砂烫法与烘烤法对马钱子中抗炎镇痛成分影响*

★ 龚飞鹏 于欢 朱龙涛 龚千锋

(1.江西省人民医院 南昌 330000；2.江西中医学院 南昌 330004；3.北京中医药大学 北京 100102)

砂烫法与烘烤法对马钱子中抗炎镇痛成分影响*

★ 龚飞鹏1,2于欢2,3朱龙涛2龚千锋2**

(1.江西省人民医院 南昌 330000；2.江西中医学院 南昌 330004；3.北京中医药大学 北京 100102)

目的：建立马钱子士的宁和马钱子碱的含量测定方法，评价砂烫法与烘烤法对二者含量的影响。方法：分别制备砂烫马钱子和烘烤马钱子，采用高效液相色谱法测定士的宁和马钱子碱含量，以C18柱为固定相，乙腈(A):水-乙酸-三乙胺(230∶2.4∶0.4)(B)=11∶89为流动相，检测波长为254nm。结果：以200℃烘烤马钱子30分钟，士的宁和马钱子含量水平与砂烫马钱子水平相当。结论：砂烫马钱子炮制过程温度、时间对生物碱含量影响较大，而烘烤马钱子工艺可控性更强，用来控制马钱子质量优势显著。

HPLC法；士的宁；马钱子碱；含量测定

马钱子,为马钱科植物马钱Strychnosnux-vomicaL.或云南马钱StrychnospierrianaAW. Hill的干燥成熟种子。始载于《本草纲目》，并为历版《中国药典》所收载。味苦、性寒、有大毒，归肝、脾经，具通络止痛、散结消肿之功效，临床上常用于风湿痹痛、跌打损伤、麻木瘫痪等疾病。马钱子中生物碱类成分为其有效成分，士的宁和马钱子碱是总生物碱的主要有效成分，同时也是马钱子的毒性成分，两者之和几乎占总生物碱的80-90%。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪(Dionex UltiMate3000)；PAD检测器；Chromeleon工作站；KQ3200超声波清洗器(杭州中拓仪器有限公司)；HH-2数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)；CFP-110X50型报喜龙电炒锅(报喜龙电器厂)；Mettler AE240天平(十万分之一)；FW100高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)；马弗炉；GZX-9146MBE型数显鼓风干燥箱(上海博讯实业有限公司)；自动双重蒸馏器(上海亚荣生化仪器有限公司)。

1.2 试药

士的宁(购于中国药品生物制品检定所，批号0705-200306)；马钱子碱(购于中国药品生物制品检定所，批号0704-200104，经纯化后，用归一法测定含量为98.5%)；甲醇(色谱纯)(德国Merck公司)；乙腈(色谱纯)(Merck公司)；哇哈哈纯净水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersil ODS2 5μm4.6mm×250mm；流动相：乙腈(A)：水-乙酸-三乙胺(230∶2.4∶0.4)(B)=11∶89；检测波长：254nm；理论板数按士的宁峰计算应不低于5 000。柱温：30℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。

2.2 马钱子炮制品与溶液制备

砂烫马钱子制备：取洁净粗河沙加入锅内加热，用温程300℃温度计距锅底3mm测温，待温度至230℃时投入洁净生马钱子，掩埋30s左右，然后不断翻动约3分钟，至鼓起爆裂并显棕褐色或深棕色时迅速出锅，晾凉。将制备好的样品用小型粉碎机粉碎，过三号筛备用。

烘烤马钱子制备：放入已经预热至200℃的鼓风烘箱中进行烘制，30min后取出，晾凉。将制备好的样品用小型粉碎机粉碎，过三号筛备用。

对照品溶液的制备：取士的宁6mg、马钱子碱对照品5mg，精密称定，分别置10mL容量瓶中，加甲醇适量使其溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取2mL，置同一10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1mL含士的宁0.12mg，马钱子碱0.1mg)。

供试品溶液的制备：分别取砂烫马钱子、烘烤马钱子粉1.0g，加入20.0mL(pH=1)的盐酸水。称重，超声提取20min，超声功率250w。称重，补足减失重量。过滤，弃去初滤液，取续滤液，取1mL置于10mL容量瓶中，用pH=1的酸水定容，摇匀，分别用作砂烫马钱子供试品溶液和烘烤马钱子供试品溶液。

2.3 线性关系考察

精密吸取混合对照品溶液3、5、8、12、15、20μL，连续进样3次。以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制工作曲线。士的宁的回归方程为：Y=4.4453X+0.3525，r=0.9998、马钱子碱的回归方程为Y=3.4255X-0.6671，r=0.9991，线性关系良好。

2.4 精密度试验

精密吸取对照品溶液重复进样6次，测定士的宁和马钱子碱峰面积。其RSD为0.46%。

2.5 稳定性试验

取供试品溶液，分别在0、1、2、4、8、12、24h进样，供试品溶液24h中峰面积无大变化，士的宁RSD为1.84%，马钱子碱RSD为1.99%。供试品溶液在24h内稳定。

2.6 重复性试验

取同一批生马钱子样品，平行制备5份，分别进样，测定峰面积值，士的宁RSD为1.5%，马钱子碱RSD为1.89%。表明该实验方法重现性好。

2.7 加样回收试验

采用加样回收法，取已知含量的生品6份各0.1g，精密称定，精密加人对照品适量，按供试品制备项下方法操作，测定样品含量，计算回收率，结果士的宁的平均回收率为101.79%，RSD=3.51%;马钱子碱的平均回收率为99.86%，RSD=3.86%。

2.8 样品测定

精密吸取砂烫马钱子供试品溶液、烘烤马钱子供试品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，测定士的宁、马钱子碱含量。结果见表1。

表1 士的宁、马钱子碱含量测定结果

3 小结与讨论

马钱子生物碱类抗炎镇痛效果显著。[1]魏世超等[2]研究发现马钱子总生物碱部分能明显地抑制大鼠足跖胀，并且还可明显抑制大鼠肉芽组织增生，抑制率达37.60%，而士的宁及非生物碱部分对上述炎症无明显影响。马钱子加热过程中，士的宁既可以氧化为士的宁的氮氧化合物，也可以开环转化为异士的宁，后两者也可以进一步氧化或开环转化为异士的宁的氮氧化合物，导致士的宁的含量降低，达到减低马钱子毒性的作用。

然而在砂烫过程中，温度高低、火力的大小及加热时间对士的宁含量影响很大。因此经验不足的实验者在操作时，如掌握不好温度和时间，会对炮制品的质量产生很大影响。与砂烫法相比，烘箱加热的优点是受热均匀，温度易控制，加热时间相对较长，士的宁含量变化缓慢，因此炮制品的质量容易控制。

[1]易炳学，周道根，龚千锋，等.马钱子醋制品对小鼠抗炎作用的实验研究[J].时珍国医国药,2009,20(12)：3 054-3 055.

[2]魏世超，徐丽君，张秀桥.马钱子总生物碱对大鼠佐剂性关节炎的作用[J].中国药理学通报，2001,17(4)：479-480.

DifferentInfluencebySandScaldingorElectricBakingtoAnti-inflammatoryandAnalgesicIngredientinNuxvomica*

GONGFei-peng1,2,YUHuan2,3,ZHULong-tao2,GONGQian-feng2**

1.JiangxiProvincialPeople'sHospital,Nanchang330000;2.Collegeofpharmacy&JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchang330004;3.CollegeofTraditionalChineseMedicine&BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102

Objective: A HPLC based method was established for strychnine and brucine of Nuxvomica, to find the difference between Nuxvomica of stir-frying with sand and baking Nuxvomica. Methods: Make two different kinds of Nuxvomica decoction pieces. The analysis was carried out on C18column by HPLC with acetonitrile(A):water-acetic acid-triethylamine(230:2.4:0.4)(B)=11:89 as mobile phase, the detection wavelength was 254 nm.Results: The result shows that the level of strychnine and brucine in sand scalding Nuxvomica, equal to baking ones.Conclusion: As temperature and time is difficult to control for sand scalding Nuxvomica, baking Nuxvomica can be easily controled during processing in actual production

High-performance Liquid Chromatography, Strychnine, Brucine, Content Determination

国家中医药行业专项“中药饮片调剂规范化研究”(项目编号：201007011)。

**通讯作者：龚千锋(1952-)，男，教授，博士研究生导师，主要从事中药炮制研究，E-mail:gongqf2002@163.com。

R283.1

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2013-10-10)