替米沙坦联合氨氯地平对肾性高血压大鼠左室重构的对比研究*

马香芹 黄显峰 卢泽恺 张 琨 唐滋贵 胡新辉 付国辉 杨红梅

左室重构已被确认为是高血压患者发生心力衰竭、脑血管意外、肾功能损害等严重并发症的独立危险因素[1]。在高血压的治疗过程中，除降压外，还要尽可能延缓左室重构，防止心肌结构发生有害改变。目前，只是用单一降压药治疗高血压已经不能满足需求，寻找有效的联合用药降低血压、阻止或逆转左室肥厚成为高血压治疗的新趋势[2-3]。研究表明替米沙坦[4]和氨氯地平[5]在降压的同时均有阻止或逆转左心室肥厚的作用，但有关两者联合应用对左心室重构的影响尚少见报道。本研究通过替米沙坦和氨氯地平联合应用对肾性高血压大鼠左室重构的影响，旨在为临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料 健康雄性清洁级SD大鼠50只，体质量150～180 g，购自河南省实验动物中心，合格证号：SCXK(豫)2010-0002。Thermo Multiskan MK3（芬兰雷勃）；XH100型清醒大鼠血压测量装置（北京新航）；BL-420F生物信号采集系统（成都泰盟）；D-37520型高速低温离心机；替米沙坦片（天津华津制药有限公司提供，生产批号：1M6736T），以无菌蒸馏水配制成10 mg/L溶液；苯磺酸氨氯地平片（宜昌长江药业有限公司提供，生产批号：1112005），以蒸馏水配制成2.5 mg/L溶液。

1.2 实验方法

1.2.1 模型的建立 大鼠适应性饲养10 d后，测量其基础尾动脉压。然后随机分成5组：假手术组、两肾一夹高血压模型组（2KIC组）、替米沙坦（10 mg/kg）组、氨氯地平（2.5 mg/kg）组、替米沙坦（10 mg/kg）+氨氯地平（2.5 mg/kg）组（联合用药组），每组10只。以6%水合氯醛腹腔注射麻醉，从腹部左侧切口，分离左肾动脉，0.3 mm针灸针与肾动脉并行放置，用1号丝线将两者一起结扎，随后抽出针灸针，逐层缝合伤口。右肾不涉及。假手术组只分离左肾动脉不结扎。术后1周测尾动脉压，连续3次取平均值。术后4周动脉压≥150 mm Hg即为两肾一夹高血压模型制备成功。术后4周，各给药组连续灌胃给药16周。期间每周测1次尾动脉压。

1.2.2 血浆肾素活性（PRA）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、心钠素（ANP）含量的检测 大鼠灌胃给药第16周末，6%水合氯醛腹腔注射麻醉后，腹主动脉取血5 mL，迅速注入放在冷水浴冷却的酶抑制剂抗凝管中（每支抗凝管加入50 μL EDTANa2、50 μL 8-羟基喹啉，25 μL二巯基丙醇），摇匀。PRA、AngⅡ检测管于4℃1 000 r/min，离心5 min，ANP检测管于4℃3 000 r/min，离心10 min，分离血浆，-25℃保存。按照酶联免疫试剂盒说明书操作，检测血浆AngⅡ、PRA、ANP含量。

1.2.3 左室质量指数(LVMI)的测定 第16周末取血并称取体质量(BW)后处死，迅速取出心脏，放入预冷的生理盐水中洗净血液，分离连接组织和脂肪，沿房室交界处去除大血管、心房及右心室游离壁，保留左心室及室间隔，滤纸吸水后用十万分之一电子天平称左室质量（LVM），计算LVMI=LVM/BW。

1.2.4 心肌电镜观察 大鼠处死后迅速取出心脏，放入预冷的生理盐水中洗净血液，立即在冰蜡板上切取1 mm×1 mm×1 mm的左心室组织，放入戊二醛固定液中，4℃冰箱放置4 h后，清洗、固定、包埋、超薄切片、电子染色后透射电镜观察。

1.3 统计学方法 应用SPSS 17.0进行统计学处理。计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示。多组间比较用单因素方差分析，组间多重比较采用LSD-t法，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 各组大鼠收缩压的变化 各组的基础收缩压差异无统计学意义，2KIC组、氨氯地平组、替米沙坦组、联合用药组的给药前收缩压均高于假手术组（P＜0.01），灌胃给药16周末，各给药组收缩压比2KIC组降低（P＜0.01）；联合用药组与两单用药组相比降压效果更显著（Plt;0.01），见表1。

Table 1 Comparison of systolic blood pressure and left ventricular mass index(LVMI)between five groups表1 各组大鼠收缩压及LVMI比较 （n=10，x±s）

2.2 各组大鼠LVMI比较 2KIC组的LVMI高于假手术组，各给药组的LVMI均低于2KIC组（Plt;0.01）；氨氯地平组和替米沙坦组的LVMI差异无统计学意义，但联合用药组的LVMI低于两单用药组（Plt;0.01），见表1。

Figure 1 Electron micrographs of myocardium in five groups(×10 000)图1 各组心肌超微结构电镜图(×10 000)

2.3 心肌电镜超微结构的改变 见图1。假手术组心肌肌丝排列整齐、连续，线粒体等细胞器间距适当，结构完整，细胞核染色质分布较均匀。2KIC组大量肌丝排列紊乱、断裂严重，线粒体肿胀、空泡样变，细胞核固缩成锯齿状，异染色质边集，核周隙增宽。其余3个用药组较2KIC组好转，联合用药组病变改善程度明显优于2个单用药组，大部分肌纤维排列紧密，线粒体嵴突增多，排列相对适当，细胞核无边聚。

2.4 血浆PRA、AngⅡ、ANP水平的变化 2KIC组的血浆PRA、AngⅡ、ANP含量均高于假手术组（P＜0.01），各给药组的血浆PRA、ANP水平均低于2KIC组（Plt;0.01），氨氯地平组和替米沙坦组的血浆AngⅡ水平高于2KIC组，但联合用药组的血浆AngⅡ水平低于2KIC组（P＜0.01）；联合用药组的血浆AngⅡ、ANP含量低于两单用药组（P＜0.01），但血浆PRA水平差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

Table 2 Changes of plasma PRA,AngⅡand ANP levels in five groups表2 各组大鼠血浆PRA、AngⅡ、ANP水平的变化（n=10，ng/L，x±s）

3 讨论

在高血压治疗中，联合降压药物治疗的最终目的不只是降低血压，更为了降低各种心血管事件发生的危险性。氨氯地平属于钙离子拮抗剂，不仅能抑制血管平滑肌细胞和心肌细胞钙离子跨膜内流，而且可以直接作用于血管平滑肌细胞，从而降低周围血管的阻力以及血压。替米沙坦是新型非肽类AngⅡ受体拮抗剂，可以竞争性阻断AngⅡ与其受体结合，从而拮抗AngⅡ引起的血管收缩，交感神经兴奋，醛固酮分泌增多等作用，降压效果明显平稳。两者联用通过不同的作用机制降压效果起协同作用[3，6-7]。本研究结果也表明氨氯地平和替米沙坦联合用药比单一用药相的降压效果显著。

左室质量指数高低反映左室重构的严重程度，本研究结果显示2KIC组与假手术组相比，LVMI显著增加，且2KIC组心肌电镜超微结构显示大量肌丝排列紊乱，线粒体肿胀，细胞核固缩成锯齿状。表明2KIC组大鼠已经出现左室重构。各给药组的LVMI显著下降，联合用药组与两单用药组相比LVMI降低更明显；且联合用药组病变改善程度明显优于两单用药组。表明这两种药物联用不仅降压效果良好且能更显著地改善高血压左室重构。

血液肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）的激活对高血压左室重构的发生起重要作用，本研究2KIC组血浆PRA、AngⅡ含量均明显升高，说明血压升高使大鼠RAAS处于激活状态。氨氯地平和替米沙坦单用药组治疗16周后，大鼠AngⅡ水平不仅未下降反而上升，可能原因为替米沙坦通过阻断AngⅡ与其受体的结合发挥降压作用，导致血浆AngⅡ由于结合减少而游离浓度增加。钙离子拮抗剂中的不同药物及其不同剂量对RAAS的影响,结果都不尽相同[8-9]。本研究氨氯地平降低血浆PRA水平，升高AngⅡ含量，但替米沙坦联合氨氯地平给药组血浆AngⅡ水平显著下降，提示联合用药疗效优于任何单一用药，能更加彻底抑制RAAS，进一步降低血压和逆转左室重构，其作用机制尚需进一步研究。

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