酒精肝造模过程中的酒质对体重变化的影响

王晓琳 陈小兰 胡先福 南清振 陈楚弟

酒精肝造模过程中的酒质对体重变化的影响

王晓琳 陈小兰 胡先福 南清振 陈楚弟

目的研究小鼠酒精性肝病造模过程中的不同酒质的作用遥方法小鼠慢性喂养工业酒精2个月袁或喂养食用酒A或食用酒B 40 d遥检查小鼠空腹体重及病理组织学的变化遥结果工业酒精慢性喂养2个月后袁体重比对照组显著下降袁说明工业酒精作为慢性酒精喂养模型的不适用问题遥于是袁我们进一步使用食用酒A袁食用酒B分别慢性酒精喂养40 d后袁体重仍然下降约20%遥于是比较两种使用食用酒间隔5 d或10 d的慢性喂养85 d情况下(含酒精为40 d)袁食用酒B的体重降低有明显改善遥三种酒喂养情况下袁组织学均未见显著性差异遥结论从体重的变化看袁酒精质量对此模型具有重要的意义。

小鼠曰酒精模型曰体重增长曰肝脏病理

随着物质生活的提高袁酒精性肝病(ALD)日益受到重视遥ALD病程的进展往往从简单的脂肪变性到严重的肝脏损伤袁如脂肪性肝炎、肝硬化和肝细胞癌等[1-3]遥酒精慢性喂养动物模型是对此类问题进行医学研究的重要手段遥经典的Lieber-DeCarli(LD)液体饲料诱导的ALD模型在配制液体饲料时常选用工业酒精或市售食用酒袁但有关两类酒饲养小鼠对造模产生差异的研究报道很少遥本研究中袁我们拟以小鼠为实验动物袁结合不同饮酒方式喂养小鼠含有工业酒精、不同食用酒精袁比较工业酒精及食用酒精慢性喂养对小鼠体重及其肝脏病理两个宏观指标的影响袁为酒精肝造模提供参考。

材料与方法

一、试验动物和造模方式

1.工业酒精组

8~10周龄Balb/c雄性小鼠共28只袁由南方医科大学实验动物中心提供袁体重20~24 g袁随机分为实验组和对照组袁在南方医院动物房以对照LD液体饲料或含5%VOL乙醇的LD液体饲料(购自江苏南通特洛菲饲料科技有限公司)饲养遥实验组为含酒精液体饮食袁对照组为对照液体饮食袁总时间60 d袁其酒精为95%工业酒精(购自南方医科大学南方医院)袁酒精饮食期间小鼠可自由进食袁对照饮食期间小鼠进食约相同热量的饮食遥每周称量小鼠空腹体重遥处死前使用麻醉剂苯巴比妥充分麻醉袁然后快速摘取肝脏袁肝组织用4%中性甲醛溶液固定保存。

2.食用酒组

再次购入60只小鼠分为食用酒A组(n=30)(酒购自某酒业公司袁低档袁42%VOL)袁食用酒B组(n=30)(酒购自某酒业公司袁中高档袁52%VOL)袁每组随机分为连续组、间隔10 d组和间隔5 d组(各10只)袁饲养方式同工业酒精组袁其连续组为连续喂养酒精液体饮食40 d曰间隔10 d及间隔5 d组(以10 d或5 d为阶段喂养酒精饮食和对照饮食)袁含酒精饮食(5%VOL)时间为40 d袁总喂养时间为85 d曰余处理方式同工业酒精组。

二、一般观察指标及肝脏形态学

动物一般情况袁包括体质量、精神状态、活动情况、皮毛光泽度、进食量等曰肝脏的外形色泽及质地等。

三、肝组织病理学观察

肝组织石蜡包埋袁常规切片袁行苏木精-伊红染色(HE)袁镜下观察肝脂肪变、炎症的改变。

四、统计学处理

所得数据以x依s表示遥用SPSS 13.0软件进行统计分析袁两组间比较采用独立样本t检验袁多组样本均数间差异比较用方差分析(One-Way ANO—VA)袁多重比较采用Beonferroni检验(方差齐)遥P< 0.05为差异有统计学意义。

结果

一、工业酒精造模小鼠的一般情况及体重变化比较

对照组较实验组进食较好袁毛发有光泽袁体态活泼、食欲正常袁无嗜睡现象袁初期工业酒精实验组易激惹、食欲减退袁后期精神萎靡、反映迟钝、食欲减退、皮毛光泽度差部分出现脱毛袁死亡4只遥体重变化如表1所示袁实验前两组小鼠体重无明显差异袁实验结束时实验组体重无明显变化袁对照组体重明显增加。

二、食用酒造模小鼠的一般情况及体重变化

含酒精饮食期间饮食量减少袁总体较工业酒精喂养小鼠精神状态好袁后期仍较为活泼袁皮弹性好袁未见明显脱毛袁食用酒B的间隔10 d组缺失4只袁间隔5 d组缺失2只遥如表2示实验前各比较组间小鼠体重无明显差异袁持续饮酒40 d(截取工业酒精组实验组开始40 d的体重变化)袁两食用酒组之间体重变化无明显差异袁较工业酒精组体重减轻少(图1)曰间隔10 d和间隔5 d酒精喂养的食用酒B组较对应的食用酒A组体重明显增加[(11.517依2.077)g vs(9.683依1.253)g袁(12.721依1.872)g vs(8.708依1.241)g](图2、图3)。

表1 工业酒精对小鼠实验前后空腹体重的影响(g袁依s)

表1 工业酒精对小鼠实验前后空腹体重的影响(g袁依s)

表2 连续及间隔食用酒喂养前小鼠空腹体重(g依s)

表2 连续及间隔食用酒喂养前小鼠空腹体重(g依s)

注院与对应食用酒A组比较袁*P>0.05。

图1 持续40 d工业酒精和食用酒A、B组小鼠体重变化依s)

三、小鼠肝脏大体标本观察及病理学检查

工业酒精对照组小鼠肝脏表面光滑细润、色红、边缘锐利、质地柔软袁相比之下袁实验组小鼠肝脏色泽较正常肝脏暗淡袁肝脏体积略增大袁包膜紧张光滑袁边缘圆钝袁质地中等遥食用酒两组小鼠肝脏大体观基本同工业酒精实验组袁颜色较深曰HE染色院空白对照组显微镜下可见肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列袁肝小叶结构正常袁偶可见散在小泡状脂肪滴遥工业酒精实验组及食用酒各组均可见肝细胞明显肿胀变性袁充满大小不等的脂肪滴袁细胞核被推向一侧袁间质内见炎症细胞浸润(图4)。

讨论

我们的研究发现袁使用酒类的质量对小鼠酒精肝研究模型的建立具有重要的意义遥工业酒精不适合小鼠酒精肝模型的研究袁质量不好的食用酒也可导致小鼠体重的显著降低。

采用Lieber-Decarli模型小鼠主动进食含酒精饮食袁这种造模方式符合大部分长期饮酒的患有酒精肝的患者袁实验中小鼠乙醇摄人量为16~24 g·kg-1·d-1袁在该造模条件下小鼠肝脏明显表现为酒精性脂肪肝的病理组织学变化遥小鼠体重增长情况是反映生长发育的一个重要指标袁如果实验组与对照组比较袁体重有明显下降趋势袁则可能同时伴有生长发育其他方面的一些障碍袁从而影响其正常的生理功能遥蛋白质和热量摄入不足、多种营养素缺乏和代谢状态的改变是酒精性肝病营养不良的主要特点遥不同来源的酒类选择对小鼠酒精肝造模过程中营养状态造成了影响。

关于酒精肝造模的酒精选用袁国外常选择无水乙醇(100%或95%)[4-6]袁国内也常选择无水乙醇、95%酒精[7-8]或市售食用酒类[9-10]遥工业酒精与食用酒不同袁食用酒之间也有差异遥徐幸等发现不同酒类样品中塑化剂-邻苯二甲酸酯类化合物的含量不同袁部分超出国标限量[11]曰程和勇等发现不同酒类中发现白酒中铬、砷、镉、汞、铅含量最高袁而且上述元素含量的变化幅度也最大袁某些酒中铬、砷、铅含量比较高袁与GB/T 5749-2006生活饮用水卫生标准规定的限值有较大的差距[12]遥国家对白酒中甲醇含量规定了强制执行标准(GB-2757-81)袁国内蒸馏酒和酿造酒的卫生标准仅对铅有限值要求袁对铬、砷、镉、汞等元素未作规定遥因不同的人群饮酒的方式不同袁有慢性酗酒、间断饮酒等袁此差异对乙醇引起的肝脏损伤可能有影响遥在各种危险因素中袁酒精肝损伤以及酒精对其他脏器的损伤受个人的饮酒方式及持续饮酒时间影响[13-14]遥排除饮酒方式和持续时间的影响袁本研究表明袁食用酒及酒质对小鼠体重这一指标具有重要的影响。

在酒精性肝病的组织病理学变化中袁主要由乙醇及其代谢产物引起袁乙醇及其代谢产物导致肝细胞脂肪变袁在此基础上发生氧化应激袁进一步导致炎症及纤维化发生[1,15]遥但不同来源的酒精在这些指标上的影响将是我们进一步研究的工作之一遥然而袁体重的变化袁必然是众多分子事件的体现。

图2 间隔10 d食用酒A组与B组小鼠体重变化(x依s)

图3 间隔5 d食用酒A组与B组小鼠体重变化依s)

图4 小鼠肝脏HE染色镜检(伊200)

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E ffectsof alcoholquality onmouse weight in alcoholic livermodel

WANG Xiao-lin,CHENXiao-lan,HU Xian-fu,NAN Qing-zhen,CHENChu-di.
Department of Gastroenterology,Nanfang Hospital,Southern MedicalUniversity,Guangzhou 510515,China

Objective Tostudy the effectsof alcoholquality onmouseweight inalcoholic livermodel. M ethod M icewere fedwith industrialalcohol for2months,or two kinds of liquor for45 days.Miceweight change and liver tissue pathology were exam ined.Results A fter 2-month industrial alcohol feeding,body weightof them icewas decreasedby 97.4%comparedw ith the controlmice,indicating that the industrial al—coholwasnotsuitable for the study.Micewere further fedw ith two kindsof liquorwith differentquality for45 days.The body weightw asdecreased by 20.4%and 19.1%for poorerquality liquor and higher quality liquor respectively.We thus fedmicew ith two kindsof liquor in every 5 days orevery 10 days fora total of 85 days. Itw asobserved that the body weightwas decreasedmuch less inm ice fedw ith higher quality liquor compared with them ice fedw ith poorerqualityw ine in both experimentaldesigns.No change was observed in liver tis—sue pathology between themice fed with different alcohols.Conclusion Liquor quality is important for the chronic alcoholic study.

Mouse;A lcoholmodel;Weightgain;Liver pathology

院2014-04-23)

(本文编辑院朱薇)

DOI院10.3969/j.issn.1672-2159.2014.05.006

院510515南方医科大学南方医院消化内科通讯作者院陈楚弟袁E-mail院chenchudi@163.com

院国家自然科学基金(81170743)曰广东省人才引进启动基金(2010111501)