热敏灸对失眠大鼠模型血清内分泌激素水平的影响*

2013-11-07肖爱娇王河宝刘海云

江西中医药大学学报 2013年4期

★ 肖爱娇王河宝刘海云

（江西中医学院南昌 330004）

失眠是睡眠障碍中最常见的一种类型，通常指患者对睡眠时间和（或）质量不满足并影响白天社会功能的一种主观体验[1-2]。随着生活节奏的加快，竞争压力的增大，睡眠障碍已经成为一个影响现代人健康的重要问题，并越来越成为威胁世界各国公众的一个突出问题。据世界卫生组织对14个国家15个地区的25916名在基层医疗就诊的病人进行调查，发现有27%的人有睡眠问题；美国的失眠发生率高达32%-50%，英国10%-14%，日本20%，法国30%，中国也在30%以上。目前临床上治疗失眠的西药多是一些镇静、安眠的精神药物，虽短期症状缓解明显，但长期服用会导致药物依赖性、嗜睡、乏力、步态不稳等不良反应[3]，最终影响神经系统功能。而祖国医学的中医疗法治疗失眠具有较好的效果。

艾灸法—作为针灸疗法的重要组成部分，是借助艾草燃烧时发出的药力和红外线温热刺激，来熏灼特定的穴位，刺激组织以调和气血、疏通经络，从整体上调节脏腑功能，以达到治病防病、养生保健的目的。该疗法操作简便，疗效显著，无任何副作用，正日益受到患者的亲睐。临床研究观察到艾灸治疗失眠具有较好的效果[4-5]。而腧穴热敏化艾灸新疗法（即热敏灸疗法）的出现，则大幅度提高了艾灸临床疗效，改观了中国灸疗临床现状[6]。临床研究表明，热敏灸治疗多种疾病具有良好的疗效，其治疗失眠也取得了很好的疗效[7]。然而热敏灸如何治疗失眠的机理还不清楚。据报道，失眠病人存在内分泌激素水平的异常[2]。那么，热敏灸能否通过调节体内内分泌激素水平而达到改善睡眠？为此，本研究采用腹腔注射对氯苯丙氨酸（PCPA）制备失眠大鼠模型，采用行为观察法、放射免疫分析法等研究热敏灸对大鼠行为活动、内分泌激素水平等方面的影响，了解热敏灸治疗失眠的效果，阐明热敏灸治疗失眠的作用机理，为热敏灸治疗睡眠障碍提供理论依据和实验依据，促进热敏灸在睡眠障碍防治中的应用。

1 材料

1.1 动物与分组

SD大鼠32只，雄性，体质量200g左右，由南昌大学医学院动物科学部提供，适应性喂养1周后，采用随机数字表将大鼠分为正常对照组（A），模型组（B），艾灸组（C），热敏灸组（D），每组8只。正常对照组（A组）：腹腔注射对等的生理盐水，1次/d，共2d。模型组（B）：腹腔注射对氯苯丙氨酸（PCPA，300mg/kg）进行造模，1次/d，共2d。艾灸组（C）：同模型组，并艾灸“百会”穴，1次/d，15min/次，共5d。热敏灸组（D）：同模型组，并艾灸“百会”穴，1次/d，40min/次，共5d。

1.2 主要试剂

对氯苯丙氨酸（PCPA，美国sigma公司）；ACTH、GH、T4、CORT、MT放射免疫分析药盒（北京华英生物技术研究所）。

1.3 主要仪器

EthoVision XT动物行为跟踪系统（荷兰Noldus公司）；r-911全自动放免计数仪（中国科技大学实业总公司生产）；MP31001电子天平（上海舜宇恒平科技仪器有限公司生产）。

2 方法

2.1 失眠大鼠模型制备

采用腹腔注射PCPA制备失眠大鼠模型，根据文献[8-9]报道进行操作，即对B、C、D组大鼠，将PCPA用弱碱性（pH7～8）生理盐水配置成混悬液，按300mg/kg体质量进行腹腔注射，1次/d，连续注射2d。

2.2 艾灸取穴与方法

在大鼠失眠模型造成后次日，即腹腔注射PCPA后第3日，将C、D组大鼠头部的毛发剪去，露出“百会”[10]，作为艾灸穴位。

艾灸方法：用直径0.4cm，长10cm的艾条（江西中医药大学附属医院制），距穴位2cm左右温和灸大鼠，1次/d，C组15min/次，D组40min/次，共5d。

2.3 大鼠行为学观察

在第一次腹腔注射PCPA28～30h后，每日定时录制视频30min，共5d，观察各组大鼠活动情况。

2.4 大鼠体质量称量

每日8：30-10：30，用电子天平称重并作记录。

2.5 大鼠血清ACTH、GH、CORT、T4和MT水平的测定

治疗结束后次日，大鼠用3%戊巴比妥钠（40mg/kg）腹腔注射麻醉后，抽取腹主动脉血5ml置于离心管，然后以3000r/min离心15min，收集血清，用于检测促肾上腺皮质激素（ACTH）、皮质酮（CORT）、甲状腺素（T4）、生长激素（GH）和褪黑素（MT）的水平。以上激素均采用放射免疫法进行测定。

2.6 数据处理

3 结果

3.1 大鼠的一般活动

适应期间，所有的大鼠活动良好，警觉性很好，进食饮水正常，昼夜节律正常。在第一次腹腔注射PCPA 28-30h后，B、C、D组大鼠出现昼夜节律消失，白天活动不停，整体观察与A组有明显不同，表明模型成功。给予艾灸治疗后，热敏灸组大鼠昼夜节律有所好转，白天能较安静入睡，行为活动趋于正常；而模型组恢复得较慢。

3.2 热敏灸对失眠模型大鼠体质量的影响

在适应期间，各组体质量接近，且增长速度无明显差异。造模后，与正常组相比，B、C、D组大鼠体质量增长较缓。给予艾灸治疗后，艾灸组大鼠的体质量增长较慢，在治疗1d、3d时，体质量仍明显低于正常组；热敏灸组大鼠的体质量增长较快，在治疗5d时，热敏灸组体质量与正常组基本接近；而模型组大鼠仍处长较慢增长。结果见表1。

表1 热敏灸对失眠大鼠体质量的影响（g）

3.3 热敏灸对失眠模型大鼠血清ACTH、CORT、T4、GH和MT水的影响

从表中可以看出，与正常组相比，模型组大鼠血清CORT、T4、GH和MT水平较高，而ACTH水平低于正常组；其中，ACTH、T4、GH和MT水平与正常组相比有统计学意义（P＜0.05）。与模型组相比，艾灸组和热敏灸组大鼠血清CORT、T4、GH和MT水平较低，而ACTH水平高于模型组；其中热敏灸组GH和MT水平与模型组相比，有统计学意义（P＜0.05）。结果见表2。

表2 热敏灸对失眠模型大鼠血清ACTH、CORT、T4、GH和MT水平的影响

4 讨论

有关睡眠障碍的动物模型很多，有应激相关模型、药理学模型、疾病相关模型、遗传学模型等。其中，对氯苯丙氨酸（PCPA）致失眠模型较为常用，有证据证明5-HT是引发非快速动眼睡眠的重要神经递质，通过注射色氨酸羟化酶的抑制剂PCPA来达到造模目的。该法操作简便，安全性高，大鼠剥夺睡眠过程清晰，可重复性强，一般注射2次即起效，持续约一周，具有可逆性，且腹腔注射所致模型符合人类失眠的某些特点，已成为较常用的失眠动物模型[11]。因此，本研究采用腹腔注射PCPA制备失眠大鼠模型。实验结果观察到，在第一次腹腔注射PCPA28-30h后，模型组、艾灸组和热敏灸组大鼠，出现昼伏夜出节律消失，白天活动不停，总睡眠时间减少，整体观察与正常组明显不同，表明模型制备成功。

临床研究已证明，热敏灸治疗失眠已取得了较好的疗效[7]。所谓热敏灸，通俗地说就是在热敏化腧穴上进行艾灸。临床实践发现，人体腧穴存在敏化态与静息态两种功能态，当人体发生疾病时能使体表腧穴发生敏化，敏化的类型多种多样，而腧穴热敏化是经穴敏化的一种新类型，处在热敏态的腧穴对热刺激特别敏感，能耐受较长时间（多数30min以上）的热刺激并感到很舒适[12]。而传统悬灸的灸量每次每穴一般从10min到15min，或者以局部皮肤潮红为度，往往达不到治疗个体化的最佳灸量。灸量即艾灸的每次有效作用剂量。艾灸剂量由艾灸强度、艾灸面积、艾灸时间三个因素组成，在前两个因素基本不变的情况下，艾灸剂量主要由艾灸时间所决定。本研究同时观察了艾灸15min（传统悬灸）和艾灸40min（热敏灸）对失眠的治疗效果，结果显示：给予艾灸治疗后，与模型组相比，艾灸组和热敏灸组，尤以热敏灸组大鼠昼夜节律有所好转；体质量增长速度较快。提示热敏灸具有改善睡眠的效果。然而，热敏灸治疗失眠的作用机理还不十分清楚。

据报道，失眠病人存在体内内分泌激素水平异常[2]。那么，热敏灸能否通过调整体内内分泌激素水平而达到改善睡眠的效果？本实验观察到：与正常组相比，模型组大鼠血清CORT、T4、GH和MT水平较高，而ACTH水平低于正常组；与模型组相比，艾灸组和热敏灸组大鼠血清CORT、T4、GH和MT水平较低，而ACTH水平高于模型组；其中热敏灸组GH和MT水平与模型组相比，有统计学意义。表明热敏灸可能通过调节体内内分泌激素水平而达到改善睡眠的效果。

众所周知，褪黑素主要是由哺乳动物和人类的松果体产生的一种激素，具有镇静、催眠、镇痛、抗惊厥、抗抑郁等多种生物学作用。1993年6月4日，美国Walter Pierpaoli和William Regelson公布了潜心研究30多年的成果，认定松果体通过分泌褪黑素控制着机体的睡眠与觉醒周期。自此，褪黑素—一种与睡眠有关的内源性物质，已开始作为保健品或激素替代疗法用于治疗睡眠障碍。有研究报道失眠病人血清褪黑素水平较低[13]，经补充外源性褪黑素可起到改善睡眠的作用[14]。本研究观察到模型组大鼠血清MT水平高于正常组，推测可能是一种机体代偿反应的结果。至于模型组大鼠血清CORT、T4、GH水平高于正常组，认为可能是应激反应导致的。当机体受到应激刺激（如失眠、紧张等）时，血液中糖皮质激素、T4和GH等激素水平均可升高。这些升高的激素（如CORT、T4）可提高中枢神经系统的兴奋性，引起烦躁、易激动、失眠等症状，同时，这些激素也可加强机体的新陈代谢，促进脂肪、蛋白质等分解，导致体质量增长缓慢。另外，由于运动、应激、能量消耗增加时，均可引起GH分泌增加，因此认为，模型组GH水平增加也可能是机体减少能量消耗的一种保护机制，对促进生长发育作用不大。而ACTH水平降低则可能是血浆中升高的糖皮质激素水平通过负反馈调节下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）和腺垂体促肾上腺皮质激素（ACTH）的分泌实现的。总之，失眠模型大鼠存在体内内分泌激素水平的异常。而热敏灸由于具有双相调节的特点，可使升高的或降低的激素水平回到或接近正常的水平，继而发挥改善睡眠的效果。

综上所述，我们推测热敏灸可能通过艾灸穴位，调动了机体内源性的抗病机制，从而发挥调节血清ACTH、CORT、T4、GH和MT的水平、改善失眠症状的作用。这可能是热敏灸治疗失眠的作用机理之一。

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