丙型肝炎病毒抗体检测的几种方法的临床应用

2013-10-31朱瑞敏孙来芬马冬玲

中国现代药物应用 2013年5期

朱瑞敏孙来芬马冬玲

HCV是一种有包膜的RNA病毒，其潜伏期约6～7周，50%～80%的患者可发展成慢性丙型肝炎，20%的慢性丙肝患者如发展为肝硬化，一旦到肝硬化阶段，每年约有1% ～7%可进展为原发性肝细胞癌［1］。我国约有10%肝癌患者血中存在抗-HCV。其严重危害着人们的身体健康，本文对几种检测丙肝技术的相关性的应用加以阐述。

1 具体方法

1.1 实验室有关丙型肝炎检测的流程:

1.1.1 样品-→初筛试验-→阴性-→报告抗-HCV阴性。

1.1.2 样品-→初筛试验-→阳性反应-→用原在试剂双孔或原有试剂加另一种不同原理(或厂家)试剂做复检试验-→均阳性反应或一阴一阳-→做补充试验

1.1.3 样品-→初筛试验-→阳性反应-→用原在试剂双孔或原有试剂加另一种不同原理(或厂家)试剂做复检试验-→均阴性反应-→报告抗-HCV阴性

1.1.4 补充试验:①ELISA法测定吸光度值〉5倍cutoff值时-→报告抗-HCV阳性;②免疫印迹试验阴性-→报告抗-HCV阴性;③免疫印迹试验阳性-→报告抗-HCV阳性;④免疫印迹试验不确定-→报告抗-HCV不确定，建议定期复查。

2 其具体操作原理及判断标准如下所述

2.1 酶联免疫吸附试验我实验室用的是上海科华试剂公司生产的试剂，其检测原理是:所用包被抗原为合成多肽原和基因工程抗原(包括HCV病毒结构区核心抗原和非结构区抗原)。待测样本加入已包被抗原的反应孔内孵育，若标本中含有抗-HCV抗体，则该抗体与微孔内抗原形成抗原抗体复合物，加入酶结合物，经孵育后，酶结合物连接至抗原抗体复合物上，在TMB底物参与反应的情况下，产生显色反应。其cottoff值=阴性对照平均值+阳性对照平均值*10%(若阴性对照平均值小于0按0计算，阳性对照平均值大于2.5按2.5计算)。当所检测样品吸光度值小于cottoff值时，我们判定为阴性。当所检测样品吸光度值大于cottoff值时，分三个区间判断a:吸光度值大于cottoff值5倍时判断为阳性。b:吸光度值介于cottoff值3.8～5倍之间时，做胶体金试验或化学发光试验如果阳性则判断为阳性，如果胶体金试验或化学发光试验为阴性则做确诊实验，结果判定以确诊实验为准。C:吸光度值介于cottoff值1～3.8倍之间时的结果判定以确诊实验为准。

2.2 化学发光试验我实验室用雅培公司生产的试剂，机器为IS2000R。其检验原理为:丙型肝炎病毒采用免疫检测，定性测定人血清和血浆中的HCV抗体，技术是化学发光微粒子免疫检测法与灵活的检测方案的结合。第一步，将样本HCV重组抗原包被的顺磁微粒子和项目稀释液混合。样本中的HCV抗体结合到HCV包被的微粒子上。冲洗后进入第二步，加入啶酯标记的抗-人的结合物。再次冲洗后，身反应混合物中加入预激发兴高采烈和激发液。通过相对发光单信对产生的化学发光反应进行测量。样本中的HCV抗体含量与ARCHITECT光学系统检测到时的RLU成正比。其参考范围为0-1。当结果小于1时判断为阴性。当结果介于等于1～5之间时，做确诊实验，结果判定以确诊实验为准。当结果大于等于5时，报告为阳性。

2.3 胶体金法快速试验:1)免疫渗滤试验:斑点免疫胶体金快速试验以硝酸纤维膜为载体，HCV抗原点状固定上膜上，加待检样品。阳性结果在膜上抗原部信显示出有色斑点。反应时间在10 min以内。有效试验的质控点必须显色。2)免疫层析试验:以硝酸纤维膜的载体，HCV抗原线状固定在膜上，待检样品沿着固相载体迁移，阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带。有效试验的质控线必须显色。我实验室用此法仅限于做胃肠镜或支气管镜检查的初筛试验，还用于如上所述酶联免疫吸附试验结果在3.8-5倍cottoff值之间的复查的附助检查。