松针总黄酮抗氧化调血脂作用研究

刘红煜，刘树民，于栋华，李伟，王加志

(1．黑龙江生物科技职业学院，黑龙江 哈尔滨 150025;2．黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040;3．黑龙江中医药大学佳木斯学院，黑龙江 佳木斯 154007)

松针(Pineneedles)为松科(Pinaceae)松属(Pinus)植物的针状叶。现代研究表明，松针提取物中富含黄酮类化合物，有抗氧自由基作用［1－4］。本研究试图通过探讨松针总黄酮对饮食诱导肥胖大鼠自由基和血脂代谢的影响，为松针的减肥作用机制的研究提供实验依据。

1 材料与方法

1．1 实验对象 清洁级Wistar(4月龄)大鼠40只，雌雄各半，体质量(200±20)g，购于上海斯莱克实验动物中心。适应性喂养1周后随机分为4组，每组10只，分别为空白对照组(空白组)、膳食诱导肥胖组(模型组)、药物治疗组(治疗组)和维生素E对照组(对照组)。

1．2 实验材料 樟子松松针，采自黑龙江省大兴安岭塔河，经植物专家检验、鉴定为樟子松松针。

1．3 总黄酮的制备 新鲜松针洗净，干燥后称取200g，置具塞圆底烧瓶中，加入70%乙醇10倍量回流提取2次，2h/次。减压收干，热蒸馏水分散，静置后得棕黄色溶液及黑绿色沉淀，取棕黄色滤液减压蒸干，经聚酰胺柱处理，50%醇水洗脱组分为受试样品［5］。蒸馏水溶解，配成含生药1g/ml受试液备用。

1．4 动物实验预处理 高脂饲料配方如下:基础饲料50%、猪油10%、蔗糖20%、猪胆盐1%、鸡蛋10%、奶粉9%。每周称重，饲养12周。松针总黄酮灌胃给药4周，于末次给药后，禁食不禁水12h，乌拉坦腹腔注射麻醉，门静脉采血，4500 转离心15min分离得血清，测定血脂水平;立即摘取肝脏并用预冷的生理盐水洗净血液，滤纸吸干，按体积比1:9 加入低温预冷pH7．2的磷酸盐缓冲液匀浆，4℃离心(5000r/min)15min，取上清液测定抗氧化酶水平。

1．5 检测指标和方法 丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH－Px)和过氧化氢酶(CAT)，血清总胆固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)、血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL－C)、血清极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL－C)，测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供，严格按试剂盒说明进行测定。

1．6 统计学处理

用SPSS 13．0 软件对所有实验数据进行统计学处理，对数据进行方差分析和t检验，结果以均数±标准差(±s)表示。显著性水平定为P＜0.05 或P＜0.01。

2 实验结果

2．1 松针总黄酮对大鼠肝脏自由基代谢的影响

与模型组比较，治疗组SOD、GSH－Px和CAT的活性显著增强，MDA含量显著降低(P＜0．05)。见表1。

表1 松针总黄酮对大鼠肝脏自由基代谢的影响(±s)

表1 松针总黄酮对大鼠肝脏自由基代谢的影响(±s)

注:与模型组比较，*P ＜0．05。

nSOD(u/ml)GSH－Px(u/ml)MDA(μmol/L)CAT(u/mgprot)空白组 10 369．15 ±40．65393．75 ±45．16 4．80 ±0．11 269．66 ±29．70模型组 10 323．08 ±39．39356．16 ±42．12 6．01 ±0．13 142．82 ±26．33治疗组 10 371．88 ±41．87*432．03 ±65．02*4．89 ±0．20*210．29 ±13．37*对照组 10 358．80 ±40．08*412．33 ±62．12*4．82 ±0．18*201．81 ±11．77*

2．2 松针总黄酮对大鼠血脂的影响

结果显示，治疗组大鼠血清血脂水平与模型组相比，LDL－C、VLDL－C、TC、TG 都显著降低，差异显著(P ＜0．05)。见表2。

表2 松针总黄酮对大鼠血脂的影响(±s)

表2 松针总黄酮对大鼠血脂的影响(±s)

注:与模型组相比，*P ＜0．05。

组别 nLDL－C(mmol/L)VLDL－C(mmol/L)TC(mmol/L)TG(mmol/L)10 0．20 ±0．09 1．04 ±0．11 1．27 ±0．15 0．24 ±0．11模型组 10 1．74 ±0．71 8．94 ±2．6810．21 ±2．49 1．93 ±0．66治疗组 10 0．79 ±0．07*5．35 ±1．37*6．27 ±1．70*0．77 ±0．39*对照组 10 0．36 ±0．10*2．96 ±0．67*3．36 ±0．72*0．42 ±0．29空白组*

3 讨论

肥胖症是一种机体能量代谢障碍性疾病，是心脑血管疾病和糖尿病的高发危险因素，因为生活习惯的改变而在发达国家中高发［6］。

有研究显示，肥胖本身会造成自由基生成过多和消除不足［7－8］，氧自由基使细胞产生脂质过氧化，进一步导致其功能受损，产生多种脏器功能障碍。通过体外培养3T3 脂肪细胞的研究显示，H2O2 作用于培养的脂肪细胞，会使细胞氧化应激标记物上升［9］。而机体内存在着自由基防御酶，通过SOD歧化O－2 生成的H2O2，并在CAT作用下分解为H2O和O2，阻断毒性更强的羟自由基产生，GSH－Px主要作用是以GSH为底物，与SOD、CAT协同作用清除机体内的各种氧自由基，以减轻或阻断脂质过氧化反应，保护细胞免受氧化损伤。

本实验采用饮食性高脂血症动物模型实验方法。主要用于降血脂药物的筛选和评价，以及对人类高脂血症的研究。因大鼠对外源性胆固醇的吸收率高，对血脂的清除能力低，且便于采血和饲养管理，是一种比较理想的研究模型。

天然抗氧化剂松针总黄酮可以使大鼠抗氧化酶SOD、GSH－Px、CAT活性上升，MDA 含量下降，抑制脂质过氧化反应和自由基产生，并能调节血脂代谢，对诸如糖尿病、高血压、动脉硬化等一系列并发症有较好的防治作用。

［1］ 邢雁霞，刘斌钰，李丽芬．松针对小鼠应激能力和自由基代谢的影响［J］．中国预防医学杂志，2010，11(3):298－300．

［2］ 曾明，李守汉，郭层城，等．松针提取液对小鼠骨骼肌自由基代谢和运动能力的影响［J］．北京体育大学学报，2006，29(4):484－485．

［3］ 孔庆峰，杨金宇，潘西芬．松针药理作用研究进展［J］．中国医药导报，2010，7(26):16－17．

［4］ 俞灵莺，李向荣．植物黄酮类抗糖尿病及其并发症的研究进展［J］．国外医学·卫生学分册，2000，27(6):331－335．

［5］ 樊铁波，刘红煜，汤青，等．HPLC法测定松针中二氢槲皮素含量［J］．中国药师，2009，12(8):1046－1048．

［6］ 支涤静，沈水仙．肥胖的危害及预后［J］．中国全科医学，2003，6(4):2821－2822．

［7］ 王焰山．松针提取液对实验性高脂血症及过氧化作用的影响［J］．北京中医大学学报，2001，24(2):35－37．

［8］ 罗蓉．肥胖与自由基［J］．国外医学·内分泌分册，2004，31(24):9－10．

［9］ JeBailey L．Ceramide－and oxidant－induced insulin resistanceinvolve loss of insulin－dependent rac－activation and actinremodeling in muscle cells［J］．Diabetes，2007，56:394－403．