大豆皂甙对糖尿病大鼠脾细胞IL－2和γ－IFN的影响

叶保国，闻春艳，李新白，朱庆三，宋雪松＊

（1.吉林大学第一医院 麻醉科，吉林 长春130021；2.吉林大学中日联谊医院 病理科，吉林 长春130033；3.吉林大学第一医院 脊柱外科，吉林 长春130021）

我国有悠久的大豆栽培历史，大豆产品是我国人民日常生活不可缺少的食品［1］。以往的研究表明大豆皂甙有降血脂、抑制肿瘤、抗血栓、抗病毒、免疫调节等多种生物活性［2］，但对糖尿病大鼠脾脏的作用研究尚未见相关报道，本实验旨在观察大豆皂甙对糖尿病大鼠脾脏淋巴细胞转化率、IL－2及γ－IFN水平的影响，为研究大豆皂甙对免疫系统的调节机制提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物和主要试剂 190－210g健康雄性Wistar大鼠45只，由吉林省药品检验所提供（合格证号960101032）；大豆皂甙（SS）由吉林省中医中药研究所提供；实验用大豆皂甙用生理盐水稀释；链脲佐菌素（STZ）购于Sigma公司，3H－TdR购于北京原子能研究所，ConA、IMDM、小牛血清购于四季青生物工程公司

1.2 糖尿病模型制备 在实验分组前，首先制备糖尿病模型，随机取实验动物35只，腹腔注射STZ（用新配制的枸橼酸缓冲液溶解）50mg／kg；48h后采尾血测空腹血糖，浓度大于16.7mmol／L为模型复制成功［3］，该模型成功30只。

1.3 实验分组及给药 取未造模的10只动物做正常对照组，造模成功的30只动物随机分为糖尿病对照组（15只）、大豆皂甙给药组（15只），大豆皂甙给药组每日灌胃大豆皂甙10mg／kg，正常对照组及糖尿病对照组均每日给与等剂量生理盐水，连续给药3个月。在实验过程中糖尿病对照组动物死亡4只、大豆皂甙给药组动物死亡1只。

1.4 指标检测

1.4.1 脾体比 取材前称大鼠体重，然后脱臼处死，无菌取出脾脏，称重，得脾体比值。

1.4.2 HE染色 脾脏常规固定、脱水、透明、浸蜡、包埋；切片5μm，HE染色，光学显微镜观察。

1.4.3 淋巴细胞转化实验 将无菌取出的脾脏制备单细胞悬液，加入含ConA的IMDM培养板中，37℃，5%CO2培养箱孵育72h，于培养结束前12h加3H－TdR，在液闪测定仪上测淋巴细胞转化率。

1.4.4 IL－2的检测 同样制备单细胞悬液，加入含ConA的IMDM培养板中，37℃，5%CO2培养箱孵育48h，离心取上清，将其加入含有IL－2的培养板中，再孵育48h，然后加入3H－TdR再培养8h，液体闪烁计数仪测定同位素掺入量。

1.4.5 γ－IFN的检测 用结晶紫法检测［4］，上清制备同上，染色后用722分光光度计于540nm波长处测A值。

1.5 统计学分析 大鼠体重及肾组织的各指标（SOD、CAT、LPO、GSH－Px）均以±s表示，应用SPSS19.0统计软件进行统计学处理，多个样本均数间比较采用方差分析。

2 结果

2.1 脾体比 与对照组相比较，糖尿病模型组和大豆皂甙治疗组的脾体比无显著性差异（P＞0.01），见表1。

2.2 脾脏的形态学检测 与对照组相比较，糖尿病模型组和大豆皂甙治疗组的脾脏的形态结构无显著性差异（P＞0.01）。

2.3 脾脏淋巴细胞转化率的检测 与对照组相比较，糖尿病模型组可使大鼠脾脏淋巴细胞转化率明显降低（P＜0.01），大豆皂甙治疗组可使大鼠脾脏淋巴细胞转化率明显升高（P＜0.01），而对照组和大豆皂甙治疗组无明显差异（P＞0.01），见表1。

2.4 脾淋巴细胞IL－2活性的检测 与对照组相比较，糖尿病模型组可使大鼠脾淋巴细胞IL－2水平明显降低（P＜0.01），大豆皂甙治疗组可使大鼠脾淋巴细胞IL－2水平升高（P＜0.01），而对照组和大豆皂甙治疗组无明显差异（P＞0.01），见表1。

2.5 脾淋巴细胞γ－IFN活性的检测 与对照组相比较，糖尿病模型组可使大鼠脾淋巴细胞γ－IFN水平明显降低（P＜0.01），大豆皂甙治疗组可使大鼠脾淋巴细胞γ－IFN水平升高（P＜0.01），而对照组和大豆皂甙治疗组无明显差异（P＞0.01），见表1。

表1 大豆皂甙作用下Wistar大鼠脾脏免疫指标的比较（n＝10，±s）

表1 大豆皂甙作用下Wistar大鼠脾脏免疫指标的比较（n＝10，±s）

＊P＜0.01，△P＞0.01compared with control group；

Group spleen body thanlymphocyte transformation rate（cpm） IL－2（cpm） γ－IFN（A）82.3 0.387±0.023 Diabetic model 0.38±0.05△ 634.68±21.23＊ 14257.3±1328.6＊ 0.193±0.080＊SS treatment 0.35±0.07△ 1028.35±39.66△ 19893.4±1452.6△ 0.365±0.021 Control 0.36±0.04 1074.32±45.63 20374.1±17△

3 讨论

大豆皂甙具有抗补体、增强造血功能、促进脾细胞增殖、免疫调节、肝损伤保护和促进溃疡愈合的作用，但其对T细胞及免疫功能影响的研究还不够深入［5，6］。机体的免疫调节主要是通过细胞免疫和体液免疫，而IL－2和γ－IFN是细胞免疫的主要参与者，二者主要由机体内Th1细胞分泌，它能维持T细胞在体外的生长，激活多种免疫细胞，是调节机体免疫功能最主要的细胞因子［7，8］，因此IL－2和γ－IFN作为细胞因子网络中重要的调节因子，在调节机体免疫功能、抗肿瘤方面发挥着重要的作用［9，10］。本实验的研究表明糖尿病大鼠脾脏IL－2和γ－IFN水平非常显著地低于正常对照组（P＜0.01）；经大豆皂甙治疗3个月后糖尿病大鼠脾脏IL－2和γ－IFN水平非常显著地升高，与正常对照组比较无显著性差异（P＞0.01）。分析其原因，可能是糖尿病大鼠Th1细胞减少，致使分泌IL－2和γ－IFN减少，并导致细胞免疫功能的降低；另一原因可能是糖尿病大鼠的cAMP／cGMP（腺苷环化酶／乌苷环化酶），前列腺素E／前列腺素F的比值失衡的结果，这些都可能是造成糖尿病大鼠IL－2和γ－IFN含量降低的主要原因之一。综上所述，对糖尿病大鼠脾脏IL－2和γ－IFN的检测，对探讨大豆皂甙对糖尿病大鼠的免疫调节机制具有重要的临床价值。

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