HPLC-ELSD法测定鸦胆子油乳注射液中溶血磷脂酰胆碱

2013-11-01李秀贤王怡君沈书博

中成药 2013年10期

李秀贤，王怡君，沈书博，张迪

(1.辽宁中医药大学附属第二医院辽宁省中医药研究院，辽宁沈阳 110034;2.辽宁省食品药品检验所，辽宁沈阳 110023)

鸦胆子油乳注射液收载于卫生部部颁标准第十四册，处方组成为精制鸦胆子油、精制豆磷脂、甘油，主要用于治疗癌症［1-2］。其中精制豆磷脂在制剂中起乳化剂作用，除含有与人体有益的饱和脂肪酸及不饱和脂肪酸外，其磷脂代谢的产物—溶血磷脂酰胆碱，具有较强的表面活性［3］，虽然其含有量较低，但由于它是磷脂代谢的重要产物，具有多种生物学效应，如可诱导细胞性状的改变，促进细胞融合、引起溶血和改变细胞的渗透性等［4～7］，并与动脉粥状硬化及血栓形成关系密切［8～10］。因而制剂中也应严格控制溶血磷脂的量，以保证临床用药的安全性。

1 仪器与试药

Waters 2695型HPLC色谱仪;Waters 2420型蒸发光散射检测器。鸦胆子油乳注射液(沈阳药大药业有限公司，批号10122111，规格为每支10 mL);溶血磷脂酰胆碱对照品(由Sigma公司提供);正庚烷(色谱纯);异丙醇(色谱纯);水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件以二羟基丙基硅烷键合硅胶为填充剂;以正庚烷-异丙醇(43∶57)为流动相A，正庚烷-异丙醇-水(29.5∶59∶11.5)为流动相B，按表1的规定进行梯度洗脱;蒸发光散射检测器。进样量:10μL。理论板数以溶血磷脂酰胆碱计算应不低于5000。

表1 梯度洗脱顺序

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液精密称取溶血磷脂酰胆碱对照品适量，加正庚烷-异丙醇(1∶2)混合溶液溶解并稀释，制成每1 mL含溶血磷脂酰胆碱0.2226 mg的溶液。

2.2.2 供试品溶液精密量取本品1 mL，置10 mL量瓶中，加正庚烷－异丙醇(1∶2)混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 阴性对照溶液按工艺方法制备缺精制豆磷脂的阴性样品，并按2.2.2项方法，制成阴性对照溶液。

2.3 干扰试验精密吸取对照品溶液，供试品溶液及阴性对照溶液各10uL，在2.1项色谱条件下分别注入液相色谱仪，绘制色谱图，见图1。由图可见，在与对照品色谱峰相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，而阴性液在此峰处无干扰。

图1 供试品溶液(A)、对照品溶液(B)、阴性样品溶液(C)

2.4 线性关系考察分别精密量取对照品溶液2、4、6、8、10μL注入液相色谱仪，记录图谱。以对照品进样量的对数为横坐标，峰面积的对数为纵坐标，计算回归方程:y=1.0616x+9.6276，r=0.9994，表明溶血磷脂酰胆碱进样量在0.44～2.23μg范围内具有良好的线性关系。

2.5 精密度试验取供试品溶液，在2.1项色谱条件下重复进样6次，记录面积，RSD为0.88%。

2.6 稳定性试验取同一批样品按正文方法，分别于配制后0、2、4、8、16 h，依法测定，RSD为1.1%，结果表明，供试品溶液在16 h内稳定。

2.7 重复性试验精密量取本品1 mL，共取6份，按2.2.2项方法平行制备6份供试品溶液，在2.1项色谱条件下测定，计算，RSD为1.2%。表明重复性良好。

2.8 回收率试验采用加样回收法。精密量取已知准确含有量的同一批样品(沈阳药大药业有限公司，批号:10122111)5份各0.5 mL，分别精密加入溶血磷脂酰胆碱对照品溶液(0.4452 mg/mL)3 mL，按2.2.2项方法操作，进样量为5μL，测定加标样品中的溶血磷脂酰胆碱的量，计算平均回收率101.6%，RSD为1.3%，见表2。