含羞草总黄酮不同提取方法的比较*

吴崇珍，李玉贤，袁 珂，王 勇，张泽志，王艳坤

1)河南教育学院化学系 郑州 450046 2)河南中医学院药学院 郑州 450008 3)浙江农林大学林生院 临安 311300

含羞草具有安神止痛、化痰止咳、清热利尿等功效，主要分布在我国热带、亚热带地区，资源丰富，便于采集[1]。从含羞草中已相继分离出黄酮苷类、酚类、皂苷等化合物[2-5]。作者分别用回流提取、微波萃取、超声提取[6]、渗漉提取、冷浸提取、索氏提取6种方法对含羞草总黄酮进行提取，同时以芦丁作对照品进行总黄酮含量测定，比较提取效率，探讨含羞草总黄酮的最佳提取方法。

1 材料、方法与结果

1.1材料与仪器含羞草样品采自海南三亚，由海南大学药用植物学教授黄世满鉴定为豆科含羞草；芦丁对照品从中国药品生物制品鉴定所购买。 实验所需仪器如下：UV-2102PCS紫外可见分光光度计(上海龙尼柯仪器有限公司)，KQ-250B超声波提取器(昆山市超声仪器有限公司)，NJL07-3型实验专用微波炉(南京杰全微波设备有限公司，额定功率800 W)，Millipore Sim-plicity型超纯水器(美国Millipore公司)，RE-52A 旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，真空薄膜浓缩装置(自装[7])，101-1型电热恒温干燥箱，微量分析天平(EETTLER AE 240，瑞士)，微孔滤膜(上海医药工业研究院)。

1.2含羞草样品中总黄酮的提取

1.2.1 回流提取 准确称取粉碎并过60目筛的含羞草3份，每份20 g，分别置于圆底烧瓶中，在80 ℃恒温水浴锅中，加200 mL体积分数60%乙醇，回流3 h，提取 3 次。提取后抽滤，合并提取液，将滤液旋转蒸发浓缩，定量转移到100 mL容量瓶中，用体积分数60%乙醇稀释定容至刻度，摇匀。

1.2.2 微波萃取 准确称取粉碎并过60目筛的含羞草3份，每份20 g，分别置于微波炉中，用体积分数60%乙醇微波萃取，将提取液蒸发浓缩，定量转移到100 mL容量瓶中，用体积分数60%乙醇定容至刻度，摇匀。

1.2.3 超声提取 准确称取粉碎并过60目筛的含羞草3份，每份20 g，用回流提取所用溶剂超声提取，将提取液蒸发浓缩，余同1.2.2。

1.2.4 渗漉提取 同回流提取准确称取过筛的含羞草，用回流提取所用溶剂渗漉提取，将渗漉液浓缩，余同1.2.2。

1.2.5 冷浸提取 同回流提取准确称取过筛的含羞草，用回流提取所用溶剂冷浸提取，将提取液浓缩，余同1.2.2。

1.2.6 索氏提取 同回流提取准确称取过筛的含羞草，用回流提取所用溶剂进行索氏提取，将提取液浓缩，余同1.2.2。

1.3含羞草样品中总黄酮含量的测定

1.3.1 标准曲线 芦丁对照品标准溶液的配制：准确称取烘干至恒重的芦丁对照品，配成质量浓度为0.128 g/L的芦丁对照品标准溶液。用吸量管准确取上述标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL于6只10 mL容量瓶中，参考文献[2]的对应步骤依次测定其吸光度(A)，以芦丁质量浓度C为横坐标，相应的A为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程：A=9.050 6C+0.006 8(R2=0.999 6)。

1.3.2 样品测定 分别准确吸取上述6种提取方法所得的提取液 2 mL，置于25 mL容量瓶中，加入体积分数60%乙醇定容至刻度，摇匀，此为稀释分析液。取稀释分析液1.0 mL置于10 mL容量瓶中，按照1.3.1项所述的方法进行测定，按回归方程计算出样品溶液中的总黄酮质量浓度，根据稀释倍数及样品质量计算出样品中总黄酮的质量分数。

1.4结果见表1。

表1 6种提取方法提取的总黄酮质量分数的比较

两两比较，P均<0.05。

2 讨论

采用6种不同的提取方法对含羞草总黄酮进行提取，提取效率依次为：超声提取>微波萃取>回流提取>渗漉提取>索氏提取>冷浸提取。其中，超声提取法、微波萃取法和回流提取法的提取效率较高。

分析比较可知，超声提取含羞草中的总黄酮成分完全，提取效率较高，节省溶剂和能源，被提取的黄酮成分不易被破坏。微波萃取提取出的有效成分量稍低于超声法，是由微波辐射所引起的短时高温对其中的热敏性黄酮成分的影响所致，但微波萃取的时间更短，有快速高效的特点。回流提取时间较长，溶剂用量较大，因溶液长时间受热，存在黄酮成分在持续较高温度下可能发生变化并流失的问题。

综上所述，含羞草总黄酮的提取工艺有多种，从提取效率和总黄酮成分的热稳定性考虑，应优选超声提取和微波萃取。

[1] 国家中医药管理局编委会.中华本草：第4卷[M]. 上海:上海科技出版社,1999：573

[2] 袁珂, 吕洁丽, 殷明文.海南含羞草中黄酮碳苷类化学成分的研究[J]. 药学学报, 2006,41(5):435

[3] 袁珂, 贾安, 吕洁丽, 等. 含羞草中新黄酮碳苷的结构鉴定[J].分析化学, 2007, 35(5):739

[4] 吴崇珍, 王艳坤, 李玉贤, 等. 含羞草组成成分药学研究进展[J].河南教育学院学报, 2013, 22(1):27

[5] Zhang J, Yuan K, Zhou WL, et al. Studies on the active components and antioxidant activities of the extracts ofMimosapudicaLinn. from the southern of China[J]. Pharmacogn Mag， 2011,7(25):35

[6] 乔文涛, 张静, 俞凌雁, 等. 含羞草中总黄酮提取纯化工艺研究[J]. 时珍国医国药, 2009, 20(8):1986

[7] 袁珂, 俞莉. 真空薄膜浓缩装置的研制及应用研究[J]. 分析化学,2005,33(9):1358