浙江丽水市男性肛门生殖器疣患者人乳头瘤病毒基因型研究

蒋卫平 张嵩韬 蒋慧玲 龚伟 吴绍芳 俞新民 宋欣

浙江丽水市男性肛门生殖器疣患者人乳头瘤病毒基因型研究

蒋卫平 张嵩韬 蒋慧玲 龚伟 吴绍芳 俞新民 宋欣

目的了解浙江丽水市男性肛门生殖器疣患者感染人乳头瘤病毒(HPV)基因型的分布状况。方法PCR-反向斑点杂交技术对150例男性肛门生殖器疣患者标本进行HPV基因分型,包括3种低危型HPV-6、11、43和16种中高危型HPV-16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304。结果150例男性肛门生殖器疣患者中91例(60.67%)检出HPV,其中有74例(81.32%)为低危型HPV-6、11、43的单一或多重感染,另有17例(18.68%)为中高危型的单一或多重感染。31例(34.07%)为多重感染(包括2～5种基因型混合感染),其中低危型合并中高危型的多重感染20例占64.52%,低危型之间的二重感染6例占19.35%; HPV-6、11合并中高危型感染分别为13例(41.94%)和6例(19.35%)。各HPV基因型感染136例,感染率从高到低依次为:HPV-6(39例,28.68%)、11(36例,26.47%)、16(11例,8.09%)、52(7例,5.15%)、53(7例,5.15%)、51(6例,4.41%)、58(6例,4.41%)和43(6例,4.41%)。结论男性生殖器疣患者HPV基因型感染中,低危型HPV感染占绝对优势,多重感染及各基因型的分布状况差异较大。

乳头状瘤病毒感染;生殖器;肛门;基因型

肛门生殖器疣(anogenital warts)大多为人乳头瘤病毒(HPV)感染引发的肛门和生殖器鳞状上皮疣状增生,属性传播疾病,主要与低危型HPV-11、HPV-6等的感染有关。为了解浙江丽水市男性肛门生殖器疣患者HPV感染的基因型及分布状况,建立相关数据库,我们进行了相关研究,报道如下。

一、对象

随机选取2011年9月15日至2013年10月31日来我院皮肤科就诊并初步诊断(症状及临床表现)[1]为肛门生殖器疣的男性患者150例,年龄15～86岁,平均年龄38岁;由主治及其以上职称皮肤科医师作出诊断,即男性患者的生殖器、会阴、肛门等部位出现丘疹,乳头状、菜花状或鸡冠状肉质赘生物,表面粗糙角化。在患者本人知情同意后,多点多部位采集疣体组织,移入装有保存液的瓶中,及时送实验室检测HPV基因型。

二、方法

1.试剂:中山大学达安基因股份有限公司生产的HPV基因分型检测试剂盒(PCR-反向斑点杂交技术[2-3])。

2.仪器:美国MJ Research公司的PTC-200 PCR扩增仪,上海精宏实验设备有限公司生产的DK2-2电热恒温振荡水槽。

3.HPV基因分型:HPV分型试剂盒包括16种中高危型HPV-16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304和3种低危型HPV-6、11、43,根据试剂盒说明书要求判断结果。

4.质量控制:①显色反应控制点呈阳性,说明杂交过程正常;②Globin位点呈阳性,表示采样、DNA抽提和PCR过程正常。若结果阴性,表示DNA抽提或PCR过程不成功,或未采集到疣体脱落细胞,该样品应重复实验或重新采样。

三、结果

150例男性肛门生殖器疣患者中,HPV阳性91例(60.67%),感染方式分为单一感染和多重感染(包括2～5种基因型混合感染),单一、二重、三重、四重和五重感染例数分别为60、22、5、3、1例;31例为多重感染,感染率为34.07%,二重感染率占70.97%。

150例患者中感染HPV基因型总数为136,感染率从高到低依次为:HPV-6(39例,28.68%)、11(36例,26.47%)、16(11例,8.09%)、52(7例,5.15%)、53(7例,5.15%)、51(6例, 4.41%)、58(6例,4.41%)和43(6例,4.41%),其他8种基因型感染数共18例,另有3种基因型HPV-18、31和56未检测到。

91例中,74例(81.32%)为低危型HPV-6、11、43的单一或多重感染,17例(18.68%)为中高危型的单一或多重感染。多重感染 31例中,低危型合并中高危型感染 20例(64.52%),低危型之间合并感染6例(19.35%,5例为HPV-6、11合并感染,1例为HPV-11、43合并感染)。HPV-6合并中高危型感染13例(41.94%),HPV-11合并中高危型感染6例(19.35%)。36例HPV-11感染中,单一感染24例(66.67%); 39例HPV-6感染中,单一感染21例(53.85%)。

四、讨论

我们运用PCR-反向斑点杂交技术对浙江丽水市150例肛门生殖器疣患者进行了19种HPV基因型检测,结果有91例阳性,阳性率为60.67%,将近40%呈阴性结果,究其原因我们认为可能有3点:①在男性肛门生殖器疣患者中,至少发现了30多种HPV基因型分布[4],可能是我们仅检测了19种基因型,未涵盖本地区该人群的实际感染型别;②虽然嘱临床医师多点多部位采集标本,以提高阳性检出率,但是也有可能没有采集到疣体组织脱落细胞或者细胞量过少导致假阴性结果;③由非HPV感染形成的疣状物,如阴茎珍珠状丘疹、扁平湿疣、鲍恩样丘疹病、鳞状细胞癌及皮脂腺增生等[1]。Giuliano等[4]研究了来自巴西、墨西哥和美国的1 160例男性,结果HPV总感染率为65.2%,其中巴西、美国和墨西哥HPV感染率分别为72.3%、61.3%和61.9%。Partridge等[5]研究了美国华盛顿大学240例男性学生,其累积HPV感染率为62.4%。我们认为,由于各国、各地区的生活习俗、卫生状况、性行为方式、研究对象以及检测方法的不同,各地报道的男性HPV感染率也存在差异。

浙江丽水市男性肛门生殖器疣150例中感染HPV基因型总数为136,感染率从高到低依次为:HPV-6、11、16、52、53、51、58和43,其他8种基因型感染数不足5例,另有3种基因型未被检测到。HPV-6、11单一感染分别为 21例 (53.85%)和24例(66.67%)。Potocnik等[6]检测了55例男性生殖器疣的组织样本,分别检测到HPV-6、11、16、31、51、53、55、62、66、70、73和84,其中HPV-6、11占96.4%,HPV6大约是HPV11的4倍。Chan等[7]在中国香港对130例肛门生殖器疣样本进行研究,各基因型感染依次为HPV-6、11、39、51、52、55、59、61、62、68、58、72、81、83、84和CP6108,63.1%的病例只有HPV-6和(或)HPV-11感染,26.2%有HPV-6和(或)HPV-11感染的同时合并一种或多种其他HPV基因型。非HPV-6、11感染的样本占10.8%。

HPV在丽水市男性肛门生殖器疣患者中的感染方式分为单一感染和多重感染(包括2～5种基因型混合感染)。我们研究对象的多重感染率为34.07%,70.97%为二重感染,低危型合并中高危型的多重感染占64.52%,19.35%为低危型之间的合并感染。Giuliano等[4]检测的巴西、墨西哥和美国1 160例男性HPV感染者中,25.7%为HPV多重感染,17.8%为低危型和高危型的共同感染。Chan等[7]发现26.2%的病例有HPV-6和(或)HPV-11感染的同时合并一种或多种其他HPV基因型,HPV-16、18大多(66.7%)是以共同感染HPV-6、11的形式存在。Hadjivassiliou等[8]运用杂交捕获2代(HC2)微量板法检测了550例男性生殖器疣和64例非生殖器疣样本,前者有16.4%为低危型和高/中危型的合并感染,后者有15.4%是二重感染。丽水市男性肛门生殖器疣患者中,多重感染的比率相对较高(34.07%),大部分为二重感染(70.97%),低危型合并中高危型的多重感染占64.52%, HPV-6、11合并中高危型感染分别占41.94%和19.35%。

[1]韩国柱.尖锐湿疣∥赵辨.中国临床皮肤病学[M].南京:江苏科学技术出版社，2010:1816-1821.

[2]黄庆，府伟灵，周玉，等.基因芯片对人乳头瘤病毒的快速检测和分型[J].中华医院感染学杂志，2005，15(4):476-478.

[3]杨光，梁彩红，崔金环，等.人乳头瘤病毒基因分型芯片的建立及其在临床中的应用[J].中华流行病学杂志，2006，27(1):47-49.

[4]Giuliano AR，Lazcano-Ponce E，Villa LL，et al.The human papillomavirus infection in men study:human papillomavirus prevalence and type distribution among men residing in Brazil，Mexico，and the United States[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2008，17(8):2036-2043.

[5]Partridge JM，Hughes JP，Feng Q，et al.Genital human papillomavirus infection in men:incidence and risk factors in a cohort of university students[J].J Infect Dis，2007，196(8):1128-1136.

[6]Potocnik M，Kocjan B，Seme K，et al.Distribution of human papillomavirus(HPV)genotypes in genital warts from males in Slovenia[J].Acta Dermatovenerol Alp Panonica Adriat，2007，16 (3):91-96，98.

[7]ChanPK，LukAC，LukTN，etal.Distributionofhumanpapillomavirus types in anogenital warts of men[J].J Clin Virol，2009，44(2): 111-114.

[8]Hadjivassiliou M，Stefanaki C，Nicolaidou E，et al.Human papillomavirus assay in genital warts--correlation with symptoms[J].Int J STD AIDS，2007，18(5):329-334.

2013-11-14)

(本文编辑:颜艳)

Genotyping of human papillomavirus in male patients with anogenital warts in Lishui area,Zhejiang province

Jiang Weiping*，Zhang Songtao，Jiang Huiling，Gong Wei，Wu Shaofang，Yu Xinmin，Song Xin.*Department of Clinical Laboratory，Lishui Central Hospital，Lishui 323000，Zhejiang，China

Jiang Weiping，Email:jwp225@126.com

ObjectiveTo investigate the distribution of human papillomavirus(HPV)genotypes in male patients with anogenital warts in Lishui area，Zhejiang province.MethodsTissue specimens were obtained from the lesions of 150 male patients with anogenital warts.PCR-reverse dot blot hybridization was performed to detect the presence of 3 low-risk HPV types(HPV 6，11，and 43)and 16 moderate-or high-risk HPV types(HPV 16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68 and CP8304)in these specimens.Chi-square test was used for statistical analysis.ResultsHPV was detected in 91(60.67%)of the 150 male patients.Of the 91 positive patients，74(81.32%)were infected by single or multiple low-risk HPV types，whereas 17(18.68%)by single or multiple high-risk HPV types.Thirty-one(34.07%)patients harbored 2-5 HPV genotypes，including 20(64.52%) patients infected with both low-risk and high-risk HPV types，and 6(19.35%)patients infected with two low-risk HPV types.The coexistence of moderate-or high-risk HPV types with HPV 6 was observed in 13(41.94%) patients，and that with HPV 11 in 6(19.35%)patients.The most prevalent genotype was HPV 6(28.68%，39/136)，followed by HPV 11(26.47%，36/136)，16(8.09%，11/136)，52(5.15%，7/136)，53(5.15%，7/136)，51(4.41%，6/136)，58(4.41%，6/136)and 43(4.41%，6/136).ConclusionsLow-risk HPV genotypes predominate in male patients with anogenital warts，and there are large differences in the distribution of multiple infections and HPV genotypes.

Papillomavirus infections;Genitalia;Anus;Genotype

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2014.10.017

323000浙江省丽水市中心医院检验科(蒋卫平),小儿科(蒋慧玲),病理科(龚伟),皮肤科(吴绍芳、俞新民、宋欣);浙江省丽水市莲都区人民医院中药房(张嵩韬)

蒋卫平,Email:jwp225@126.com