气相色谱法测定盐酸左氧氟沙星原料药中有机溶剂三氯甲烷残留

祁彩霞，杨发胜

(1．陕西金裕制药股份有限公司，陕西 西安 710075;2．西安利君精华药业有限责任公司，陕西 西安 710075)

盐酸左氧氟沙星为第3代喹诺酮类抗菌药物，是氧氟沙星的左旋体，抗菌活性是氧氟沙星的2倍，具有抗菌谱更广、抗菌作用更强、安全性更高的特点，临床广泛用于呼吸系统、胃肠道、泌尿道、口腔科及妇科等领域的感染。盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液的主要原料盐酸左氧氟沙星在合成过程中需使用三氯甲烷、乙醇和二甲基亚砜，对于后两种残留溶剂较易检测，而三氯甲烷沸点低，含有卤素原子，且属于一类溶剂，限度为0．006%，根据2010年修订版《药品生产质量管理规范》(GMP)和药典规定“应该避免使用”[1]。因此，三氯甲烷成了质量控制的重点。经过大量试验[2-3]，笔者建立了检测产品中三氯甲烷的气相色谱法并进行了方法学验证，报道如下。

1 仪器与试药

GC7890II型气相色谱仪(上海天美科学仪器有限公司);DK-3001A型顶空进样器(北京中兴汇利科技发展有限公司)，Sartorios CP2250D型电子天平;KQ5200型超声波清洗器。盐酸左氧氟沙星原料药(上虞京新药业有限公司，批号为DK20-1111264，DK20-1201124，DK20-1203162)。三氯甲烷对照品(天津科密欧色谱标样，含量99．0%，5 mL/支，批号为20120605);乙醇对照品(天津科密欧色谱标样，含量99．7%，5 mL/支，批号20100713);注射用水为溶剂。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱:天美 TM-1非极性毛细管柱(30 m×0．25 mm，0．25 μm);检测器:氢火焰离子化检测器(FID);进样口温度:200℃;检测器温度:250℃;柱温:40℃;载气:N2;分流比:10∶1;顶空瓶平衡温度:80℃，维持30 min，进样量:1 mL。

2．2 溶液制备

精密吸取注射用水5 mL，用气相进样针吸取三氯甲烷对照品1 mL置顶空瓶中，摇匀，密封瓶口，作为三氯甲烷的定位溶液，同法制备乙醇的定位溶液;以注射用水为空白溶液。取盐酸左氧氯沙星原料药约1．50 g，精密称定，置顶空瓶中，精密加水5 mL，使样品溶解，摇匀，密封瓶口，作为供试品溶液。根据《中国药典(二部)》附录ⅧP残留溶剂限度规定(三氯甲烷0．006%，乙醇0．5%)和供试品的取样量，确定配制对照品溶液的质量浓度。精密称取三氯甲烷和乙醇对照品适量，置同一容量瓶中，用水稀释成每1 mL中含三氯甲烷约0．018 mg、乙醇约1．5 mg的溶液，再精密吸取5．0 mL，置顶空瓶中，密封瓶口，作为对照品溶液。

2．3 方法学考察

系统适用性试验:按2．1项下色谱条件，取空白溶液、定位溶液、对照品溶液及供试品溶液，分别顶空进样测定。结果见图1。

线性关系考察:精密称取三氯甲烷和乙醇对照品适量，置同一容量瓶中，用水稀释成每1 mL中含三氯甲烷约0．18 mg、乙醇约15 mg的混合溶液，再分别精密量取此混合溶液适量，加水稀释制成每 1 mL 中约含三氯甲烷 0．018，0．036，0．072 mg 和乙醇1．5，3．0，6．0 mg 的溶液，分别精密吸取 5 mL 置顶空瓶中，密封瓶口，作为线性关系试验溶液。按2．1项下色谱条件进样，测定峰面积，以质量浓度为纵坐标、相应的峰面积为横坐标绘制曲线。得三氯甲烷回归方程 Y1=(3．51 E-005)X1(r1=0．999 0)，进样质量浓度线性范围为 0．018～0．18 g/L;乙醇回归方程 Y2=(1．68 E-005)X2(r2=0．999 5)，进样质量浓度线性范围为 1．5 ～15 g/L。

检出限确定:以信噪比为3∶1，依法检测。结果三氯甲烷和乙醇的检出限分别为0．016 mg和0．078 mg。

精密度试验:取同一份线性关系试验溶液(含三氯甲烷0．018 g/L，乙醇 1．5 g/L)，连续进样 5 次。结果以主峰峰面积计算，三氯甲烷的 RSD为 6．92%(n=5)，乙醇的 RSD为 5．45%(n=5)，完全符合药典外标法测定的规定。

加样回收试验:精密称取同一批原料药(批号为DK20-1209101)5份，每份取约1．5 g，精密称定，置顶空瓶中，分别精密加入线性关系试验溶液(含三氯甲烷0．018 g/L，乙醇1．5 g/L)5 mL，混合使样品充分溶解，密封瓶口，在2．1项下色谱条件下测定含量，计算回收率。结果三氯甲烷和乙醇的平均加样回收率分别为85%和95%，RSD分别6．35%和7．74%(n=5)。对于三氯甲烷和乙醇这种易挥发的有机溶剂，回收率能达到80%以上，就是非常理想的检测结果。

2．4 样品含量测定

取盐酸左氧氟沙星原料药(上虞京新药业有限公司)，按2．2项下方法配制供试品溶液，在2．1项下色谱条件下测定，按外标法计算三氯甲烷和乙醇的含量(三氯甲烷不超过0．006%，乙醇不超过 0．5%)。结果批号为 DK20-1111264，DK20-1201124，DK20-1203162的3批样品中均未检出三氯甲烷和乙醇。

3 讨论

先后选择非极性毛细管柱Agilent DB-1及AT-1、天美TM-1作为色谱柱，预试验结果显示，天美TM-1色谱柱对三氯甲烷和乙醇的分离效果最佳，故选择天美TM-1。三氯甲烷为含卤素原子的有机溶剂，用ECD检测器时灵敏度较高，但考虑到同一样品的残留溶剂三氯甲烷和乙醇要用2个系统，为经济、环保，选择应用范围广泛的FID检测器。对于测定方法，选择2010年版《中国药典(二部)》附录ⅧP第一法毛细管柱顶空进样等温法。

盐酸左氧氟沙星极易溶于水，故以水为溶剂。依据2010年版《中国药典(二部)》附录ⅧP的规定，以水为溶剂时采用顶空进样，水的沸点为100℃，顶空平衡温度应低于溶剂的沸点10℃以下的原则，再根据乙醇的沸点为78．3℃，三氯甲烷的沸点为61．2℃，先后选择顶空瓶平衡温度为60，80℃;流速为1，2 mL/min为气相色谱基础条件进行试验。基于峰形、灵敏度和稳定性的考虑，最终确定用顶空瓶平衡温度80℃、流速1 mL/min作为原料药日常检验的方法。

根据2010年版《中国药典(二部)》附录ⅧP规定，毛细管柱的理论板数一般不低于5 000，分离度应大于1．5，待测峰面积的RSD应不大于10%[3]。采用文中建立的方法，2次试验中理论板数都在50 000以上(是药典规定的10倍)，分离度均在14以上(接近药典规定的10倍)，对照品溶液连续进样5次所得待测物峰面积的 RSD在6% ～7%(如果实验室温度恒定，RSD不超过3%)，完全符合药典规定。

本试验中建立的气相色谱法，用于测定盐酸左氧氟沙星原料药中三氯甲烷的残留，方法简便快捷、专属性好，可作为生产企业或质量控制部门检测水溶性好的原料药类产品中残留溶剂三氯甲烷。

[1]国家食品药品监督管理局药品认证管理中心．药品GMP指南[M]．北京:中国医药科学出版社，2011:129．

[2]伍良勇，寥泰星．GC法测定深海鱼油软胶囊中EPA和DHA的含量[J]．中国药品标准，2011，12(5):357-360．

[3]国家药典委员会．中华人民共和国药典(二部)[M]．北京:中国医药科学出版社，2010:附录ⅤE，附录ⅩⅨF．