X染色质标本制作方法的改进

广西中医药大学生物教研室， 广西 南宁 530001

X染色质标本制作方法的改进

李景云刘绍良

广西中医药大学生物教研室， 广西 南宁 530001

为提高制作X染色质标本的质量，对原有的方法进行了改进。新方法将口腔黏膜细胞直接涮入固定液中，以滴片法制片，自来水流水冲洗玻片，用甲苯胺蓝染色，取得了良好的实验效果。

X染色质，制作方法，改进

X染色质是女性间期细胞核膜内侧边缘轮廓清楚的浓染小体，大小约为1μm，一般呈平凸、圆形、扁平或三角形[1]。制作X染色质标本相对于染色体的制备来说更简单易行，在鉴定性别及染色体数目异常疾病的诊断中发挥着重要作用。根据标本制作的效果，针对传统制片方法中存在的一些问题，对实验方法进行了一些改进，现总结如下。

1 固定的新方法

让受检者漱口后刮取口腔黏膜细胞数次，将刮取物直接涮入装有固定液(甲醇∶冰醋酸=3∶1)的离心管内，固定15min。原方法将刮取物先涮入生理盐水中，离心去上清液后再添加固定液固定，导致细胞丢失较多，离心次数多较费时。改进后的方法可以减少离心次数，减少细胞丢失，结果更准确。

2 制片的新方法

用滴片的方法取代原来的涂片法。直接涂片法[2]可以保留较多细胞，但存在涂抹不均匀，细胞重叠聚集或过度分散，并且涂抹物中杂质多，影响X染色质的准确鉴别。离心后的细胞悬液滴片，杂质少，滴片时易于控制细胞密度，实验效果好。

3 冲洗的新方法

玻片置于自来水下流水冲洗，将玻片上的盐酸彻底冲洗干净，以免影响染色；染色后的玻片也置于自来水流水冲掉片上多余的染液。原来的方法是置于蒸馏水中涮洗，如果制作大量的标本，多次反复使用同一染缸中的蒸馏水，易造成涮洗不干净，标本间相互干扰大。改用自来水流水冲洗，各标本独立清洗，避免彼此影响。自来水价格较蒸馏水低，也可节约成本。

4 染色的新方法

以甲苯胺蓝代替硫堇染色。以0.2%甲苯胺蓝作为染液，染色10min，染色效果好。甲苯胺蓝染液配制方法简单，硫堇染液配制步骤繁琐；甲苯胺蓝染色效果易于控制，硫堇染液易残留在玻片上，不易冲洗干净，造成背景较脏[3]。

用改进后的方法制备X染色质，细胞分布均匀，背景中的杂质少，细胞核着色清晰，X染色质阳性率高，实验效果好，为X染色质的进一步研究提供了基础。

[1]王修海等. 医学遗传学实验指导[M].科学出版社，2001:32.

[2]李石旺，卢新华，许名宗. 人类X染色质标本制备实验方法的改进[J].解剖学杂志，2005,28(2)：240-241.

[3]纪静.两种染色方法对X染色质显示效果的比较[J].青岛大学医学院学报，2003,39(3):354-355.

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1007-8517(2014)07-0086-01

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