九味头痛片镇痛效果及机制的实验研究＊

王开富， 徐丽君， 邹 欣， 黄光英

华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所，武汉 430030

九味头痛片由当归、丹参、赤芍、延胡索、蔓荆子、蒺藜、石决明、白芷等九味中药合理配伍而成具有平肝潜阳、活血止痛等功效，多年的临床实践证明其治疗偏头痛疗效确切，因此，我们对该药的药效学及作用机制进行了实验研究。

1 材料与方法

1.1 药物及试剂

九味头痛片浸膏（华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部提供，批号：101218，1g药材相当于0.23g浸膏）；阿司匹林，由合肥久联制药有限公司生产；正天丸，由三九医药股份有限公司提供，批号：0604171；冰醋酸，由天津市博迪化工有限公司提供；羧甲基纤维素钠，由大连天源基化学有限公司提供。硝酸甘油，由山西康宝生物制品股份有限公司提供；动物麻醉药物氨基甲酸乙酯（乌来糖）由上海山浦化工有限公司提供。

1.2 实验动物

昆明种小鼠，雌雄按实验要求而定，体重18～22g，均由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供。健康Wistar大鼠，雌雄各半，体重180～220 g，由湖北省疾病控制中心提供。

1.3 实验方法

1.3.1 小鼠扭体法实验［1］取昆明种小鼠100只，体重18～22g，雌雄各半，称重标记后随机分为5组，每组20只。中药组按九味头痛片低、中、高剂量灌服浸膏（2.72、5.44、10.88g／kg），阳性对照组灌阿司匹林水溶液（0.4g／kg），阴性对照组灌服等体积0.5%羧甲基纤维素钠溶液，每日1 次连续用药7d，末次给药后30min，各鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液0.1mL／10g体重（醋酸溶液临用前配制）。5min后观察并记录注射醋酸溶液后15min内出现扭体反应（腹部收缩内凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行）的次数。

1.3.2 热板法实验［2］将昆明种小鼠置55℃热板仪上，用秒表记录小鼠自投入热板至出现舔后足的时间（s）作为该鼠的痛阈值。在给药前先测定每只小鼠的基础痛阈值，共测2次，剔除喜跳跃者，以痛阈值＞10s而＜30s的小鼠为合格。如痛阈值超过60s，即停止测试而按60s计，以免烫伤足部。

动物分组及处理：将筛选合格的小鼠（全部为雌性）随机分为5组，每组20只。中药组按九味头痛片低、中、高剂量灌服浸膏（2.72、5.44、10.88g／kg），阳性对照组灌服阿司匹林水溶液（0.4g／kg），阴性对照组灌服等体积0.5%羧甲基纤维素钠溶液，每日1次连续用药7d，于末次给药后0.5、1、2、4h按上述基础痛阈值检测方法分别测定痛阈值，并按下式计算其痛阈值提高百分率：痛阈值提高百分率＝（给药后平均痛阈值－给药前平均痛阈值）／给药前痛阈值×100%。

1.3.3 偏头痛大鼠造模及血液流变学、脑血流量的检测 取Wistar大鼠60只（雌雄各半），随机分为6组，即正常对照组、模型组、正天丸治疗组、九味头痛片高、中、低剂量治疗组，每组10只。正常对照组及模型组：5%羧甲基纤维素钠溶液5mL／d灌胃，每日1次连续7d。正天丸治疗组：灌服正天丸混悬液（1.5g／kg）；九味头痛片高、中、低剂量组灌服浸膏（2.72、5.44、10.88g／kg），每日1次连续7d。

造模：于末次给药后0.5h，除正常对照组外，每只大鼠按10mg／kg体重皮下注射硝酸甘油，复制偏头痛动物模型。

血流量测试及相关指标检测：造摸2h后，全部大鼠用20%乌来糖麻醉，用手术剪剪开大鼠头皮暴露软脑膜组织，用“407”号多谱勒激光探头测试大鼠头部脑血流量。腹主动脉取血5mL 于肝素钠抗凝试管内，用N6c全自动血液流变仪测定全血粘度、血浆粘度、红细胞聚集指数、红细胞刚性指数、红细胞变形指数等各项血液流变学指标。

1.4 统计学处理方法

2 结果

2.1 各组小鼠给药后对醋酸致痛的镇痛效果比较

表1显示九味头痛片能明显减少小鼠因醋酸刺激所致的扭体次数，各剂量组与阴性对照组比较均具有统计学意义，并呈现一定的量效关系。

表1 各组镇痛效果的比较（±s，n＝20）Table 1 Comparison of the analgesic effect in different groups（±s，n＝20）

表1 各组镇痛效果的比较（±s，n＝20）Table 1 Comparison of the analgesic effect in different groups（±s，n＝20）

与阴性对照组比较，＊P＜0.05 ＊＊P＜0.01；与阳性对照组比较，＃＃P＜0.01

组别 扭体次数阴性对照组29.75±6.29＃＃阳性对照组2.85±2.64＊＊九味头痛片 低剂量组20.50±6.89＊＃＃ 中剂量组11.40±7.22＊＊＃＃ 高剂量组8.45±6.64＊＊＃＃

2.2 各组小鼠给药后痛阈值的比较

表2、3显示九味头痛片能显著提高小鼠热刺激所致疼痛的痛阈值，且作用持续时间较长（4h时作用最强）。由表2可见4h时，中、高剂量组效果优于阿司匹林组（阳性对照组）。

表2 各组小鼠用药后不同时间段热痛阈值的比较（±s，n＝20）Table 2 Comparison of the thermal pain threshold value at different time points after JWTTP treatment（±s，n＝20）

表2 各组小鼠用药后不同时间段热痛阈值的比较（±s，n＝20）Table 2 Comparison of the thermal pain threshold value at different time points after JWTTP treatment（±s，n＝20）

与阴性对照组比较，＊P＜0.05＊＊P＜0.01；与阳性对照组比较，＃P＜0.05

组别 用药前0.5h1h2h4h阴性对照组16.79±7.81 12.49±4.74 13.67±8.13 14.85±6.25 19.71±7.31阳性对照组15.44±5.89 11.62±3.48 25.27±5.33＊＊23.30±7.84＊＊24.20±13.89九味头痛片 低剂量组12.78±5.70 14.63±6.85 19.11±4.66＊＊21.35±11.94＊20.91±8.72 中剂量组16.84±5.72 14.77±5.12 23.52±7.88＊＊24.42±6.95＊＊33.35±17.98＊＊＃ 高剂量组13.99±5.33 14.32±6.57 19.59±9.27＊＊26.40±14.20＊＊32.43±15.98＊＊＃

表3 各组小鼠用药后不同时间段痛阈值提高百分率（±s，n＝20）Table 3 Comparison of the increased percentage of thermal pain threshold at different time points after JWTTP treatment（±s，n＝20）

表3 各组小鼠用药后不同时间段痛阈值提高百分率（±s，n＝20）Table 3 Comparison of the increased percentage of thermal pain threshold at different time points after JWTTP treatment（±s，n＝20）

与阳性对照组比较，＃P＜0.05＃＃P＜0.01

组别 1h（%）2h（%）4h（%）阴性对照组－－－阳性对照组63.67±3.91 50.91±4.28 56.67±3.62九味头痛片 低剂量组49.53±2.87＃67.06±7.31＃63.62±8.64 中剂量组39.67±6.43＃45.01±6.14 98.04±7.59＃＃ 高剂量组40.02±3.29＃88.71±5.55＃＃131.81±6.41＃＃

2.3 各组大鼠脑血流量、血液流变学指标检测结果

经九味头痛片治疗后，大鼠血液粘度显著性下降，全血低切、高切还原粘度明显下降（P＜0.05）；大鼠脑血流量得到了明显改善，与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.01）；且从结果可见九味头痛片3个剂量组与正天丸组比较差异无统计学意义。见表4、5。

表4 各组大鼠血液流变学指标的变化（±s，n＝10）Table 4 Comparison of hemodynamic indexes among groups（±s，n＝10）

表4 各组大鼠血液流变学指标的变化（±s，n＝10）Table 4 Comparison of hemodynamic indexes among groups（±s，n＝10）

与模型对照组比较，＊P＜0.05

全血粘度（mPa·s） 组别红细胞变形指数正常对照组8.74±0.56 19.44±1.36＊高切低切血浆粘度（mPa·s）红细胞聚集指数红细胞刚性指数1.04±0.04 1.92±0.15 8.38±0.48 1.20±0.05模型对照组8.93±0.59 21.87±1.75 1.03±0.02 2.13±0.22 8.68±0.53 1.15±0.07正天丸组7.53±0.41＊18.73±1.99＊1.04±0.04 2.08±0.21 7.25±0.40 1.09±0.05九味头痛片 低剂量组7.99±0.97＊20.37±3.51 0.99±0.10 2.17±0.34 8.17±1.59 1.09±0.08 中剂量组7.52±0.92＊19.01±4.13＊1.02±0.01 2.14±0.26 7.33±0.88 1.05±0.11 高剂量组7.98±0.89＊23.09±4.42 1.04±0.07 2.43±0.27 7.61±0.88 1.04±0.10

表5 各组大鼠脑血流量变化（±s，n＝10）Table 5 The variation of the cerebral blood flow in different groups（±s，n＝10）

表5 各组大鼠脑血流量变化（±s，n＝10）Table 5 The variation of the cerebral blood flow in different groups（±s，n＝10）

与模型组比较，＊＊P＜0.01

组别 脑血流量（PU 值）＊＊正常对照组520.78±70.26模型对照组229.11±82.20正天丸组392.00±113.65＊＊九味头痛片 低剂量组340.22±107.15＊＊ 中剂量组364.89±43.07＊＊ 高剂量组426.44±72.58＊＊

3 讨论

九味头痛片是我院的院内制剂，多年来用于临床治疗偏头痛有确切疗效。本实验首先采用小鼠热板法和扭体法两种疼痛模型，观察九味头痛片的镇痛作用。结果显示，九味头痛片能显著提高小鼠热刺激所致疼痛的痛阈值，且作用持续时间较长，4h时，中、高剂量组效果优于阿司匹林组。有文献报道［3］小鼠热板法实验在测定麻醉性镇痛药的药效时较为适宜，舔足底动作不仅是脊髓反应，而且可能和高级中枢有关。本实验用热板法观察九味头痛片的镇痛作用结果表明，该药对热刺激疼痛的止痛较为敏感，提示其镇痛作用可能与调节中枢有关。采用扭体法实验观察发现该药能明显减少小鼠因醋酸刺激所致扭体的次数，各剂量组对小鼠醋酸所致的疼痛有显著缓解作用，并呈现一定的量效关系，提示该制剂对化学致痛也有明显的镇痛作用。

硝酸甘油皮下注射致大鼠偏头痛这一模型的主要依据是：颈动脉血管扩张是偏头痛的发病机制之一［4］。硝酸甘油在体内生成一氧化氮（NO），NO 通过强烈的扩张脑血管效应和神经毒性作用诱发实验性偏头痛，是广泛应用的头痛药物研究模型之一，具有很好的科学意义和应用价值。

近年来有学者研究发现偏头痛患者的全血粘度、血浆粘度、红细胞压积、血小板聚集率等显著增高［5］。其中，以全血粘度的增高为主。本研究中，经九味头痛片治疗后，全血低切、高切还原粘度明显降低，与模型组比较有显著性差异，且经该药治疗后，大鼠的脑血流量得到明显的改善，与模型组比较PU 值明显增高（P＜0.01）。

本处方由川芎、当归、丹参、延胡索等中药组成，据文献记载，川芎生物碱（CHX）能降低大鼠脑局灶性缺血再灌注组织中NO 的含量［6］；当归注射液对缺氧缺血性脑损伤幼年大鼠神经元可能具有保护作用［7］；延胡索是公认的止痛良药，据现代药理证实，延胡索内含紫菀碱等物质，具有止痛、镇静、催眠和安定的作用。本研究发现，九味头痛片能有效地改善硝酸甘油所致大鼠偏头痛模型的血液流变学指标，升高局部脑血流量，表明该药可能通过以上机制发挥治疗偏头痛的疗效。由本研究可见，在治疗头痛、偏头痛的拟方过程中，依据古代中医中药理论，结合现代医学药学研究，选择能降低血液粘度、增加脑血流量等功能的中药应用于临床的做法值得推广。

［1］ 徐淑云，卞如濂，陈修.药理实验方法［M］.3版.北京：人民卫生出版社，2002：822－823.

［2］ 张忠泉，包翠屏.药理学实验指导［M］.1版.郑州：河南医科大学出版社，2000：44.

［3］ 程体娟，杨军英，王奋刚，等.嘛呢骨痹液的抗炎镇痛作用实验研究［J］.中药新药与临床药理，2004，15（1）：32－34.

［4］ 杜艳芬，王纪佐.偏头痛发病机制研究进展［J］.中国临床神经科学，2002，10（3）：314－317.

［5］ 孙丽，施乃久，李红霞，等.偏头痛患者血液流变学和血液动力学的对照研究［J］.中国厂矿医学，2000，13（2）：89－90.

［6］ 纪云峰，刘慧霞.川芎生物碱对大鼠脑组织中SOD 活性、NO、NOS、MDA 含量的影响［J］.中国中医药现代远程教育，2011，2（9）：212－213.

［7］ 林莉，刘希婧，荣霞，等.当归对缺氧缺血性脑损伤幼年大鼠神经元的保护作用［J］.四川解剖学杂志，2010，18（4）：13－15.