO分析和Pathway分析中都显示出最低数量的基因功能改变，氟西汀胶囊对其改变最大，柴胡皂苷次之；说明舒郁胶囊对机体基因功能改变小，以致对机体生理生化及代谢过程影响小，与其未发现有临床不良反应相互印证。因此，舒郁胶囊较益于治疗抑郁症肝气郁结证，且其作用机制可能与其精确改变基因表达及功能相关。

参考文献：

［1］贾秀琴，李映红，杨 敏.肝失疏泄是亚健康状态发生之源［J］.深圳中西医结合杂志，2011，21（5）：283－5.

［1］Jia X Q，Li Y H，Yang M.The source of sub-health status is the liver failing to maintain the normal flow of QI［J］.Shenzhen J Integrated Tradit Chin Western Med，2011，21（5）：283－5.

［2］Janne G，Robert M，Eldbjorg F，et al.Effects of chronic mild stress on sexual behavior，locomotor activity and consumption of sucrose and saccharine solutions［J］.Physiol Behav，2005，84：571－7.

［3］徐叔云，卞如濂，陈 修.药理实验方法学［M］.北京，人民卫生出版社，2002：203.

［3］Xu SY，Bian R L，Chen X.Experiment methodology of pharmacology［M］.Beijing，People′s Medical Publishing House，2002：203.

［4］Huang Y Y，Huang W，Sun R.Research development on pharmacological effects and hepatotoxicity of bupleurum saikosaponin［J］.Chin J Exp Tradit Med Formul，2011，17（17）：298－301.