三参丹冲剂对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌缺血模型的保护作用研究

丁莹，孔菲，梁雪，高彦宇，段富津

(1．黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040;2．黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江 哈尔滨 150001)

心肌缺血，是指心脏的血液灌注减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量代谢不正常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态。心肌缺血是冠心病最基本的病理生理过程［1］。三参丹冲剂为名老中医段富津教授的经验方，经临床验证，其具有益气养血，活血化瘀，改善心肌缺血之功。本研究用腹腔注射异丙肾上腺素(ISO)的方法制备大鼠心肌缺血模型，观察三参丹冲剂是对天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)活性的影响，进一步探讨三参丹抗心肌缺血的作用机制，为临床应用提供理论依据。

1 材料与仪器

1．1 实验药物与试剂

盐酸异丙肾上腺素(上海禾丰制药有限公司，国药准字H31021344，批号070503);白参、黄芪、川芎、丹参、三七、血竭、当归(购于黑龙江中药大学附属第一医院);硝酸异山梨酯片(太原市振兴制药有限责任公司，规格:5mg/片，国药准字 H14021755);乌拉坦(上海山浦化工有限公司，批号20050228);生理盐水(哈尔滨三联药业有限公司，批号100102A10);丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒(速率法)、天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒(速率法)(中北控生物科技股份有限公司)。

1．2 动物

Wistar大鼠90只，雌雄各半，体质量180～200g购自北京通利华实验动物技术有限公司，许可证编号:SCXK(京)2012－0001。

1．3 主要仪器

Medlab生物信号采集处理系统(南京美易科技有限公司，型号:u/4c501);KDC－40 低速离心机(科大创新股份有限公司中加分公司);自动生化分析仪(Glamour 2000);酶标仪(anthos 2010)。

2 实验方法

2．1 实验分组及给药方法

将90只实验大鼠腹腔注射20%乌拉坦(0．5ml/100g)麻醉，连接Ⅱ导联心电图，筛选出心率正常的大鼠60只。按照体表面积换算法确定三参丹冲剂相对于鼠的用量，将大鼠按照性别和体质量随机分为两组，每组再采取同样的方法分为6组，即三参丹冲剂高、中、低剂量组分别给予 10．08g/kg、5．04g/kg、2．52g/kg，阳性药组给予硝酸异山梨酯5．40g/kg，模型组给予等量的生理盐水，每组10只，连续灌胃给药14天，给药体积为1ml/100g。

2．2 造模方法

末次给药1h后，实验大鼠腹腔注射20%乌拉坦(0．5ml/100g)麻醉，连接Ⅱ导联心电图机，模型组和各给药组动物腹腔注射盐酸异丙肾上腺素溶液(ISO)30mg/kg，正常组给等容量生理盐水。

2．3 心电图正常大鼠筛选方法

大鼠给药后测定 5、10s，1、2、3、5、10、20、30min 各个时间点心电图，观察心电图ST段、T波是否异常，从而筛选心电图正常的大鼠。

2．4 测定生化指标方法

将心电图正常的大鼠6h后眼眶静脉取血，4℃离心(3500rpm，15min)后分离血清，测定天门冬氨酸氨基转移酶(AST Kit)、丙氨酸氨基转移酶(ALT Kit)。

2．5 统计学处理

3 结果

3．1 三参丹冲剂对大鼠心电图的影响

空白对照组大鼠心电图未见异常。模型组大鼠的心电图可见明显心肌缺血样改变，三参丹冲剂高、中、低剂量组及硝酸异山梨酯片组大鼠心电图较模型组紧急缺血样改变减轻。结果表明，腹腔注射异丙肾上腺素(ISO)能够导致大鼠心电图出现心肌缺血样改变，而三参丹冲剂对心肌缺血大鼠的异常心电图具有改善作用。

3．2 实验各组小鼠血清中AST、ALT活性比较

结果如表1所示，心肌缺血模型组大鼠AST、ALT活性明显高于空白组，有显著性差异(P＜0．01)。与模型组比较，三参丹冲剂高、中、低剂量组和阳性药组AST、ALT活性显著差异(P＜0．01)，三参丹冲剂高剂量组活性明显降低(P＜0．05 或P＜0．01)。结果表明，三参丹冲剂能显著降低心肌缺血模型大鼠血清中AST、ALT 活性。

表1 三参丹冲剂对心肌缺血模型大鼠血清生化指标的影响(±s，n=10)

表1 三参丹冲剂对心肌缺血模型大鼠血清生化指标的影响(±s，n=10)

注:与模型组比较，▲P ＜0．05，▲▲P＜0．01。

高剂量组 10．08 366．23±58．18▲ 95．97±7．78▲▲中剂量组 5．04 347．62±40．04▲▲ 91．40±5．58▲▲低剂量组 2．52 304．54±22．69▲▲ 85．54±5．06▲▲阳性药组 5．40 288．69±45．36▲▲ 67．82±6．62▲▲组模型组－423．84±62．45 111．3±15．44空白对照组－100．37±10．44▲▲ 48．46±4．82▲▲

4 讨论

冠心病的临床特点与中医学中的“胸痹”症候关系密切，病机有虚实两方面，实为寒凝、血瘀、气滞、痰浊，痹阻胸阳，阻滞心脉;虚为气虚、阴伤、阳衰，肺、脾、肝、肾亏虚，心脉失养。在本病症的形成和发展过程中，大多先实而后致虚，亦有先虚而后致实者。后世医家总结了前人的经验，提出了活血化瘀的治疗方法。三参丹冲剂具有益气养血，活血化瘀的功能，是根据段富津教授多年治疗冠心病、心绞痛临床经验方，通过现代提取工艺制成的颗粒剂。目前对冠状动脉粥样硬化性心脏病的防治研究多采用心肌缺血动物模型，广泛采用的有冠状动脉左前降支结扎诱导左室心肌缺血模型、异丙肾上腺素(isopioterenol，ISO)诱导全心缺血模型和Langendorff体外灌流全心缺血模型。ISO诱导心肌缺血模型因制作简单，不需要特殊设备，近年来广泛应用于药理、药效学的研究。用于心肌缺血损伤的造模剂量一般在60mg/kg以下［2］。ISO诱导的心肌缺血模型对心肌酶(谷草转氨酶AST、谷丙转氨酶ALT)水平明显升高。

“三参丹冲剂”为段富津教授的经验方，由白参、黄芪、川芎、丹参、三七、血竭、当归组成。方中白参为人参焯烫浸糖后干燥者，人参具有益气固脱功效，其药理作用为强心、扩张血管、调节血压、抗休克、抗心肌缺血等作用。黄芪具有强心作用，黄芪多糖是其主要成分，可对抗急性心肌缺血。川芎、当归在《本草汇言》记载:“芎䓖，上行头目，下调经水，中开郁结，血中气药，尝为当归所使，非第活血有功，而活气亦神验也”。丹参具有祛瘀止痛，活血通经，清心除烦之功效。三七具有散瘀止血，消肿定痛之功效。血竭散瘀定痛，共助三七活血化瘀止痛之效，且活血而不伤血。本实验研究结果表明，三参丹冲剂对异丙肾上腺素引起的心肌缺血模型大鼠的血清中AST、ALT的活性具有降低作用，从而为进一步研究其作用机制奠定基础。

［1］ 刘瑜，林荣．补阳还五汤对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌缺血的保护作用［J］．中药材，2009，32(3):380．

［2］ 张云，王阶，郭丽丽．异丙肾上腺素诱导心肌缺血损伤模型的研究进展［J］．医学综述，2010，16(23):3527－3530．