高效液相色谱法测定利鲁唑片有关物质及含量

陈 杰，李 展

(河南省食品药品检验所，河南 郑州 450003)

利鲁唑为谷氨酸盐拮抗剂，可抑制脑内神经递质的释放，对谷氨酸能神经突触传递有抑制作用，并抑制γ氨基丁酸(GABA)、多巴胺、谷氨酸的再摄取;还可明显抑制兴奋性氨基酸的活性;可稳定电压依赖性钠通道的失活状态，具有明显的神经保护作用。其主要用于运动神经元疾病的治疗。目前，国内共有3家企业生产利鲁唑片，其有关物质测定方法均为高效液相色谱(HPLC)法，色谱条件及测定方法有一定差异[1-3];含量测定方法均为紫外光光(UV)外标法。笔者参照USP33[4]，以原研产品为基础，征集这3家企业共9批样品，在进行质量研究并比对质量的基础上，建立有关物质及含量测定的HPLC测定方法。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪(美国Waters公司);AX205型电子天平(Metler公司)。利鲁唑对照品(含量99．1%，鲁南制药股份有限公司);力如太(规格为每片50 mg，AventisPharmas公司，批号为H112405);乙腈为色谱纯。

2 方法与结果

2．1 有关物质测定

2．1．1 色谱条件

色谱柱:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Agilent TC-C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相:乙腈 -水(9 ∶11);检测波长:221 nm;流速:1．0 mL/min。理论板数按利鲁唑峰计算不得低于2 000。

2．1．2 溶液制备

取本品研成细粉，精密称取细粉适量，加流动相制成每1 mL中约含500 μg的溶液，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液1 mL，置100 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

2．1．3 测定方法

取对照溶液10 μL，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至供试品溶液主峰的保留时间的3倍。

2．1．4 方法学考察

专属性试验:取本品适量，分别进行酸破坏(5 mol/L HCl)、碱破坏(0．5 mol/L NaOH)、氧化破坏(2%H2O2)、热破坏(100 ℃水浴破坏)和光破坏(照度3 000 lx，7 d)试验。结果见图1。表明拟订的色谱条件能有效分离破坏后降解产物。

检出限确定:取对照溶液，逐级稀释，按拟订的色谱条件进行测定。结果检出限为0．32 ng。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，8，12 h时依法测定，有关物质检测结果基本一致，表明用流动相稀释制备的供试品溶液稳定性良好。

图1 专属性实验色谱图

2．1．5 样品检测

取征集的各企业产品及原研产品，按拟订的方法检测。各企业产品原有关物质检测方法见表1，检测结果见表2。

表1 各厂家利鲁唑片有关物质测定方法比较

表2 各企业产品有关物质测定结果(%)

2．2 含量测定

2．2．1 色谱条件

色谱柱及流动相:同有关物质测定方法;检测波长:254 nm;流速:1．0 mL/min;进样量:10 μL。理论板数按利鲁唑峰计算不得低于2 000。

2．2．2 溶液制备

取本品研成细粉，精密称取细粉适量，加流动相制成每1 mL中约含50 μg的溶液，作为供试品溶液。取利鲁唑对照品适量，同法制成相同质量浓度的对照品溶液。

2．2．3 方法学考察

加样回收试验:分别取利鲁唑对照品8，10，12 mg各3份，分别加适量的辅料(磷酸氢钙、微晶纤维素、微粉硅胶、硬脂酸镁、交联聚维酮K30、羧甲淀粉钠)，依法制成供试品溶液，测定含量，计算回收率。结果平均回收率为99．98%，RSD=0．35%(n=9)。

精密度试验:取回收试验中由10 mg利鲁唑对照品溶液制备的同一份供试品溶液，连续进样6次。结果峰面积的 RSD=0．41%(n=6)。

线性关系考察:取利鲁唑对照品 5，8，10，12，15 mg，依质量法制成对照品溶液并测定，以利鲁唑质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，回归方程为 Y=28 439 X-796．55，R2=0．9998(n=5)。结果表明，利鲁唑进样量线性范围为0．25 ～0．75μg。

2．2．4 样品含量测定

取各企业产品及原研产品，按拟订方法进样测定，并与采用UV法测定结果比较。结果见表3。

表3 各企业产品利鲁唑含量测定结果

3 讨论

国内3家生产利鲁唑原料的企业，生产工艺各不相同，产品晶型和杂质各不相同。本试验中统一了利鲁唑片的有关物质测定方法，经试验比对，与其他3种色谱体系相比，拟订方法对杂质的分离度更好，与原方法相比增加了单杂的控制。由于检测波长改为221nm，加大了供试品溶液质量浓度，因此杂质峰检出更多，总杂检出值更大。

与原方法相比，含量测定改为HPLC法后含量测定结果下降约2%，分析原因可能是原方法受到来自辅料及杂质的干扰所致。HPLC法测定含量，不仅提高了方法专属性，且排除了原料中杂质的干扰。

[1]YBH13482004，国家药品标准[S]．

[2]YBH17352004，国家药品标准[S]．

[3]YBH16452005，国家药品标准[S]．

[4]The Vnited states Pharmacopeial convention．U．S．Pharmacopeial 33-NF28[S]．Washington:The Broad of Trusfees，2010:2 124-2 125．