八珍益母片中芍药苷的含量测定

2013-10-31全维明董礼

中国现代药物应用 2013年5期

全维明董礼

八珍益母片由益母草、党参、熟地黄、当归、白芍、茯苓、白术(麸炒)、川芎、甘草9味药材组成，有补虚益气，养血调经的功效，用于妇女气血两亏，体虚乏力，月经不调［1］。八珍益母片收载于卫生部药品标准中药成方制剂第六册，标准中未收载含量测定方法。《中国药典》2010年版一部收载了HPLC法测定八珍益母丸［2］和八珍益母胶囊［2］中芍药苷的含量。本文对主药白芍中芍药苷的含量测定方法进行研究，建立了HPLC法测定芍药苷含量的方法，本方法简便、准确，重复性好，适合八珍益母片中芍药苷的定量分析。

1 仪器和试药

Agilent 1100高效液相色谱仪，赛多利斯BD-125电子天平，色谱柱 Agilent 20RBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm，5μm)、Phenomenex 00G-4252-E0 C18(250 mm × 4.6 mm，5μm)、Waters Symmetry ShieldTM RP18(250 mm ×4.6 mm，5μm);芍药苷对照品购自中国药品生物制品检定所(批号:110736-200934);乙腈为色谱纯，乙醇、磷酸为分析纯;八珍益母片由雅安三九药业有限公司研制，批号:100401，100402，100403。

2 溶液的制备

2.1 对照品溶液称取芍药苷对照品13.05 mg，置于25 ml容量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，即得每1 ml含芍药苷0.522 mg的对照品溶液。

2.2 供试品溶液和阴性对照溶液取本品10片，精密称定，研细，精密称取1.0 g粉末置于25 ml容量瓶中，加稀乙醇适量，超声40 min溶解后，加稀乙醇至刻度，滤过，作为供试品溶液。另取缺白芍药材的阴性对照样品10片，同法制成阴性对照溶液。

3 色谱条件

色谱柱 Agilent 20RBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm，5μm)，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(17∶83)，检测波长:230nm，流速:1.0 ml/min，进样量:10 μl，柱温 35℃。取对照品溶液1 ml加稀乙醇至10 ml，在本文色谱条件下，理论塔板数大于8000，芍药苷对照品和供试品、阴性样品的色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

4 方法学考察

4.1 线性关系考察精密量取对照品溶液0.2，0.5，1，2，4 ml，用稀乙醇定溶到5 ml，按本文色谱条件各进样10μL，以峰面积值Y为纵坐标，进样量X为横坐标绘制标准曲线，得回归方程:Y=10.4X-115.8 r=0.9999

结果表明芍药苷进样量在0.2088～4.176μg范围内线性关系良好。

4.2 精密度试验取供试品溶液，在本文色谱条件下重复进样6次，记录峰面积，结果RSD为0.6%(n=6)。

4.3 稳定性考察取供试品溶液，在0，4，8，12，16，24 h进行测定，计算RSD为0.73%。表明供试品溶液在24 h内稳定。

4.4 重复性试验分别平行配制同一批样品(批号100401)的供试品溶液6份，在本文色谱条件下进样，测定，芍药苷含量平均值为0.535 mg/片，RSD为1.2%。结果重复性良好。

4.5 加样回收率试验精密称取已经测知含量的八珍益母片(芍药苷含量为0.535 mg/片)细粉0.5 g，加入芍药苷对照品，稀乙醇溶解，进样10 μl。结果加样回收率在97.7% ～99.7%之间，平均加样回收率为98.7%(n=6)。

4.6 样品测定取三批样品，按“2.2”项下方法制备供试品溶液和“3”项下色谱条件测定峰面积，按外标法计算芍药苷的含量，结果见表1。

表1 样品测定结果(n=4)

4.7 耐用性验证用phenomenex 00G-4252-E0 C18(250 mm×4.6 mm，5μm)、Agilent 20RBAX SB-C18(250 mm × 4.6 mm，5μm)、Waters Symmetry ShieldTM RP18(250 mm ×4.6 mm，5μm)3根不同厂家的色谱柱，分别按照上述色谱条件测定芍药苷的含量，RSD为0.9%。