薏仁降浊汤对大鼠急性痛风性关节炎模型的影响

胡旭光， 温 亚， 戴王强， 韩宗余， 刘德明， 韩 彬

(广东药学院，广东 广州510006)

痛风是关节炎的一种，其显著特征为尿酸钠结晶在关节及其周围组织沉积，通常认为高尿酸血症是发生痛风的前期状态［1］。由于疼痛、运动障碍以及致残等原因，痛风性关节炎患者的生活质量受到严重影响［2］。随着人们饮食习惯和生活方式的改变，痛风患病率有明显上升的趋势，因此越来越受到医学界的重视。目前治疗痛风性关节炎的常用药物秋水仙碱、非甾体类消炎药，虽然疗效较好，但容易产生严重的毒副作用［3］，因此寻找防治痛风的药物及保健品越来越引起了人们的重视。

中医药对痛风的认识和治疗有着悠久的历史，在临床实践中取得了良好的效果疗效［4］。薏仁降浊汤由薏苡仁、百合和木瓜组成，该方源于清代黄云鹄所著的《粥谱》所收载的药膳——薏米百合粥。方中以薏苡仁为君，佐以百合和木瓜，加入粳米共熬制为粥，对于痛风的防治具有显著作用［5］。该方所含三味药均为药食同源的中药，具有安全、毒副作用小的优势。本实验研究薏仁降浊汤对大鼠痛风关节炎的治疗作用，为开发防治痛风药物或保健品提供实验依据。

1 实验材料

1.1 动物 SD 大鼠48 只，SPF 级，雄性，体质量(200 ±20)g，购于广东省医学实验动物中心，许可证号:SCXK (粤)2008-0002。

1.2 药品和试剂 秋水仙碱片(西双版纳药业有限公司生产，批号为11807);薏仁降浊汤(百合、木瓜、薏苡仁由广东药学院附属医院中药房提供，经广东药学院中药学院中药鉴定教研室李书渊教授鉴定为正品);尿酸(购自美国Sigma 公司);PGE2Elisa 检测试剂盒(上海研谨生物科技有限公司，产品编号CSB-E07967r)、尿酸测定试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号20120525)。

1.3 仪器 TDL80-2B 型台式离心机(上海安亭科学仪器厂制造)，UV-24500 紫外分光光度计(日本岛津公司)，足趾容积测量仪(成都泰盟科技有限公司)。

2 方法

2.1 尿酸钠制备 参照韩彬等［6］的方法，配制10 mL 尿酸钠溶液。

2.2 薏仁降浊水煎液制备 按配伍称取中药，加入5 倍水量煎煮45 min，过滤，再加入同样的水量煎煮30 ～45 min，过滤，合并两次的水煎液加热浓缩到1 g/mL 备用。实验时配成所需质量浓度使用。

2.3 给药和模型复制 48 只SD 大鼠随机分为6 组，分别为正常组、模型组、阳性药秋水仙碱组、薏仁降浊汤高剂量组(9.6 g/kg)、薏仁降浊汤中剂量组(4.8 g/kg)、薏仁降浊汤低剂量组 (2.4 g/kg);给药组每只灌胃给药0.2 mL/10 g，正常组、模型组每日灌胃等体积生理盐水，各组连续灌胃给药7d。试验前用记号笔于每鼠两后足踝关节下0.5 mm 处画一条清晰的直线，以备测量足容积时使用。第5 天给药1 h 后，参照文献［7］ 所提供的方法造模，分别于造模后1、2、4、8、24、48 h 用足趾容积测量仪测量各组大鼠右后足踝关节下0.5 mm 处的体积，并测相同部位的左侧后足踝关节体积作为对照。按下列公式计算足肿胀率。其中V右和V左分别为各组大鼠右侧和左侧后足踝关节下0.5 mm处的体积。

2.4 薏仁降浊汤对大鼠血清尿酸、PGE2水平的影响 给药结束后，用乙醚将各组动物麻醉后，眼眶后静脉丛取血，然后将血液离心分离，所得血清置于-20 ℃冰箱保存待测。血尿酸水平的检测按试剂盒说明书进行，血清PGE2水平采用酶联免疫法测定，操作亦按试剂盒说明书步骤进行。

2.5 关节滑膜组织病理形态学检测 给药结束后，处死大鼠，摘取右后足踝关节经固定，切片，染色处理后于光镜下观察其病理组织形态学变化。滑膜炎症程度依据王颖芳等［8］方法分为:无炎症(-)计为0 分;关节囊壁内层见灶性炎性细胞浸润(+)，计为1 分;关节囊壁内、外层见弥散性分布炎性细胞浸润，计为2 分;比较各组关节滑膜炎症变化的分值。

3 统计方法

4 结果

4.1 薏仁降浊汤对大鼠痛风性关节炎足肿胀的影响 结果显示:3 个剂量的薏仁降浊汤在给药后4、8 h 均可显著降低足肿胀率，与模型组有统计学差异 (P ＜0.05，P ＜0.01)。薏仁降浊汤高剂量组在给药后2 h 开始见效，在致炎后48 h 仍显示出显著的抑制作用，而薏仁降浊汤中、低剂量组在致炎后不同时间也显示出抑制作用，但抑制时间相对较短。结果见表1。

表1 薏仁降浊汤对MSU 大鼠足肿胀(足体积)的影响(±s，n=8)

表1 薏仁降浊汤对MSU 大鼠足肿胀(足体积)的影响(±s，n=8)

注:与模型组比较，* P ＜0.05;＊＊P ＜0.01

组别 剂量/(g·kg -1)致炎后不同时间足肿胀率/%1 h 2 h 4 h 8 h 24 h 48 h模型组 - 23.9 ±3.1 31.0 ±3.0 37.3 ±4.8 40.7 ±2.9 36.0 ±3.4 33.3 ±2.7薏仁降浊汤高剂量组 9.6 18.1 ±2.7 20.7 ±2.2* 21.3 ±2.8* 24.8 ±2.3＊＊ 27.0 ±2.2* 24.5 ±2.1*薏仁降浊汤中剂量组 4.8 19.3 ±2.1 21.8 ±4.5* 25.0 ±3.5* 26.2 ±3.0* 27.6 ±2.7* 29.9 ±2.9薏仁降浊汤低剂量组 2.4 18.8 ±2.5 22.8 ±2.9 25.6 ±2.5* 26.9 ±2.8* 30.9 ±3.5 30.2 ±2.4秋水仙碱组 0.33 12.1 ±1.8＊＊ 16.8 ±2.5＊＊ 20.8 ±4.4* 24.2 ±2.5＊＊ 26.5 ±2.7* 25.7 ±2.5*

4.2 薏仁降浊汤对痛风性关节炎大鼠血尿酸和血清PGE2水平的影响 大鼠关节腔内注入MSU 48 h 后，模型组大鼠血尿酸和血清PGE2水平显著升高，与正常组统计学比较具有显著性差异(P ＜0.01)，证明造模成功。给药后3 个剂量组的薏仁降浊汤大鼠血清尿酸和PGE2水平均显著降低，与模型组比较，差异具有统计学意义。结果见表2。

表2 薏仁降浊汤对MSU 大鼠血清尿酸和PGE2 影响(±s，n=8)

表2 薏仁降浊汤对MSU 大鼠血清尿酸和PGE2 影响(±s，n=8)

注:与正常组比较，# P ＜0.01;与模型组比较，* P ＜0.05;＊＊P ＜0.01

组别 剂量/(g·kg -1)尿酸/(μmol·L -1)PGE2/(pg·L -1)- 63.9 ±18.2 5.5 ±4.2模型组 - 139.4 ±38.5# 15.8 ±14.8#薏仁降浊汤高剂量组 9.6 85.8 ±35.3＊＊ 6.6 ±2.2＊＊薏仁降浊汤中剂量组 4.8 87.3 ±37.2* 8.7 ±3.8*薏仁降浊汤低剂量组 2.4 93.1 ±30.6* 8.9 ±5.0*秋水仙碱组 0.33 86.4 ±31.2* 5.4 ±2.5正常组＊＊

4.3 薏仁降浊汤对大鼠足踝关节滑膜组织病理改变和炎症变化的影响 病理结果显示:正常组大鼠足踝关节软组织未见异常，滑膜组织光滑平整，软组织内可见正常血管、脂肪组织，未见炎细胞浸润。模型组大鼠滑膜及周围软组织广泛充血、水肿，表面有纤维素黏附，滑膜细胞呈灶性增生，炎细胞弥漫性浸润，浸润的细胞主要为中性粒细胞和淋巴细胞。阳性药组滑膜及周围软组织内可见灶性淋巴细胞浸润，组织轻度水肿。薏仁降浊汤高剂量组大鼠滑膜及周围软组织内仅见少量炎细胞浸润，滑膜组织较平整。中剂量组大鼠滑膜及周围软组织内见中等量淋巴细胞弥漫性浸润，滑膜细胞局部呈灶性增生，间质纤维组织增生。低剂量组大鼠滑膜及周围软组织内见大量淋巴细胞弥漫性浸润，滑膜细胞局部呈灶性增生，大部分小血管扩张充血。结果见图1。

图1 大鼠足踝关节滑膜组织病理形态学改变(×200)

足踝关节滑膜组织炎症结果表明:模型组足踝关节滑膜组织炎症分值显著升高，与正常组比较有显著性差异(P ＜0.01);薏仁降浊汤高、中剂量组大鼠足踝关节滑膜组织炎症分值均显著降低，与模型组统计学比较有显著性差异(P ＜0.01)。见表3。

表3 薏仁降浊汤对大鼠足踝关节滑膜组织炎症变化的影响(±s，n=8)

表3 薏仁降浊汤对大鼠足踝关节滑膜组织炎症变化的影响(±s，n=8)

注:与正常组比较，#P ＜0.01;与模型组比较，* P ＜0.01

组别 剂量/(g·kg -1)足踝关节滑膜组织炎症分值正常组0.3 ±0.2模型组 - 1.9 ±0.3#薏仁降浊汤高剂量组 9.6 0.7 ±0.2*薏仁降浊汤中剂量组 4.8 0.8 ±0.3*薏仁降浊汤低剂量组 2.4 1.3 ±0.6秋水仙碱组 0.33 0.4 ±0.4-*

5 讨论

血尿酸浓度过高，尿酸以钠盐的形式沉积在关节、软骨，形成痛风［9］。中医学认为痛风归属“痹证”、 “历节风”等范畴，其发病多由饮食不节、情志紧张、感受六淫之邪，尤其是外感风、寒、湿之邪，引起气血凝滞，经络痹阻，久之蕴而化热，导致该病寒热错杂，风湿俱存，故痛风之症缠绵难愈［10］。根据该病的病机，目前中医对本病的治疗多使用大量清热祛湿的中药，但祛风散寒的中药运用不足，临床疗效不够理想［11］。本方以甘寒的薏苡仁为君，可清热利湿，健脾止泻。 《本草经》记载“薏苡仁主筋急拘挛……风湿痹”;《世医得效方》记载“薏苡仁治久风湿痹，补正气，……”。温性木瓜臣，可祛风除湿。平性的百合为佐，可润肺止咳、滋养心神。方中薏苡仁和木瓜相配，寒温共用，使寒而不滞血、温而不生热，风祛湿清而经络畅通，加入性平的百合，全方可收清热祛湿、消肿止痛之功。

本次实验结果显示:薏仁降浊汤可抑制尿酸盐引起的急性大鼠足肿胀、降低血清尿酸和PGE2水平、改善大鼠足踝关节滑膜组织炎症。现代研究发现:薏苡仁浸出物具有显著的镇痛抗炎作用，能显著抑制多种关节炎及毛细血管通透性，亦可明显降低炎性组织中的PGE2的量，临床报道含有薏苡仁的方剂用于亚急性和慢性风湿性关节炎，疗效确切［12］。木瓜中所含的木瓜总苷经药效学的筛选，发现其具有抗炎镇痛免疫调节作用，能有效对抗多种关节炎和足肿胀［13］。百合含有秋水仙碱等多种生物碱，可用于痛风发作关节痛的辅助治疗，其机理是通过抑制多核白细胞的趋化、增殖和吞噬尿酸盐晶体;抑制乳酸和溶酶体在组织中的释放;提高关节腔内pH 值，减少尿酸盐结晶析出而起到迅速减轻炎症，止痛的作用［14］。

总之，薏仁降浊汤能有效地对抗急性痛风性大鼠关节炎症;降低血尿酸浓度、减少血清PGE2含量可能是其作用的机理。薏仁降浊汤防治痛风具有良好的开发和应用前景。

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