耐药相关蛋白在乳腺癌组织病理中的表达

孙海涛 王伟 张艺

乳腺癌是女性中最常见的恶性肿瘤之一，在美国乳腺癌的发病率仅次于肺癌［1］。化疗是临床上综合性治疗乳腺癌的重要部分，肿瘤的耐药性成为影响肿瘤化疗效果不佳的重要原因，近年来，人们对乳腺癌耐药机制进行研究，发现与乳腺癌的发生、发展及侵袭、转移相关的耐药基因，如HER-2，MGMT，GST-π，P-gp，TopⅡ等及乳腺癌组织耐药性相关蛋白过表达，包括P-糖蛋白(P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、肺耐药蛋白(LRP)等。本研究探讨乳腺癌耐药相关蛋白P-gp、BCRP、LRP在乳腺癌组织中的表达、相关性及与临床病理的关系，为乳腺癌的治疗提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2009年2月～2011年2月来北京安贞医院病理科有完整病历资料及分期的乳腺癌标本35例，癌旁组织标本26例，并以远离肿块5～7 cm正常乳腺组织标本10例作对照，所有标本经病理确诊，年龄28～70岁，平均45.3岁。

1.2 方法 本研究所有组织标本均经10%中性福尔马林液固定，常规石蜡包埋、切片，采用福州迈新公司生产的S-P即用型试剂盒，按说明书进行操作。

1.3 判定标准［2］有经验的病理科专家采用双盲法进行评估。(1)阳性标准:BCRP阳性指细胞核中出现棕黄色颗粒;P-gp、LRP阳性:细胞膜/胞浆中出现棕黄色颗粒。(2)阳性细胞分布标准:随机检查10个高倍视野，阳性细胞所占百分比进行评估，＜10%为阴性(-)，＜25%为弱阳性(±)，25%～50%为阳性(+)，51% ～75%为强阳性(++)，＞75%为强阳性(+++)。

1.4 统计学方法 所有免疫组化结果采用SPSS 13.0软件进行统计分析，组间比较采用χ2检验，相关性采用Sperman等级相关分析。P＜0.05，有统计学意义，差异显著性;P＞0.05，无统计学意义，没有显著差异。

2 结果

2.1 耐药蛋白在乳腺癌及癌旁组织中的表达 耐药蛋白P-gp、BCRP和 LRP在乳腺癌阳性表达率分别为 48.6%、57.1%、60%，三种耐药蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达均高于癌旁组织中的表达，P＜0.05，有统计学意义，差异显著性。见表1。

表1 三种耐药蛋白在乳腺癌及癌旁组织中的阳性表达(例，%)

2.2 耐药蛋白在乳腺癌中表达的相关性35例乳腺癌组织中比较 P-gp、BCRP、LRP三种耐药蛋白表达的相关性，Spearman等级相关分析显示，乳腺癌组织中P-gp和BCRP表达具有正相关性(r=3.136，P＜0.05);P-gp与LRP表达低度相关性(r=1.013，P＞0.05);BCRP与LRP表达无相关性(r=0.230，P＞0.05)。详见表2。

表2 三种耐药蛋白乳腺癌中表达的相关性(例)

2.3 耐药蛋白在乳腺癌中的表达与临床病理之间的关系在35例乳腺癌组织中，P-gp、BCRP、LRP的表达与临床病理的关系比较发现P-gp的表达与肿瘤大小、淋巴结转移及肿瘤组织分级有关，P＜0.05，有显著差异，而与患者的年龄无关;LRP的表达与肿瘤大小、淋巴结转移、组织分级有关，P＜0.05，有显著差异，而与患者的年龄无关;BCRP的表达与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移及组织学分级均无显著关系。详见表3。

表3 三种耐药蛋白的表达与临床病理的关系(例)

3 讨论

3.1 P-gp在乳腺癌中的表达意义 P-糖蛋白(P-gp)是MDR1的基因产物，是一种能量依赖性跨膜糖蛋白，其生物活性具有膜的药泵作用，将肿瘤细胞内的化疗药物转运出细胞，肿瘤细胞内抗癌药物蓄积减少或完全消失而产生耐药［3］。本研究发现P-gp在乳腺癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织中的表达，为48.6%。正常乳腺组织中P-gp蛋白几乎不表达，P-gp弥漫分布于乳腺癌组织的细胞浆及细胞膜上。P-gp的表达与肿瘤大小、淋巴结转移及肿瘤组织分级有关，伴有淋巴结转移的病例中P-gp的表达高于无淋巴结转移病例，临床Ⅱ-Ⅲ期P-gp阳性表达显著高于临床Ⅰ期，这与王振国［4］、孙丽梅［5］等的研究一致。故认为 P-gp的过表达与肿瘤的大小、转移、分级有密切关系，推测其影响乳腺癌化疗敏感性、疗效及预后。

3.2 BCRP在乳腺癌中的表达意义 乳腺癌耐药蛋白(BCRP)是1998年Dolyle等［6］应用mRNA指纹技术分离出一种新的ABC转运蛋白，属于ATP依赖性膜转运蛋白。BCRP在人体正常和肿瘤组织中的功能仍不清楚，可能与这些器官的外排及分泌功能有关。本研究中在乳腺癌组织中的阳性表达均高于癌旁组织中的表达，为57.1%，而BCRP的表达与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移及组织学分级均无显著关系。杨成等［7］运用 RNA干扰技术抑制 MCF-7/ADR细胞中BCRP表达，提高MCF-7/ADR对阿霉素的敏感性。新生霉素能竞争性地抑制BCRP介导的拓扑替康的转运，适当浓度的新生霉素能够逆转BCRP介导的耐药［8］。

3.3 LRP在乳腺癌中的表达意义 肺耐药蛋白(LRP)是人类穹窿蛋白的主要内容物，其耐药机制是能将抗癌药转运入胞质囊泡中，通过胞吐作用排出细胞外，细胞内药物浓度降低，最终产生耐药［9］。本研究LRP在乳腺癌阳性表达率为60%，明显高于癌旁组织中的表达。LRP在乳腺组织中的表达与肿瘤大小、淋巴结转移、组织分级有关，而与患者的年龄无关。淋巴结转移的乳腺癌组织中LRP阳性率高，分期高的乳腺癌组织中LRP阳性表达率高，这与曲延刚等［10］采用免疫组化SABC法，对80例乳腺癌的耐药指标LRP等进行检测的结果一致。说明LRP与乳腺癌细胞的耐药、增殖、转移产生影响，可以预测肿瘤细胞的耐药程度，为临床上制定化疗方案提供依据。

［1］ NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology-v.2.2009.

［2］ 刘新兰，崔洁，陈萍.肿瘤耐药相关标志物在乳腺癌中的表达及与预后的关系.陕西医学杂志，2010，39(12):1592-1595.

［3］ 张孝堂，陈筠.P糖蛋白的介导的多药耐药及其逆转的研究进展.山西医药，2007，36(11):1005-1007.

［4］ 王振国，陈惠庆，张少云，等.乳腺组织中MDR21基因检测与临床分析.肿瘤研究与临床，1999，11(2):89-90.

［5］ 孙丽梅，王鲁建，宋敏，等.乳腺癌中耐药蛋白 P-gp、GST-π、Top-Ⅱ的表达.中国组织化学与细胞化学杂志，2006，15(2)，169.

［6］ Doyle LA，Yang W，Abruzzo LV，et al.Amultidrug transporter from humanMCF-7 breast cancer cells.ProcNatlSciUSA，1998，95(26):15665-15670.

［7］ 杨成，印国兵，龚骊，等.RNAi抑制乳腺癌MCF-7/ADR细胞乳腺癌耐药蛋白基因研究.免疫学杂志，2008，24(3):304-307.

［8］ ShiozawaK，OkaM，SodaH，etal.Reversal ofbreast cancer resistance protein(BCRP/ABCG2)mediated drug resistance by novobiocin，a coumermycin antibiotic.Int J Cancer，2004，108(1):146-151.

［9］ 李醒.肺耐药蛋白与肺肿瘤多药耐药的研究进展.保健医学研究与实践，2008，5(1):74-76.

［10］ 曲延刚，唐爱萍，綦瑶.乳腺癌中LRP、GST-π、TOPOⅡ的表达及临床意义中国厂矿医学，2005，18(3):195-197.