血清MMP-13及TGF-β1检测在慢性肝病中的临床价值

范永熙， 万芙荣

(1.高密市人民医院检验科，山东 高密261500;2.山东省千佛山医院检验科，山东济南250001)

慢性肝病的重要病理特征之一是肝纤维化，也是进一步向肝硬化发展的主要中间环节。研究表明，基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达增强，可能是由于慢性炎症肝组织中活化的肝星状细胞过度分泌，而在肝癌组织中则主要由肿瘤细胞、间质成纤维细胞等过度分泌而致。MMP-13以酶原形式分泌，被激活后形成Ⅳ型胶原酶，降解、破坏肝癌周围细胞外基质中的Ⅳ、Ⅴ型胶原及明胶，使肝癌细胞沿缺失基膜向外浸润，导致侵袭与转移发生［1］。转化生长因子-β1(TGF-β1)则是细胞生长和分泌的多功能调节因子，参与促进细胞增殖中信号的传递，在肝癌组织中能诱导肝细胞发生凋亡，引起癌细胞恶性增殖，促使肝癌发展、播散。我们分析了慢性肝病(慢性肝炎、肝硬化、肝癌)患者血清MMP-13及TGF-β1水平，探讨其在肝癌发生、发展中的临床应用价值。

材料和方法

一、对象

选取高密市人民医院2009年1月至2012年12月门诊及住院的慢性肝炎患者50例、肝硬化患者50例、肝癌患者60例。另选择健康体检者50名作为正常对照组，年龄35～65岁。慢性肝炎、肝硬化、肝癌患者分别按照全国肝炎和肝癌防治协作组制定的标准诊断。

二、方法

1.MMP-13测定 采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)，试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供。按试剂盒说明书操作。

2.TGF-β1测定 采用双抗体夹心 ELISA法，试剂盒由深圳晶美生物科技公司提供。按试剂盒说明书操作。

三、统计学方法

结 果

肝癌组与肝硬化组之间MMP-13水平差异无统计学意义(P＞0.05)，但明显高于慢性肝炎组和正常对照组(P＜0.01)。肝癌组TGF-β1水平明显高于肝硬化组、慢性肝炎组及正常对照组(P＜0.01)，而慢性肝炎组、肝硬化组和正常对照组之间差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

表1 慢性肝病各组及正常对照组血清MMP-13、TGF-β1水平比较(±s)

表1 慢性肝病各组及正常对照组血清MMP-13、TGF-β1水平比较(±s)

注:与正常对照组比较，*P＜0.01;与慢性肝炎组比较，#P＜0.01;与肝硬化组比较，ΔP＜0.01

肝癌组 60 329.02±70.04*# 0.96±0.12正常对照组 50 279.03±32.80 2.22±1.08*Δ

讨 论

在肝纤维化形成、原发性肝癌侵袭与转移过程中，MMP-13起着重要的作用。血清MMP-13水平与慢性肝炎、肝硬化分级呈正相关，与肝癌组织分化程度、分期密切相关［2］。慢性肝损伤时，以胶原为主的细胞外基质(ECM)合成增多，降解相对减少，沉积在肝内引起肝纤维化，导致肝小叶改建、假小叶和结节形成，产生肝硬化。绝大多数肝癌的发生均伴有肝硬化的病理基础，其中ECM过度沉积和异常分布，与其合成代谢及降解代谢失衡有关。MMP-13基因的表达与合成受诸多因素调控。MMP-13在肝纤维化及肝硬化的作用是特异性分解肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原，对肝癌的生长、浸润、转移起到作用。任雪霞等［3］应用免疫组化和原位杂交方法研究了MMP-13蛋白及MMP-13 mRNA在人肝细胞肝癌及癌旁组织中的表达，结果显示MMP-13蛋白及MMP-13 mRNA水平在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织，提示 MMP-13在肿瘤的和生长过程中发挥一定作用，可能与肝癌的侵袭和转移有关。

TGF-β1主要参与正常细胞及转化细胞的生长与分化，调控细胞增殖。TGF-β1在肝脏中产生，在肝癌组织中处于过度表达状态，使正常肝细胞发生凋亡，引起肝癌细胞恶性增殖，同时还引起机体免疫功能下降，促进肝癌的发展与播散。血清TGF-β1水平增高的机制是肝癌发生发展过程中肝癌细胞过度表达 TGF-β1 m RNA。Li等［4］研究表明肿瘤组织的微环境是通过TGF-β/Smad通路影响肝细胞癌的进展和侵袭。本研究结果也表明，肝癌组MMP-13水平明显高于慢性肝炎组及正常对照组，但与肝硬化组无明显差异，提示MMP-13与肝癌细胞的生长、浸润和转移有关。肝癌患者通常伴有肝硬化，因此肝癌患者MMP-13水平的变化能反映肝纤维化逐渐发展为肝癌的过程。本研究结果显示肝癌患者TGF-β1水平明显高于肝硬化及慢性肝炎患者，提示TGF-β1升高与肝癌有一定关系。因此，动态及联合检测慢性肝病患者血清中MMP-13及TGF-β1水平，有一定的临床应用价值，可能有助于肝癌的诊断及病情监测。

［1］邱历伟，姚登福，黄 峰，等.慢性肝病患者转化生长因子-β1、肿瘤坏死因子-α和基质金属蛋白酶-13表达与临床价值［J］.南通大学学报(医学版)，2005，25(4):244-246.

［2］朱建云，张建忠，黄书明，等.MMP-13和TIMP-1在良恶性肝病患者血清、肝组织中的表达及临床意义［J］.临床检验杂志，2012，30(6):433-435.

［3］任雪霞，徐正府，黄介飞，等.MMP-13及 MMP-13 mRNA在人肝细胞肝癌及癌旁组织中的表达［J］.江苏医药，2009，35(1):44-46.

［4］Li G，Qin L，Ye Q，etal.Organ microenvironment affects growth and metastasis of hepatocellular carcinoma via the TGF-β /Smad pathway in mice［J］.Exp Ther Med，2013，5(1):133-137.