超声检测老年乳腺浸润性癌患者阻力指数与术后组织中碳酸酐酶-Ⅸ、血管内皮生长因子表达的关系

吴梓芳 许军丽 (武汉大学校医院超声科，湖北 武汉 430079)

研究显示乳腺浸润性癌发生中血管生成相对于正常组织来说明显增多〔1〕，因此应用相关辅助检查检测术前血流相关指标，可能对诊断有一定意义。临床上观察血流最简便而无创的是彩色多普勒超声检测阻力指数(RI)值〔2〕。乳腺浸润性癌进展过程中也是一种在分子水平上具有高度异质性的肿瘤，在进展中出现多种基因和蛋白的变化。碳酸酐酶(CA)-IX是含锌酶，能可逆性地催化二氧化碳和水生成碳酸，其在消化道、胆囊等组织中可表达，但是在正常乳腺导管和小叶上皮细胞中不表达。多种肿瘤组织中CA-Ⅸ高表达，可能与缺氧性反应有关，CA-Ⅸ高表达时可以降低细胞周围的pH值，促进细胞外基质的降解，在肿瘤细胞增生、血管生成、肿瘤性转化和适应低氧环境中发挥作用〔3，4〕。本文关注超声检测的RI值与术后组织中CA-Ⅸ和血管内皮生长因子(VEGF)的关联性。

1 材料与方法

1.1 一般资料 2010～2012年我院确诊为乳腺浸润性癌的老年患者99例作为观察组，均为女性，年龄60～85(平均67.7)岁。收集患者术前的超声RI值。均行乳腺癌根治术，并依术后病理学进行分类，标准严格符合WHO的诊断标准。

1.2 超声检测方法 使用飞利浦彩色多普勒超声诊断仪，探头频率7.5～10 MHz，患者取仰卧位，在乳腺各象限作纵横切扫查，观察有无异常回声区，对肿瘤区在常规观察基础上重点观察血流情况，计算RI。

1.3 蛋白的检测及判断方法 CA-Ⅸ、VEGF、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、Ki67蛋白均为浓缩型兔抗人多克隆抗体，通过福州迈新生物技术开发有限公司代购。应用免疫组化Max Vision法检测蛋白的表达，应用DAB显色。操作均由主管技师完成，严格质量控制。CA-Ⅸ以明确的细胞膜着色为阳性，VEGF以明确的细胞质着色为阳性，ER、PR、Ki67以明确的细胞核着色为阳性。CA-Ⅸ和VEGF均计数5个肿瘤细胞密集区的细胞，取阳性细胞百分率的平均值，以阳性细胞＞25%为阳性，以阳性细胞≤25%为阴性。

1.4 统计学方法 采用SAS6.12软件进行t检验、方差分析和相关性分析。

2 结果

2.1 观察组RI值与CA-Ⅸ和VEGF表达阳性率的关系 观察组不同RI值与CA-Ⅸ和VEGF表达的阳性率差异显著(P＜0.01)。见表1。

2.2 RI值、CA-Ⅸ和VEGF表达阳性率在观察组不同临床特征中的差别 观察组RI值、CA-Ⅸ和VEGF的表达均与淋巴结转移、肿瘤最大直径、脉管浸润、ER、PR和Ki67的表达密切相关(P＜0.05)。见表2。

2.3 观察组中RI值与CA-Ⅸ和VEGF表达的关联性分析 RI值与CA-Ⅸ表达(r=0.47，P=0.024 1)、RI值与 VEGF 表达(r=0.48，P=0.020 9)、CA-Ⅸ与 VEGF 表达(r=0.51，P=0.014 7)均具有正相关性。

表1 观察组RI值与CA-Ⅸ和VEGF阳性表达的关系(s，%)

表1 观察组RI值与CA-Ⅸ和VEGF阳性表达的关系(s，%)

RI值 n CA-ⅨVEGF

表2 RI值、CA-Ⅸ和VEGF表达阳性率在观察组不同临床特征中的差别(s)

表2 RI值、CA-Ⅸ和VEGF表达阳性率在观察组不同临床特征中的差别(s)

临床病理特征 n RI值 t值 P值 CA-Ⅸ(%)t值 P值 VEGF(%)t值 P值肿瘤最大直径 ≤2 cm 52 7.08±2.54 8.74 0.026 5 60.47±10.97 7.960.029 3 57.77±11.65 6.77 0.032 0＞2 cm 47 9.98±4.76 79.56±13.89 69.59±9.60淋巴结转移 无 65 7.36±2.34 8.39 0.028 5 61.24±17.97 7.58 0.030 2 54.15±13.59 8.74 0.014 6有 34 9.78±2.31 80.76±17.53 71.47±15.47脉管浸润 无 69 7.39±2.32 9.86 0.012 4 61.58±11.25 8.75 0.018 3 54.13±11.53 8.35 0.018 4有 30 10.23±3.87 87.79±13.42 72.45±13.44 ER ＞25% 59 7.53±2.31 7.68 0.030 2 61.25±10.86 7.30 0.032 9 63.14±10.57 7.30 0.024 1≤25% 40 9.64±2.69 78.61±11.41 70.46±13.45 PR ＞25% 54 7.92±2.32 7.43 0.032 4 64.36±12.36 7.86 0.028 5 56.16±8.91 7.10 0.021 0≤25% 45 9.76±2.34 78.78±11.75 69.45±8.60 Ki67 ≤25% 50 6.96±2.61 10.24 0.009 5 62.65±13.71 7.20 0.022 0 58.98±9.07 6.96 0.029 3＞25% 49 10.65±2.56 76.76±11.68 68.50±11.65

3 讨论

应用超声在手术前对老年人乳腺浸润性癌进行判断有重要意义，不仅可以评估肿瘤的生物学行为，还可以依据不同老年患者的身体情况进行恰当的治疗。超声对肿瘤的血流能较好地反映出来。在肿瘤发生时，尤其是肿瘤血管生成前期，肿瘤常较小，血管生成少，各种检测血管的指标表达均不理想。而随着肿瘤的进展迅速增大，血管生成加速，进入到明显的肿瘤血管化期，此时影像学检测血流的指标较容易，对肿瘤的判断价值更理想〔5，6〕。从肿瘤生长及生物学行为角度分析，肿瘤恶性程度越高，增殖指数越高，生长就越快，增大的速度也越快。当肿瘤增长的速度超过其脉管系统的蔓延能力时，由缺氧诱导因子调控的CA-Ⅸ表达增强活力〔7〕，使适应缺氧环境的肿瘤细胞表型更容易存活并为了存活而更易于获得侵袭转移的潜能，这同时解释了CA-Ⅸ的表达与肿瘤体积及肿瘤血管生成的相关性〔8，9〕。本实验提示CA-Ⅸ和VEGF的表达与超声检测的RI值具有很高的一致性。由于VEGF是直接反映肿瘤血管生成的指标〔10〕，而CA-Ⅸ与VEGF有协同作用，因此RI值可以无创性地反映肿瘤血管生成情况，对判断肿瘤内部的血管情况提供重要依据。本实验也显示RI值、CA-Ⅸ和VEGF的表达均与患者的淋巴结转移、肿瘤最大直径、脉管浸润、ER、PR和Ki67的表达密切相关。由于以上因素均直接反映了肿瘤的生物学行为，因此，RI值可以部分地反映肿瘤的进展，即RI值越高，肿瘤侵袭性越强，肿瘤的血管生成越丰富，肿瘤的预后越差〔11〕。应用超声检测RI值是无创性评价肿瘤指标的客观标志，也为制订治疗方案提供了重要价值，尤其是体质条件差的不能进行手术的老年患者。总之，术前对乳腺浸润性癌患者积极应用超声学检测RI值与术后组织中CA-Ⅸ和VEGF的表达具有相关性，RI值可以部分地反映出CA-Ⅸ和VEGF的表达特点，术前RI值检测可能在一程度上预测患者预后，早期判断肿瘤性质。

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