利培酮胶囊溶出度测定方法的研究*

左志辉，唐素芳，王 卫

(天津市药品检验所，天津 300070)

利培酮是由比利时杨森公司研发的一种苯并异噁唑衍生物，系一种选择性单胺能拮抗剂，为临床疗效较好的抗精神病药物，用于治疗急性和慢性精神分裂症，可减轻与精神分裂症有关的情感症状。本品在《英国药典》(2012)、《欧洲药典》(6.0)、《美国药典》(34)、《日本药局方》(15)均未见收载。利培酮胶囊规格为1 mg，原国家标准YBH10752006 采用小杯法测定其溶出度。目前国外药典溶出度测定法中均未收载小杯法，且随着检测手段高效液相色谱仪灵敏度的提高，无需采用特殊装置小杯法。本文建立了桨法测定利培酮胶囊的溶出度体系，并建立了更合理的液相色谱系统检测其溶出量。大杯法适用于不同型号的溶出仪、更真实反映药物溶出情况，本研究建立的方法具有推广价值。此项目为2011 年国家药品标准提高的研究项目，所建立的方法将收载于国家食品药品监督管理局国家药品标准中，广泛应用于利培酮胶囊的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 安捷伦HP 1200 型高效液相色谱仪;Toyama NTR-6100 型溶出仪;Autoscience AS 10200 超声仪;色谱柱:Agilent Extend C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)。

1.2 试剂和药品 甲醇为色谱纯，水为去离子水。利培酮对照品为中国生物制品检定所提供(批号分别为100303 -200101、123 -9302)。利培酮胶囊(宁波大红鹰药业股份有限公司提供，批号110401、110501、110601，规格1 mg/粒)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱:Agilent Extend C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);以甲醇-0.05 mol/L 醋酸铵溶液(用氨试液调节pH 至7.0)(60∶40)为流动相;检测波长为234 nm;柱温为40 ℃;流速1.0 ml/min。利培酮峰与其他杂质峰的分离度大于6.5。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取利培酮对照品适量，加0.1 mol/L 盐酸溶液溶解并稀释制成每1 ml 中约含2 μg 的溶液，作为对照品溶液。

2.3 溶出度测定法 取本品，照溶出度测定法(《中国药典》2010 年版二部附录XC 第二法)，以0.1 mol/L盐酸500 ml 为溶出介质，转速50 r/min，依法操作，经30 min 时，取溶液滤过，弃去初滤液15 ml，取续滤液作为供试品溶液;另精密称取利培酮对照品适量，加0.1 mol/L 盐酸溶液溶解并稀释制成每1 ml 中约含2 μg的溶液，作为对照品溶液。照“2.1”项下的色谱条件，精密量取供试品溶液与对照品溶液各50 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算每片的溶出量。限度为标示量的80%，应符合规定。对照品溶液与供试品溶液色谱图见图1。

图1 对照品(A)供试品(B)HPLC 色谱图

2.4 线性关系考查 精密称取利培酮对照品20.83 mg，置200 ml 量瓶中，加0.1 mol/L 盐酸超声使溶解，放冷，并稀释至刻度，摇匀，作为储备液，分别精密量取1、2.5、5、6 和8 ml，置250 ml 量瓶中，用0.1 mol/L 盐酸稀释至刻度，摇匀。分别取上述溶液50 μl 注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度C(μg/ml)对峰面积A作标准曲线，线性回归方程为A =74.7410 C -0.7129(r= 0. 9999，n = 5)。试验结果表明，利培酮在0.4166 ～3.3328 μg/ml 范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 分别取利培酮胶囊(批号110401)与对照品，照“2.2”与“2.3”项下方法配制对照品和供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，分别连续进样6 次，按利培酮峰面积计算RSD 分别为0.53%和0.51%，结果表明该方法精密度较好。

2.6 回收率试验 取利培酮对照品20.83 mg，置200 ml 量瓶中，加0.1 mol/L 盐酸超声使溶解，放冷，并稀释至刻度，摇匀，作为储备液，分别精密量取3、4 和6 ml，置250 ml 量瓶中，并分别加入处方量的空白辅料，超声使混匀，用0.1 mol/L 盐酸稀释至刻度，摇匀，作为供试液(分别相当于60%、80%、100%溶出浓度)。另取储备液适量，稀释制成每1 ml 含利培酮约2 μg 的溶液作为对照品溶液，取上述溶液分别进样50 μl，测定峰面积，计算平均回收率为101. 7%，RSD 为0.57%。结果表明本方法的回收率高，见表1。

2.7 溶出均一性考查 取3 批样品，照“2. 2”与“2.3”项下方法配制对照品溶液与供试品溶液，分别在10、20、30、45 和60 min 取样，绘制溶出曲线(见图2)，结果显示，本品在45 min 时已达到全溶出，按“2.1”项下色谱条件进样测定，结果表明该方法均一性较好。故取样点定为30 min 较合理。

表1 溶出度回收率结果

图2 利培酮胶囊(110401、110501、110601 批)溶出曲线

2.8 稳定性试验 取溶出度测定供试品溶液，分别于0、2、11、16 和24 h 按“2.1”项下色谱条件进样测定，按利培酮峰面积计算RSD 为0.78%。结果表明，利培酮供试品溶液在24 h 内稳定。

2.9 辅料干扰试验 按处方比例称取空白辅料，混匀，取相当于一粒胶囊的辅料量，按“溶出度测定法”项下方法配制空白辅料溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果表明，空白基质峰不干扰利培酮的测定，并与杂质峰完全分离。

2.10 样品溶出度测定 3 批样品按“2.3”项下方法测定，结果见表2。

表2 溶出度测定结果

3 讨论

3.1 流动相的选择 原国标YBH 10752006 利培酮胶囊溶出度测定采用小杯法;以甲醇-0.04 mol/L 醋酸铵溶液(醋酸调节pH 至3.0)(50∶ 50)为流动相。根据利培酮原料及其他制剂的有关物质检查色谱系统，经试验，建立了以甲醇-0.05 mol/L 醋酸铵溶液(用氨试液调节pH 至7.0)(60∶ 40)为流动相的色谱系统。该色谱系统下，利培酮峰与相邻杂质峰的分离效果更佳。由于本品规格仅为1 mg，为满足HPLC 法测定要求，溶出介质体积确定为500 ml。

3.2 测定波长的选择 原国标YBH 10752006 利培酮胶囊溶出度测定检测波长为274 nm，考虑到利培酮胶囊有关物质与含量测定检测波长均为234 nm，故溶出度测定检测波长统一为234 nm。

3.3 滤膜吸附试验 取对照品溶液，考查0.45 μm 滤膜的吸附情况。比较弃初滤液5、10 和15 ml，结果表明，弃初滤液15 ml 后滤膜无吸附。故拟定标准中规定，30 min 时取溶液滤过，弃去初滤液15 ml，取续滤液作为供试品溶液。