益气活血安胎中药对异种皮肤移植急性排斥反应的影响＊

盛黎黎 李 靖 张志强 李 斌 杨天娇 吴云霞△

1 武警湖北总队医院病理科，武汉 430061

2 华中科技大学同济医学院药学院中药系，武汉 430030

随着西药在免疫抑制的运用中逐渐显现出的一系列不良反应和毒副作用，人们逐步认识到从中药中寻求新的抗免疫排斥反应的药物可能是一个新的途径。本实验将具有益气活血作用的黄芪等药物按一定比例应用于大小鼠间背－背皮肤移植模型，取得较好疗效，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物

选用SD大鼠36只，雌性，8～12周龄，体重约200g；清洁级昆明小鼠36只，雌性，健康且未交配，8～12周龄，体重25～30g［实验动物均由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，实验动物合格证号SCXK（鄂）2004－2007］。在室温18℃～22℃，相对湿度70%～85%的动物房内分笼饲养，自由摄食，饮水。

1.2 实验用药

由黄芪、黄芩、续断、白术、丹参5味中药按一定比例组成，采用60%乙醇回流提取，挥干乙醇，浓缩至每1ml含生药1g（1g／ml），4℃保存备用（药材由武汉康乐大药房提供并粉碎）；醋酸地塞米松（H33020822，浙江仙珺制药股份有限公司，批号：0804107）用生理盐水溶解，配成0.075mg／ml的溶液。

1.3 实验方法

取SD大鼠，腹腔注射25%乌拉坦麻醉后，剔去背部毛发，剪下背部皮肤适当大小，用刀片切成1.0cm×1.0cm大小的皮片20片，置生理盐水培养皿中浸泡备用。将受体小鼠随机分成3组，每组12只，分别用25%乌拉坦腹腔麻醉，剔去背部鼠毛，75%医用酒精消毒后，剪下背部1.0cm×1.0cm大小的皮肤，撒上适量青霉素钠消炎，即为植床，自培养皿中取出供皮，吸干水分，将供皮平铺于植床上，创可贴适当加压包扎［1］。于手术当天开始灌药，至观察终点。中药组：中药醇提取物相当于生药材16.00g／kg·d灌胃；阳性对照组：醋酸地塞米松溶液，第1、2天0.90g／kg·d灌胃，第3、4天0.75g／kg·d灌胃，第5、6天0.60g／kg·d灌胃，之后逐渐减少至0.30g／kg·d，并维持该剂量给药；阴性对照组：生理盐水灌胃。术后第5、10天各组剪下其移植皮片，置4%甲醛溶液固定，石蜡包埋切片，苏木精－伊红染色，光镜观察；每组剩余小鼠继续用药，记录皮片存活时间。

1.4 统计学处理

应用SPSS 17.0软件进行分析，计量资料采用单因素方差分析，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 移植皮片生长情况

阴性对照组移植皮片术后2d皮片苍白柔软，第3天起逐渐变红润，从第8天起皮片颜色逐渐由红润变成暗红，质地逐渐由柔软变干变硬，平均第11天完全变黑变硬坏死，随即脱离。中药组术后2d皮片苍白柔软，第3天起逐渐变红润，从第11天起皮片颜色逐渐由红润变成暗红，质地逐渐由柔软变干变硬，平均第15天完全变黑变硬坏死，随即脱离。阳性对照组术后前几天变化同中药组，从第11天起皮片颜色逐渐由红润变成暗红，质地逐渐由柔软变干变硬，第12天起小鼠开始出现精神萎靡不振，全身震颤等现象，并逐渐加重，皮片平均至第16天完全变黑变硬坏死，随即脱离。

2.2 移植皮片存活率和存活时间

异种皮肤移植急性排斥反应约发生在移植后1周，移植后第5天观察各组移植皮片存活良好，各组间存活面积比较差异无统计学意义，移植后第10天观察各组移植皮片，中药组存活面积明显大于阴性对照组（P＜0.05），且优于阳性对照组，中药组和阳性对照组移植皮片存活时间较阴性对照组明显延长。见表1。

表1 移植皮片存活情况（n＝12）

2.3 移植后第5天移植皮肤组织学观察

移植后第5天见各组皮肤失去正常结构，角质层增厚，表皮层变薄，皮肤附属器减少，全层细胞数目减少。阴性对照组明显见正常皮肤与移植皮肤交界处和真皮层大量炎性细胞浸润，细胞核溶解坏死，少有再生纤维组织；中药组和阳性对照组正常皮肤与移植皮肤交界处和真皮层少量炎性细胞浸润，细胞核溶解坏死，但伴较多再生纤维组织。见图1。

2.4 移植后第10天移植皮肤组织学观察

移植后第10天见各层皮肤失去正常结构，角质层增厚，表皮层、皮肤附属器减少甚至消失，全层细胞数目剧烈减少。阴性对照组明显见正常皮肤与移植皮肤交界处和真皮层大量炎性细胞浸润，细胞核溶解坏死；中药组和阳性对照组正常皮肤与移植皮肤交界处和真皮层少量炎性细胞浸润，细胞核溶解坏死，再生纤维组织减少。见图2。

3 讨论

现阶段常用的激素类免疫抑制剂（如本实验中所用的地塞米松），虽然在免疫抑制方面效果很好，作用很强，但其毒副作用也相应很大［2－3］。本实验表明，在安全剂量范围内对小鼠使用这类药物超过12d左右，小鼠会出现精神萎靡不振、毛发耸立等明显毒副作用，而中药组既有较好的免疫抑制作用，可延长移植皮片的存活时间，且无明显毒副作用。同时还发现移植后第5天移植皮片与正常皮肤交界处较早出现炎性细胞浸润，而移植皮片与植床的交界处，即皮下组织处，出现炎性细胞浸润等免疫排斥现象的时间稍晚，本实验中药是由续断、黄芪、白术、丹参、黄芩组成的复方，该方以益气健脾，清热安胎，养血活血立法，前期主要运用于促进胚泡着床，防止流产，取得较好疗效［4］，其安胎机制与抑制NF－κB的表达和促进新血管生成相关，因此设想将其试用于移植排斥反应，实

验结果表明该复方中药可以明显抑制皮肤交界处及皮下组织炎性细胞浸润并抑制引起排斥反应，其效果与地塞米松相似。本方主要以益气活血安胎为其主要药物组成，也有报道［5－6］将其他不同安胎中药用于肾急性排斥反应，取得较好疗效，考虑益气活血安胎中药的实质即与抑制排斥反应有关，益气活血安胎中药中可能有抑制免疫排斥和直接抑制NF－κB的活性成分，值得以后进一步深入研究，这些药物如被开发，将具有广阔的开发运用前景。

图1 移植后第5天皮肤病理切片（苏木精－伊红染色，×100）

图2 移植后第10天皮肤病理切片（苏木精－伊红染色，×100）

［1］樊拥军，张凤蕴，张飚，等.一种简单的小鼠皮肤移植方法［J］.哈尔滨医科大学学报，2000，34（5）：332－333.

［2］夏宝森，李小康.FTY720：一个来源于冬虫夏草的新型免疫抑制剂［J］.上海免疫学杂志，2002，22（2）：79－81.

［3］R.比林厄姆，W.西尔弗斯.移植免疫生物学［M］.杨松榆，译.北京：科学出版社，1979：210－211.

［4］WU YX，ZHENG CH，HU LL，et al.Local immune regulatory effects of Bangdeyun on the endometrium of mice with embryo implantation dysfunction during the implantation time［J］.J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci，2009，29（3）：372－376.

［5］王巍，毕旭东，孙德光，等.中药安胎养血合剂对大鼠肾移植急性排斥反应免疫抑制作用的研究［J］.辽宁中医杂志，2007，34（10）：1482－1484.

［6］孙德光，毕旭东，赵晶，等.中药安胎养血合剂对大鼠肾移植急性排斥反应影响的初步研究［J］.时珍国医国药，2007，18（3）：517－519.