胃癌病人血清DLL4与VEGF表达及临床意义

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(青岛大学医学院附属医院，山东 青岛 266003 1 消化内科； 2 普外科； 3 病理科)

胃癌是目前世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，而大多数胃癌发现时已属于晚期，因此早期诊断、早期治疗一直是胃癌研究的重点。肿瘤的发生发展有赖于肿瘤新生血管的生成，因此抑制肿瘤新生血管形成成为治疗恶性肿瘤的靶向目标。Notch信号转导是一种细胞间信号通路，已有研究表明，Notch信号通路重要配体DLL4在肿瘤血管新生中发挥重要作用[1-2]。血管内皮生长因子(VEGF)是目前已知的作用最强的血管形成刺激因子之一，它是评价新生血管的有效指标[3],其中VEGF-C被认为参与了胃癌的发生发展[4]。本研究旨在联合检测胃癌病人血清DLL4、VEGF水平的变化，探讨两者在胃癌发生发展中的作用及其对胃癌的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2011年3月—2012年5月收诊的初治胃癌病人62例(胃癌组)，其中男37例，女25例；年龄35～72岁，平均(52.4±7.6)岁，均经病理检查证实，未行放化疗。胃腺瘤病人34例(胃腺瘤组)，其中男20例，女14例；年龄为28～67岁，平均(46.6±5.8)岁。另收集健康查体者30例(对照组)，其中男18例，女12例；年龄25～58岁，平均(36.2±7.6)岁。

1.2 标本收集与储存

所有受检者均于未治疗前采集清晨空腹静脉血4 mL,以4 000 r/min离心分离血清，-80 ℃保存备用；经手术治疗的癌症病人于术后2周同法收集血清冷存备用。

1.3 检测指标及方法

血清DLL4、VEGF水平应用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA法)进行检测，严格按照试剂盒说明书进行操作，在波长450 nm处读取吸光度值，绘制标准曲线并计算血清DLL4、VEGF水平。人DLL4的ELISA试剂盒购自美国R&D公司，人VEGF的ELISA试剂盒购自上海越研生物科技有限公司。

1.4 统计学处理

2 结 果

胃癌病人术前血清DLL4和VEGF水平均显著高于胃腺瘤组和对照组(F=811.84、831.83,q=41.30～50.14,P<0.01)。见表1。两者在胃癌术前血清中的表达与肿瘤组织学分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期显著相关(t=2.27～6.87,P<0.05)，而与病人的性别、年龄、肿瘤大小、Borrmann分型无关(P>0.05)。见表2。胃癌组术后2周血清DLL4和VEGF水平均较手术前显著下降(t=82.11、184.66,P<0.01)。见表3。胃癌组DLL4和VEGF的表达水平呈明显的正相关(r=0.870,P<0.01)。

3 讨 论

肿瘤的生长总是伴随着其周围血管的形成，1971年FOLKMAN[5]提出“肿瘤血管形成依赖学说”，使人们对肿瘤生长与血管发生有了更为深刻的认识。Notch信号通路是细胞间一种重要的转导通路，在肿瘤新生血管形成中起重要作用。DLL4是Notch信号通路中的重要配体，主要表达于新生血管的内皮细胞及神经和造血组织中。近年来研究表明，DLL4-Notch受体通路广泛参与恶性肿瘤的发生、发展及转移等，并且与肿瘤血管形成有关[6]。本实验结果显示，胃癌病人血清DLL4表达明显高于正常人，且DLL4的血清学表达水平与胃癌的组织学分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期显著相关，与张安华[7]等报道的DLL4蛋白在胃癌组织中的表达结果相一致，提示DLL4可能参与了胃癌的发生。这可能与DLL4-Notch信号通路对肿瘤的血管发生有关，提示DLL4有可能成为判断胃癌发生、发展、侵袭和转移的一个新的血清学指标。

表1 各组术前血清DLL4和VEGF水平比较

与其他组比较，F=811.84、831.83,*q=41.30、50.14,P<0.01。

表2 胃癌组术前血清DLL4和VEGF水平与临床病理参数的关系

表3 胃癌组术前与术后血清DLL4和VEGF水平变化

与术前比较，*t=82.11、184.66,P<0.01。

VEGF是参与肿瘤血管形成的重要因素之一，它可以通过调节血管和淋巴管生成，增加其通透性而促进肿瘤生长和转移。有研究证实其参与了宫颈癌等肿瘤的形成过程[8]。本研究结果显示，胃癌病人血清VEGF水平明显升高，与王海莉等[9]的研究结果相符，提示VEGF可能参与了胃癌的发生和发展，说明肿瘤细胞分泌大量VEGF，而VEGF又能促进肿瘤血管形成[10],从而提供肿瘤生成所需要的氧和营养成份。表明VEGF是判断胃癌预后的不良指标之一。

本研究结果还显示，DLL4和VEGF在胃癌血清中的表达呈显著正相关,随着VEGF水平表达的升高，DLL4表达也相应升高。本实验同时还证实手术后胃癌病人血清DLL4与VEGF水平较术前明显降低，这些均表明了DLL4-Notch信号通路与VEGF共同参与了胃癌的发生、发展。体外研究结果显示，DLL4可能是VEGF的一个下游基因，与VEGF之间存在负反馈机制，即VEGF上调DLL4的表达，而DLL4又通过某种途径影响 VEGF的表达[11]。可见，两者相互作用共同调节肿瘤的血管发生，这与本实验的研究结果相一致。

目前，抗肿瘤血管发生是一种全新的治疗策略，DLL4-Notch信号通路与VEGF共同作用对肿瘤血管发生发挥着关键作用。研究表明，阻断DLL4-Notch通路与抗VEGF联合治疗能有效抑制小鼠实体肿瘤的生长。迄今为止，国内外尚未见有关DLL4与VEGF在胃癌血清中表达关系的报道，本实验通过对胃癌血清中两者相关性分析显示，两者的表达呈显著正相关，说明两者共同参与了胃癌的发生、发展。DLL4与VEGF联合检测可以作为胃癌早期诊断与判断胃癌预后的新指标，阻断DLL4-Notch受体通路有可能成为胃癌抗血管形成治疗的新的靶向目标。

[1] SCEHNET J S, JIANG W, KUMAR S R, et al. Inhibition of DLL4 mediated signaling induces pmliforation of immature vessels and results in poor tissue perfusion[J]. Blood, 2007,109(11):4753-4760.

[2] RIDGWAY J, ZHANG G, WU Y, et al. Inhibition of DLL4 signalling inhibits tumour growth by deregulating angiogenesis[J]. Nature, 2006,444(7122):1083-1087.

[3] BROOKS P C, MONTGOMERY A M, CHERESH D A. Use of the 10-day-old chick embryo model for studying angioge-nesis[J]. Methods Mol Biol, 1999,129:257-269.

[4] 赵光兵,宋修岐,孙少杰. 胃癌组织Survivin和VEGF-C的表达及意义[J]. 青岛大学医学院学报, 2009,45(5):465-467.

[5] FOLKMAN J. Tumor angiogenesis therapeutic implication[J]. J Invest Dermatal, 1972,59:40-43.

[6] LESLIE J D, ARIZA-MCNAUGHTON L, BERMANGE A L, et al. Endothelial signalling by the notch ligand delta-like 4 restricts angiogenesis [J]. Development, 2007,134(5):839-844.

[7] 张安华,孙华文,苏锦松,等. Notch1/DLL4信号通路与VEGF在胃癌浸润和转移中的作用及其相关性[J]. 中国普外科杂志, 2010,19(4):375-378.

[8] 荣晓云,王言奎. 宫颈癌及癌前病变组织Fox-M1与VEGF表达及相关性[J]. 齐鲁医学杂志, 2011,26(4):471-473.

[9] 王海莉,崔凯,张雪峰,等. 胃癌病人血清VEGF水平和癌组织VEGF表达的关系及临床意义[J]. 标记免疫分析与临床, 2009,16(2):77-78.

[10] FERRARA N. Vascular endothelial growth factor: basic science and clinical progress[J]. Endocr Rev, 2004,25(4):581-611.

[11] WILLIAMS C K, LI J L, MURGA M, et al. Upregulation of the Notch ligand delta-like 4 inhibits VEGF-induced endothelial cell function[J]. Blood, 2006,107:931-939.