强直性脊柱炎患者血清IL⁃27水平的测定及临床意义

林滇恬，李晓琳，齐晨越，袁琳，夏丽萍，沈晖，鲁静

（中国医科大学附属第一医院风湿免疫科，沈阳 110001）

强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是一种慢性炎性疾病，主要侵犯骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织及外周关节。临床主要表现为腰、背、颈、臀、髋部疼痛以及关节肿痛，严重者可发生脊柱畸形和关节强直，影响人们健康和生活质量。到目前为止尚没有有效的治疗方法，特别是以中轴受累为主的AS患者治疗效果更不理想。因而，如何针对AS病因的靶向治疗成为国内、外学者普遍关注又亟待解决的难题。现已证实［1］AS的发病和HLA⁃B27密切相关，并有明显家族聚集倾向。近年来对于AS免疫异常方面的发病机制研究非常活跃，有研究［2］发现多种细胞因子参与了疾病的发生发展。白细胞介素27（interleukin⁃27，IL⁃27）作为IL⁃12家族的成员之一，是由EB病毒诱导蛋白3（EBV induced pro⁃tein 3，EB3）和P28亚基组成的异二聚体细胞因子［2］，通过独特的IL⁃27Rα细胞（WSX ⁃1/T）和T细胞细胞因子受体（T cell cytokine receptor，TCCR）组成的受体复合物与gp130进行信号转导［3］。因此，IL⁃27与IL⁃12家族的其他成员的受体在结构上以及参与Th1细胞反应的调控中有相似性［4］，但在发挥调节NK细胞活性、T细胞增殖和细胞因子产生以及抗体类别转换等方面的功能相互重叠但又不完全相同。有报道［5～7］指出，IL⁃27可通过调控细胞的信号转导来抑制某些自身免疫性疾病。Gabay等［4］报道IL⁃27在系统性红斑狼疮（systemic lupus erythemato⁃sus，SLE）患者外周血中水平较低；Shen等［6］报道IL⁃27在类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）患者发病过程中起着重要作用；Xia等［7］报道IL⁃27在原发性干燥综合征（primary Sjogren’s syndrome，pSS）患者血清中明显增高。但IL⁃27在AS发病中的作用如何至今未见报道。本项研究通过检测AS患者血清中的IL⁃27水平，并与疾病活动度及炎性指标比较，探讨其在AS中的临床意义，为AS的靶向治疗药物的研究提供试验和理论依据。

1 材料与方法

1.1 对象

选取2010年8月至2012年4月在中国医科大学附属第一医院风湿免疫科住院及门诊AS患者90例，所有患者均符合修订的纽约标准（1984年）。其中男72例，女18例，年龄15～67岁，平均（32±10）岁。并同期收集健康对照者30名，其中男22例，女8例，年龄16～65岁，平均（30±14）岁。入选患者均排除感染、肿瘤及其他风湿性疾病，在年龄、性别上与实验组无统计学差异（P＆gt;0.05）。同时记录及检测AS患者有无髋关节受累、有无外周关节炎及眼受累，红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR）、C⁃反应蛋白（C reactive protein，CRP）、人体组织相容性抗原 B27（human leucocyte antigen⁃B27；HLA⁃B27）、完成Bath强直性脊柱炎疾病活动指数（Bath AS disease activity index，BASDAI）调查表并记录用药情况。该研究经过中国医科大学附属第一医院伦理学委员会批准，患者均已知情同意并签订知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 血清IL⁃27水平测定：清晨采集AS患者及健康对照组患者空腹静脉全血，自然凝固后3 000 r/min离心5 min，分离血清，分装后于-80℃低温冰箱保存，应用ELISA检测血清IL⁃27水平。IL⁃27试剂盒购自美国R＆D公司，按照试剂盒中说明书的步骤进行操作。用酶标仪检测450 nm处的吸光度（A）值，建立标准曲线，根据标准曲线计算样本IL⁃27浓度。

1.2.2 HLA⁃B27检测：采用流式细胞仪方法检测。仪器及试剂HLA⁃B27检测试剂盒均购自BD公司。取EDTA抗凝全血标本（50 μL）加10 μLHLA⁃B27抗体标记，均加入12 mm×75 mm试管中，混匀，室温避光孵育15 min后，直接将试管放入标本前处理样本台上，用全血溶解试剂，裂解红细胞。设置阴性对照：除抗体改为标记小鼠外，其余步骤同上。充分洗涤固定后上机检测。

1.2.3 其他实验室指标检测：ESR采用魏氏法，CRP采用免疫比浊法，均由中国医科大学附属第一医院检验中心检测。

1.3 统计学处理

所得数据采用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析，结果以±s表示，组间比较采用t检验，相关分析采用Spearman相关性分析，以P＆lt;0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 AS患者与健康对照组血清IL⁃27水平比较

AS患者血清IL⁃27水平为（603.4±76.2）pg/mL，健康对照组患者为（63.4±5.9）pg/mL。AS患者血清IL⁃27水平明显高于健康对照组（P＆lt;0.001）。

2.2 AS患者血清IL⁃27水平与BASDAI、ESR、CRP相关性分析

在AS患者中髋关节受累24例，外周关节受累28例，眼部受累12例；HLA⁃B27阳性者有76例。AS患者BASDAI均数为5.5±0.2，其中77例≥4，13例＆lt;4。AS患者ESR（33.7±2.8）mm/h，CRP（25.6±2.5）mg/L。AS患者血清IL⁃27水平与疾病活动指数及炎性指标相关分析显示，AS患者血清IL⁃27水平与BAS⁃DAI、ESR及CRP水平均呈明显正相关（r分别为0.306、0.299、0.218，P分别为0.003、0.004、0.040）。

3 讨论

AS是一种病因未明的慢性自身免疫性疾病，与遗传因素和环境因素关系密切。如早期得不到及时的诊断及有效治疗，极易造成关节的功能障碍、关节强直，丧失工作和生活自理能力，致残率高，严重影响患者的身心健康。因此，关于AS病因、发病机制的研究备受关注。目前研究表明，多种细胞因子参与了AS的发病，其中肿瘤坏死因子α（tumor ne⁃crosis factor⁃α，TNF⁃α）、IL⁃17等多种细胞因子在AS的发病过程中起着重要作用［8，9］。IL⁃27在AS疾病中的作用如何，目前未见报道。

IL⁃27主要是由抗原提呈细胞产生，是IL⁃12家族的新成员，在免疫反应的调节中，具有促进炎性和抑制炎性的双重作用［10］，一方面IL⁃27可以诱导naïve T 细胞向Th1方向分化，促进其IFN ⁃γ的产生［11］，通过激活细胞毒性T淋巴细胞，起到抗病毒和抗肿瘤的效果；另一方面，IL⁃27也可以抑制Th2型和Thl7型免疫反应。在我们的研究中发现在AS患者血清中IL⁃27水平明显增高，但其增高的机制还不清楚。目前认为，Th17细胞与Th1细胞在AS的发病中起着重要作用。有研究报道，在Ⅱ型胶原诱导关节炎小鼠模型中，IL⁃17可诱导IL⁃27的表达增多［12］。我们推测在AS发病过程中IL⁃27增高可能通过以下途径：（1）在AS发病过程中由于Th17增多，IL⁃17分泌增加，诱导IL⁃27的产生增多；（2）通过刺激Th1细胞的免疫应答和IFN⁃γ与幼稚T细胞的表达，上调内皮细胞TNF⁃α和IL⁃1β受体和免疫调节相关的基因，刺激成纤维样滑膜细胞对趋化因子（如CXCL9、CX⁃CL10、CX3CL1）的表达，影响黏附分子抑制剂的表达和细胞趋化因子的释放，从而导致了免疫炎性反应。

目前研究表明，IL⁃27与多种风湿免疫性疾病的发病有关，且RA患者血清中IL⁃27的浓度增高，并与疾病活动度相关［6］。我们的研究结果显示在AS患者血清中IL⁃27水平与炎症指标ESR、CRP及BASDAI呈正相关，与上述报道一致，进一步说明IL⁃27在AS的发病中起着一定的作用，也有可能成为评价AS疾病活动度的一个新的生物学标志物。

关于AS的治疗，特别是针对以中轴受累为主的AS患者的治疗困扰着广大风湿科医生。目前主要采用非甾体抗炎药及抗风湿病慢作用药，但疗效不佳，对AS的致残率没有明显的改善。近年来先后出现针对TNF⁃α及IL⁃6为靶点的生物制剂，使AS的治疗和预后有了明显的改善，但仍有一部分AS患者疗效甚微，甚至无效。我们的研究结果显示IL⁃27有可能是AS发病中一个重要的细胞因子。因此，IL⁃27可能成为一个AS治疗的新靶点。

综上所述，IL⁃27在AS患者血清中明显增高，但在AS发病中的作用如何还不清楚，仍需要进一步研究，特别是利用IL⁃27或干预IL⁃27R/STAT信号转导途径方面的研究，为其临床应用开启新的篇章。

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