PS-1基因多态位点rs2256408多态性与晚发性阿尔茨海默病的相关性

刘 赞 卢桂兰 黄亚莲 吴祖荣 (海南省农垦总医院护理部，海南 海口 570311)

阿尔茨海默病(AD)是表现为年龄依赖的整体认知能力的下降以及渐进性神经功能退化的一类老年性疾病〔1〕。根据年龄可将AD分为两类，＞65岁为早发性AD(EOAD)，＜65岁为晚发性AD(LOAD)，其中LOAD所占比例较大。早老素(PS)-1基因是定位于14号染色体上在进化上高度保守的基因，其编码产物PS-1蛋白是定位于细胞膜上的跨膜蛋白，可能与APP的分解和脑组织β淀粉样蛋白(Aβ)的生成有关〔2〕。在对EOAD的研究中发现PS-1的多态性往往与AD的发生密切相关，但对于该基因与LOAD的关联性研究较少。Rs2256408是PS-1的一个单核苷酸多态位点(SNP)，该位点的A可能突变为G。本文旨在研究该位点与LOAD的相关性。

1 材料与方法

1.1 对象 严格根据发病时间确诊LOAD患者89例，其中男∶女为56∶33，年龄66～78岁，平均70.9岁。为了保证健康对照组的可靠性，选择80～93岁精神状况良好的老年对照165例，男∶女为110∶55，平均年龄85.6岁。

1.2 血样的采集及基因组DNA的提取 所有对象采集早晨空腹血液2 ml，EDTA抗凝，提取基因组DNA备用。

1.3 rs2256408多态性的检测 根据rs2256408的序列特点在其上下游序列范围内设计引物，上游引物为P1(ACCATGGCTAGTGGCAGCTGTC)，下游引物为 P(ATAGGAGGAGGACAAATTTGC)，扩增片段长度为223 bp。反应体系为:15 μl反应体系中含有 1 μl基因组 DNA，1.5 μl 10 倍缓冲液，0.3 μl dNTP，0.15 μl引物混合物。反应条件:95℃ 预热3 min;94℃15 s，60℃ 15 s，72℃ 30 s循环 11 次;94℃ 15 s，54℃ 15 s，72℃30 s，循环24次;72℃ 3 min。将PCR产物送上海捷瑞生物工程有限公司进行基因分型。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0软件进行χ2分析。

2 结果

2.1 SNP多态性分型结果的判断 可检测出三种基因型:AA、AG、GG，其snopshot判断标准见图1。

图1 SNP分型结果

2.2 SNP的分型结果 实验组患者中AA、AG、GG的检出例 (率)分别为61例(68.4%)、19例(21.3%)、9例(10.1%)，对照组中的检出例(率)分别为97例(58.8%)、33例(20.0%)、35例(21.2%)。统计学分析结果显示两组患者的基因型分布存在显著差异(P＜0.05)。

2.3 等位基因分布频率的分析 等位基因A和G在实验组中的分布频率为79.2%(141例)和20.8%(37例)，而在对照组中的分布频率为68.8%(227例)和31.2%(103例)。两组患者等位基因分布频率亦存在统计学差异(P＜0.05)。

3 讨论

＞80岁的老年人中LOAD发病率达到30%以上，是影响老年人生活质量重要的因素之一。AD患者脑组织重要的特征是形成大量的老年斑并且发生神经元纤维的缠结。老年斑的形成主要是由Aβ代谢异常引起的，在正常生理条件下该蛋白的产生、降解和清除都维持应有的平衡。当这种平衡被打破，该蛋白通过自身聚集而产生可溶性极弱的沉淀，从而形成老年斑〔3〕。大量的研究证明，AD与某些基因的危险等位基因密切相关，并且受到环境的共同作用〔4〕。目前比较确定的LOAD危险因子主要是载脂蛋白E(aPOE-4)等位基因，但该基因不是所有 AD 发生的必要条件〔5，6〕。

PS基因的突变在早发性AD中被广泛发现，已经有超过60种突变被认为与EOAD有关。但是对于该基因与LOAD的相关性，目前报道较少。Rs2256408是PS-1的一个SNP位点，本研究结果说明PS-1基因SNP位点rs2256408多态性与LOAD具有密切的关联，基因型AA可能对其发生具有促进作用，而等位基因T则可能是LOAD发生的抑制因素。

PS-1基因表达产物PS-1主要参与Aβ的前体蛋白App的代谢，其突变可能影响App的加工、转运及其与细胞骨架蛋白之间的相互作用，增加了较长的Aβ分泌，从而引起其聚合及沉淀，导致老年斑的形成，引发了AD〔6〕。所有的突变都具有两面性，本研究中rs2256408多态位点的AA纯合子的存在更容易导致LOAD的发生，而突变型纯合子GG则可能不利于LOAD的发生。当然，鉴于样本的局限性，本实验的结论尚有待于在更大量样本的基础上进行更深入的验证。

1 Tanzi RE.A genetic dichotomy model for the inheritance of Alzheimer's disease and common age-related disorders〔J〕.J Clin Invest，1999;104:1175-9.

2 Rosenberg RN.The molecular and genetic basis of AD:the end of the beginning〔J〕.Neurology，2000;54:2045-54.

3 Nunan J，Small D.Regulation of APP cleavage by a-，β-，and γ-secretases〔J〕.FEBS Lett，2000;483:6-10.

4 Pedersen NL.Reaching the limits of genome-wide significance in Alzheimer disease〔J〕.JAMA，2010;303(18):1864-5.

5 Rogaeva E，Tandon A，George H.Genetic markers in the diagnosis of Alzheimer's disease〔J〕.J Alzheimer's Dis，2001;3:293-304.

6 方 谨，张连峰，秦 川.早老素与阿尔茨海默症的研究进展〔J〕.中国比较医学杂志，2008;18(4):70-2.