RP-HPLC法测定氨甲环酸缓释片中氨甲环酸的含量

王琼，李健和，汤玉兰，胡焰，邱细敏

（1.湖南师范大学医学院，长沙 410012；2.中南大学湘雅二医院药学部，长沙 410011）

RP-HPLC法测定氨甲环酸缓释片中氨甲环酸的含量

王琼1＊，李健和2，汤玉兰2，胡焰2，邱细敏1#

（1.湖南师范大学医学院，长沙 410012；2.中南大学湘雅二医院药学部，长沙 410011）

目的：建立测定氨甲环酸缓释片中氨甲环酸含量的方法。方法：采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Diamonsil C18，流动相为0.23%十二烷基硫酸钠溶液-甲醇（60∶40，V/V），检测波长为220nm，流速为0.8ml/min，柱温为30℃，进样量为20μl。结果：氨甲环酸检测质量浓度在0.5007～4.0056mg/ml范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（r＝0.9999）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤0.26%；平均回收率为98.84%，RSD＝0.51%（n＝9）。结论：该方法准确、简便、专属性强、重复性好，可用于氨甲环酸缓释片中氨甲环酸的含量测定。

氨甲环酸缓释片；反相高效液相色谱法；含量测定

氨甲环酸（Tranexamic acid）为合成的氨基酸类抗纤溶药，能竞争性抑制纤维蛋白的赖氨酸与纤溶酶结合，从而抑制纤维蛋白凝块的裂解，产生止血作用，临床主要用于纤维蛋白溶解亢进所致的各种出血[1]。该药在欧洲和南太平洋地区用于治疗月经过多已有很多年。美国在2009年批准氨甲环酸用于治疗月经过多[2-4]，新型口服氨甲环酸缓释片（商品名：Lysteda）可减少因口服氨甲环酸导致的胃肠道不良反应而提高患者耐受性，且疗效良好[5-6]。在参考相关文献的基础上[7-10]，本研究采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定自制氨甲环酸缓释片中氨甲环酸的含量。

1 材料

1.1 仪器

1200 型HPLC仪，包括二极管阵列检测器（DAD）、LC 3D色谱工作站等（美国Agilent公司）；AE200型电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2 药品与试剂

氨甲环酸原料药（湖南洞庭药业股份有限公司，批号：X1204003M）；氨甲环酸、氨甲苯酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100174-200402、100921-200701）；氨甲环酸缓释片（中南大学湘雅二医院药学部研制，规格：650mg/片，批号：20130312、20130314、20130316）；甲醇（色谱纯，美国Tedia公司）；其他试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.23%十二烷基硫酸钠溶液-甲醇（60∶40，V/V）；检测波长：220nm；流速：0.8ml/min；进样量：20μl；柱温：30℃。取氨甲环酸和氨甲苯酸，加水溶解并稀释制成每1ml中含氨甲环酸0.2mg与氨甲苯酸2μg的溶液，取20μl注入HPLC仪，调节流速使氨甲环酸峰的保留时间约为13min，氨甲环酸峰与氨甲苯酸峰的分离度应大于5.0。

2.2 溶液的制备

2.2.1 空白辅料溶液 按处方比例制备不含氨甲环酸的空白辅料样品，精密称取细粉适量（按处方量约相当于氨甲环酸0.1g），置于50ml量瓶中，加水适量溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液，备用。

2.2.2 供试品溶液 取氨甲环酸缓释片20片，研细，精密称取细粉适量（约相当于氨甲环酸0.1g），置于50ml量瓶中，加水适量溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液，备用。

2.2.3 对照品溶液 精密称取氨甲环酸对照品适量，加水溶解并稀释制成质量浓度约为10mg/ml的溶液，备用。

2.3 空白辅料干扰试验

精密量取“2.2”项下空白辅料溶液、供试品溶液、对照品溶液各20μl，分别注入HPLC仪，记录色谱，见图1。由图1可知，空白辅料对氨甲环酸含量测定无干扰。

图1 高效液相色谱图A.空白辅料；B.对照品；C.供试品Fig1 HPLC chromatogramsA.blank excipients；B.substance control；C.test samples

2.4 线性关系考察

精密吸取“2.2.3”项下对照品溶液（质量浓度：10.014mg/ml）0.5、1.0、2.0，3.0、4.0ml，分别置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。取上述系列溶液各20μl，依次注入HPLC仪，记录色谱。以质量浓度（x）为横坐标，峰面积（y）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程y＝450.61x－1.6107（r＝0.9999）。结果表明，氨甲环酸检测质量浓度在0.5007～4.0056mg/ml范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.5 检测限和定量限

以信噪比（S/N）为3∶1计算，氨甲环酸的最低检测限为1.024μg；以信噪比（S/N）为10∶1计算，氨甲环酸的定量限为3.413μg。

2.6 精密度试验

取“2.4”项下经稀释的质量浓度为2.0028mg/ml的对照品溶液20μl，连续进样6次，测定峰面积。结果，氨甲环酸峰面积的RSD＝0.16%，表明仪器的精密度良好。

2.7 稳定性试验

取“2.2.2”项下的供试品溶液（批号：20130312）适量，分别于放置0、2、4、8、12、24h时按“2.1”项下色谱条件进样，测定峰面积。结果，氨甲环酸峰面积的RSD＝0.26%，表明供试品溶液在24h内质量基本稳定。

2.8 重复性试验

取样品（批号：20130312）20片，研细，取细粉适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液6份，分别按“2.1”项下色谱条件进样，测定峰面积并计算含量。结果，氨甲环酸的平均含量为98.97%，RSD＝0.12%，表明本方法的重复性良好。

2.9 回收率试验

取对照品适量（40、50、60mg），每种量各3份，按氨甲环酸缓释片处方量加入空白辅料，分别置于25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，分别按“2.1”项下色谱条件进样20μl，测定并计算回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果（n＝9）Tab1 Results of recovery tests（n＝9）

2.10 样品含量测定

取样品20片，研细，精密称取细粉适量（约相当于氨甲环酸0.1g），置于50ml量瓶中，加水适量，振摇使氨甲环酸溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl注入HPLC仪，测定峰面积；另取氨甲环酸对照品，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含2mg的溶液，同法测定峰面积，按外标法以峰面积计算含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n＝3）Tab2 Results of content determination of samples（n＝3）

3 讨论

3.1 检测波长的选择

对氨甲环酸在200～400nm范围内进行紫外扫描，结果在220nm处有较大吸收值，故本研究检测波长选择220nm。

3.2 溶剂的选择

氨甲环酸在水中溶解度很好，故选择水作为溶剂。

3.3 流动相的选择

选择不同比例（80∶20、60∶40、50∶50、40∶60）的0.23%十二烷基硫酸钠溶液（取磷酸二氢钠18.3g，加水800ml溶解，加三乙胺8.3ml混匀，再加入2.3g十二烷基硫酸钠，溶解混匀，用磷酸调节pH至2.5，加水至1000ml，摇匀）-甲醇进样试验，结果表明，以0.23%十二烷基硫酸钠溶液-甲醇（60∶40，V/V）作为流动相时，氨甲环酸保留时间约为13min，主峰对称性较好，与杂质峰能达到基线分离。流动相中加入三乙胺作为峰形改善剂，可抑制拖尾。用磷酸调节pH至2.5时，主成分的出峰时间适宜，峰形较好，而且不会对色谱柱造成损害，同时还能够提高药物的稳定性。

3.4 色谱柱的选择

分别选用不同厂家的色谱柱：依利特C18（200mm×4.6mm，5μm）、Shim-pack C18（150mm×4.6mm，5μm）、Phenomenex C18（250mm×4.6mm，5μm）、Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5μm）进行试验，结果表明，当选用Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5μm）时，氨甲环酸的峰形对称性较好，且能与相邻杂质峰完全分离。

综上所述，本方法准确、简便、专属性强、重复性好，可用于氨甲环酸缓释片中氨甲环酸的含量测定。根据本研究所用的测定方法及测定结果，结合生产实际，并参照《中国药典》2010年版（二部）对片剂的一般规定要求，拟订本品含量限度为：含氨甲环酸（C8H15NO2）应为标示量的90.0%～110.0%。

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Content Determination of Tranexamic Acid in Tranexamic Acid Sustained-release Tablets by RP-HPLC

WANG Qiong1，LI Jian-he2，TANG Yu-lan2，HU Yan2，QIU Xi-min1
（1.Medical College，Hunan Normal University，Changsha 410012，China；2.Dept.of Pharmacy，The Second Xiangya Hospital of Central South University，Changsha 410011，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of tranexamic acid in Tranexamic acid sustained-release tablets.METHODS：RP-HPLC method was adopted.The separation was performed on a Diamonsil C18column with mobile phase consisted of 0.23%sodium laurilsulfate-methanol（60∶40，V/V））at the detection wavelength of 220nm and the flow rate of 0.8mL/min.The column temperature was set at 30℃，and sample size was 20μl.RESULTS：The linear range of tranexamic acid were 0.5007-4.0056mg/ml（r＝0.9999）with an average recovery of 98.84%（RSD＝0.51%，n＝9）.RSDs of precision，stability and reproducibility tests were all lower than 0.26%.CONCLUSIONS：The method is accurate，simple，specific and reproducible，and can be used for the content determination of tranexamic acid in Tranexamic acid sustained-release tablets.

Tranexamic acid sustained-release tablets；RP-HPLC；Content determination

R917

A

1001-0408（2014）16-1522-03

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2014.16.29

＊硕士研究生。研究方向：药物分析。E-mail：lanling307@sina.com

#通信作者：副教授。研究方向：药物分析。E-mail：qiuximin123@163.com

2013-06-06

2014-03-09）