儿童肺炎支原体检测方法的研究进展

业晓青

（南京市江宁医院儿科，江苏南京211100）

儿童肺炎支原体检测方法的研究进展

业晓青

（南京市江宁医院儿科，江苏南京211100）

呼吸道感染是临床常见疾病，病死率高，WHO2008年公布低收入国家下呼吸道感染病死率达11.2%，排十大疾病死因第一位，中高收入国家，病死率为3.8%，位居十大疾病死因的第四位［1］。支原体肺炎是机体感染肺炎支原体而引起的肺部炎症，近年支原体肺炎的发病率出现逐年递增趋势［2］。肺炎支原体是常见的引起儿童呼吸道感染的病原体之一［3］，导致儿童社区获得性肺炎（CAP）［45］。肺炎支原体引起的儿童肺炎病例在小儿呼吸道感染疾病中超过30%，发病有局部流行特点。由于初期临床表现为非特异性症状，不易鉴别而被忽视造成累及多系统、器官损害的并发症，严重影响患儿生命健康。实验室指标检查是诊断衣原体感染的可靠依据。为加深对肺炎支原体的认识，现将儿童肺炎支原体临床检测的研究进展作一综述。

1 肺炎支原体

支原体（Mycoplasma）是介于病毒和细菌之间的可以在无生命人工培养基中繁殖培养的一类缺少合成肽多糖基因的原核微生物，由蛋白质和脂质组成三层结构，中间层是脂质，内外两层是蛋白质，形成有分支的长丝，故于1967年称之支原体，直径0.2－0.3mm，极少超过1.0mm［6］。支原体广泛存在于自然界，有60余种，有的支原体细胞膜外由多聚糖构成有毒性的荚膜，是支原体的致病因素。对人致病的支原体有人型支原体、肺炎支原体、穿透支原体及解脲支原体［7］。肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，MP）是Nocard和Roux于1898年首次从牛的肺组织中分离培养发现的病原体［8］，1941年首次在非典型肺炎病人体内发现肺炎支原体［9］，无细胞壁，存在于病人的鼻腔、口腔和气管粘膜，人与人之间经飞沫或气溶胶传播，潜伏期一般为1－3周，5－15岁儿童易感染，主要表现为上呼吸道感染、气管支气管炎以及非典型肺炎，无地区分布特点，以温带地区常见［10］。美国文献报道显示肺炎支原体感染率介于2%－35%，有周期性特点，每隔4－7年有一次流行，5－9岁儿童感染肺炎支原体后发展为肺炎的机会远远高于15－19岁青少年［11］。我国徐作军对肺炎支原体流行病学特点的有一完整描述：肺炎支原体全球范围存在，一般为散发，3－6年可发生地区流行，人群密集地区集中发病；我国肺炎支原体引起的肺炎发病率高于国外地区；在中国，肺炎支原体肺炎有季节性特点，秋冬季发病率高；青壮年多发肺炎支原体肺炎［12］。国内研究结果发现，散发年份，肺炎支原体感染是儿童肺炎病原的10%－20%，流行年则可达到30%以上［13］。

2 发病机理及临床表现

肺炎支原体主要侵犯人体呼吸系统，病理表现间质性或局灶性肺炎，常位于右肺下叶，累及多肺叶和胸膜，引起咽炎、气管炎、支气管炎和肺炎［14］。

肺炎支原体感染引起的儿童肺炎大部分为5－15岁的少年，偶然可能会在5岁以下儿童中发生。患儿初期症状不明显，2－3周后症状加重，表现为干咳、严重者伴有喘息和呼吸困难，少数患病儿童肺炎发展迅速，发生呼吸衰竭或急性呼吸窘迫综合征而死亡［15］。另有研究报道，肺炎支原体感染也许是哮喘发生、发展的风险因素。考虑肺炎儿童自身对肺炎支原体来说是敏感人群，肺炎支原体具备促进呼吸道炎症，加重哮喘症状以及延长其病程［16－17］。

3 实验室检测

肺炎支原体感染的肺炎近年发病率持续升高，耐药性不断增加，探讨早期、快速检测肺炎支原体方法非常重要。临床检测肺炎支原体的方法有培养法、血清学检测和分子生物学技术。目前普遍采用的肺炎支原体分离培养与血清学方法敏感性差，特异度低，试验时间长，常出现假阴性结果。PCR诊断技术具有较高的灵敏度和特异度，为建立可靠快速的肺炎支原体早期检测提供了可能。

3.1 培养法

采集临床疑似患儿的咽拭子、痰、胸腔积液和肺泡冲洗液做标本，选择疑似菌落超高倍显微镜做肺炎支原体活体检测。肺炎支原体分离培养是检测病原体的方法之一，方法操作简单，但临床标本的病原体含量少，分离培养时间耗时长，一般为3－4周时间，阳性结果灵敏度低，早期诊断价值小［18］。

3.2 血清学检测

血清学检测是临床常用作诊断肺炎支原体感染的方法之一，包括抗原检测和抗体检测两类方法。抗原检测法主要包括直接免疫荧光法、对流免疫电泳法、蛋白质印迹法和抗原捕获酶联免疫分析方法；抗体检测方法中的酶联免疫吸附试验和明胶颗粒凝集试验方法应用广泛。相对于抗体检测肺炎支原体感染，抗原检测方法灵敏度低，容易与呼吸道其他支原体出现交叉反应，临床应用受限，故临床抗体检测应用普遍［19］。目前临床研究进展显示血清学特异性抗体检测是诊断肺炎衣原体感染的主要手段［20］。现介绍几种临床常用的血清学检测方法。

3.2.1 血清冷凝集试验（Cold agglutination test，CAT） 是肺炎支原体感染时最早的一种体液反应，一般发生在感染肺炎支原体的一周后期或第二周前期，血清冷凝集效价升高。临床常作为诊断肺炎支原体感染的传统血清学检测方法，因为操作方法简单，基层医院可作为有参考价值的诊断方法。但该方法的灵敏度和特异度不高，不能作为肺炎支原体感染的确诊指标［21－22］。

3.2.2 酶联免疫吸附试验（Enzyme Immunoassay，ELISAFA法） 上世纪80年代发明，常用作肺炎支原体抗体检测。原理是采用吸附于载体表面的抗原，与血清中的相应抗体结合形成免疫复合物，与酶标记的第二抗体结合发生免疫反应，借助酶的降解作用显示的不同颜色作出诊断。该方法试验过程需要1小时，对实验室条件没有养要求，临床较容易开展。缺点就是检测结果受年龄、疾病病程，机体免疫功能及试剂盒不同等方面的影响，故不能对肺炎支原体早期诊断提供有力依据［23－24］。

3.2.3 明胶颗粒凝集法（PA） 将待检标本血清稀释，加入明胶致敏颗粒混匀，检测其结果。该试验方法操作简单、方便快捷，血清抗体特异度高，无假阳性结果，符合率高，是临床早期诊断衣原体肺炎感染的特异性方法之一，是支原体肺炎实验室诊断的常规检测方法［25］。

3.2.4 血清学检测结果不能避免患儿的假阳性和假阴性问题，感染肺炎支原体肺炎的儿童，临床治疗治愈后体内仍存有一定强度的抗体滴度，接受抗体检测时会出现假阳性；或者免疫缺陷不产生抗体的患儿，或免疫力低下的儿童自身抗体滴度低，检测结果出现假阴性而失去临床治疗的机会［2627］。所以对于免疫系统发育未成熟或存在免疫缺陷的儿童病例，血清学检测有一定的局限性。

3.3 分子生物学诊断技术

1985年PCR诊断技术问世以来，广泛应用于生物学的各领域［28］。该诊断技术的标本采集及培养的过程大概需要2个小时，能够检测出患儿咽喉分泌物里的支原体DNA，文献报道采用PCR技术检测标本中的肺炎支原体，140例标本中30例标本PCR试验阳性，其中21例肺炎支原体抗体阴性，有较高的灵敏度，并且实验时间短［26］，检测病原体表现出的快速简单，灵敏度、特异度高的优点，远远强于其他检测方法，具有较高的临床价值，可作为早期诊断肺炎支原体感染的方法［29］。张晓波等采用荧光定量法PCR技术检测肺炎支原体，发现该方法针对免疫系统发育未成熟的患儿具有一定诊断价值，但是单独诊断的准确率低于血清学检测结果［3032］。如果从鼻咽、口咽处同时取标本做PCR检测，诊断结果更可靠［33］。带痰患儿的痰标本PCR阳性率高于鼻咽标本的PCR阳性率，临床诊断下呼吸道感染情况更敏感［34］。但是PCR诊断技术操作复杂，所使用的一起设备较昂贵，基层医院和一般实验室开展不了该技术工作。

4 展望

综上所述，肺炎支原体感染诊断方法很多，并各有其优点和不足。临床选择合适的实验检测方法，能够早期快速诊断肺炎支原体感染，及时提供准确的治疗方案，减少并发症及耐药菌的产生。目前临床针对患者症状体征和具体用药方案选择PCR生物技术联合血清学方法检测肺炎支原体是较可靠的诊断方法。专家学者也在不断研究新的肺炎支原体感染诊断检测方法，随着科学技术的发展，进一步加深了解肺炎支原体发病机理和耐药机制，不断更新检测技术，肺炎支原体的实验室检测方法将会具备更加早期、快速，特异性强、高效的特色。

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业晓青（1969－），女，江苏人，本科，副主任医师，长期从事儿内科的研究临床工作。

2013－11－14）

1007－4287（2014）10－1729－03