正交试验优选复方苦蛇黄洗剂提取工艺

★ 许时贵 丁志军 罗美兰 甘慧群 (江西省皮肤病专科医院 南昌330001)

复方苦蛇黄洗剂由苦参、乌梢蛇、黄柏等7 味中药组成，具有清热燥湿、解毒、杀虫、祛风止痒等功效。主要治疗风湿热虫所致皮肤瘙痒症以及疥疮、湿疹、丘疹性荨麻疹、体股癣、夏季皮炎等引起的瘙痒性皮肤病。为了将复方苦蛇黄洗剂更好地应用于临床，我院研究开发出携带及使用方便的复方苦蛇黄洗剂(批准文号:赣药制字H20100009)，并对其制备工艺进行了研究。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1 100 高效液相色谱(HPLC)系统(美国安捷伦科技有限公司);CP225D 微量天平(德国Sartorius 公司);KQ －500E 医用超声清洗器(昆山超声仪器有限公司)。

苦参碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号分别为110753 －200512);乙腈为色谱纯、甲醇为色谱纯;磷酸为分析纯。

2 方法与结果

2.1 评价指标的确定

复方苦蛇黄洗剂处方中有多味药材，有效成分众多，其中苦参为君药，具有清热燥湿，杀虫，利尿，止痒功效。苦参主要含有生物碱成分，而以苦参碱含量最高，因此选择苦参碱为含量测定指标。

2.2 苦参碱的含量测定［1］

2.2.1 测定方法

照高效液相色谱法《中华人民共和国药典》(2010 版)一部附录附录ⅥD 测定。

2.2.2 色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈－甲醇－磷酸盐缓冲液(pH6.8)－三乙胺(18∶18∶70∶0.1)为流动相;检测波长为220nm。理论板数按苦参碱峰计算应不低于3 000。

2.2.3 对照品溶液的制备

精密称取苦参碱对照品10mg，置50mL 容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，精密吸取5mL，置10mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1mL 含苦参碱100μg 的溶液，作为对照品溶液。即得。

2.2.4 供试品溶液的制备

精密吸取本品2mL，加水20mL，用氨试液调PH值为9 －10，用三氯甲烷提取4 次，每次20mL，合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液5mL，置10mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.5 测定法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

图4 高效液相色谱图

2.3 正交试验优选提取工艺

2.3.1 试验设计

通过预试验对影响水煎煮的各因素进行考察，选择加水量(A)、提取时间(B)、为影响水煎煮的主要因素，每个因素选取3 个水平。因素水平见表1。

2.3.2 正交试验安排及结果

按处方比例称取苦参等药材800g，共9 份，根据L9(34)正交试验设计表，将药材浸泡0.5 小时后提取。提取完毕后，将不同条件下的加水煎煮2 次，滤过，合并滤液，分别浓缩至900mL，备用。以苦参碱为评价指标进行试验。正交试验结果见表2。

表1 因素水平表

表2 L9(34)正交试验结果

结论:从上表结果并按直观分析，影响水煎提取工艺的因素为A ＞B，最佳提取工艺为A3B3，故拟选择A3B3，即苦参等药材加水煎煮2 次，第1 次加12倍量水，煎煮2 小时，第2 次加10 倍量水，煎煮1.5小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至900mL。

2.4 工艺验证试验

为了验证正交试验结果的准确性，以确保提取工艺合理可行，按上述工艺条件A3B3，重复安排3批试验。结果，苦参碱含量分别为2.70mg/mL、2.73mg/mL、2.69mg/mL，与正交试验较好的结果相近，表明优选的工艺合理、可行。

3 讨论

本试验曾参考文献［2－4］采用不同流动相系统进行洗脱。结果发现，乙腈－ 甲醇－ 磷酸盐缓冲液(pH6.8)－三乙胺(18∶18∶70∶0.1)溶液即能将指标成分与杂质峰彻底分开，且阴性试验无干扰，故采用此流动相进行洗脱。

采用正交设计，并根据预试验，确定了水提工艺的最佳条件，即称取水提取药材，加水煎煮两次，第1 次加12 倍量水，煎煮2 小时，第2 次加10 倍量水，煎煮1.5 小时，其中第1 次提取前先将药材浸泡0.5 小时。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［S］. 北京:中国医药科技出版社，2010:188.

［2］王颖，王秋香.高效液相色谱法测定妇炎康浓缩丸中苦参碱的含量［J］.中国药房，2005，16(24):1 901.

［3］廖银根，丁志军，罗美兰，等.正交试验优选荆防止痒颗粒提取工艺［J］.中国药房，2011，22(39):3 673 －3 675.

［4］任洁，刘光斌，邹干朋，等.HPLC 测定舒阴洗液中苦参碱的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16(18):76，77.