99例新生儿ABO溶血病血清学实验结果分析

康 凯,卢兴兵,练正秋

(成都市第三人民医院输血科，四川 成都 610000)

·论 著·

99例新生儿ABO溶血病血清学实验结果分析

康 凯,卢兴兵,练正秋

(成都市第三人民医院输血科，四川 成都 610000)

目的通过分析新生儿ABO溶血病(ABO-HDN)的高胆红素血症及血清学检测结果，系统性回顾评价血清学检测诊断方法，探讨ABO-HDN的血清学检查结果与高胆红素血症的关系。方法对某院99例确诊为ABO-HDN进行相关血清学实验室检测及同时段的血清胆红素检测。结果99例ABO-HDN中热抗体放散实验阳性率达到97.98%，游离抗体实验阳性率为76.74%，直接抗人球蛋白实验阳性率为35.35%；出生后30 min内就检标本中高胆红素血症0例，发病率为0%，随着就检时间的延长，ABO-HDN发病率越高，高胆红素血症的阳性率也越大，并且A组的ABO-HDN阳性率(高胆红素血症阳性率)与B-I组有明显差异，具有统计学意义(P<0.05)。结论临床上应该在出现病理性黄疸之前进行新生儿溶血病3项血清学检查，热抗体释放试验是诊断新生儿溶血病最敏感的指标，并且在出生后30 min内进行血清学检查的临床意义最大。

新生儿溶血病；ABO血型不合；血清学诊断；胆红素血症

1 资料与方法

1.1检查对象

2011年11月18日至2012年11月18日某院产房或新生儿室因母婴ABO血型不合送检且“3项试验”至少1项为阳性的99例患儿，抽血送检时间为出生后0～168 h，主要临床表现为进行性黄疸、高胆红素血症。

1.2仪器与试剂

奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪、贝克曼库尔特实验系统总胆红素测定试剂盒，血型鉴定试剂盒、抗人球蛋白试剂、标准红细胞试剂(上海血液生物医药有限公司提供)，久保田KA2200离心机，上海跃进医疗器械厂HH.W21.600S恒温水浴箱。

1.3方 法

把确诊为新生儿溶血病的99例标本根据不同就检时间段分为A～I共9组，0～0.5 h为A组，0.5～1.0 h为B组，1.0～2.0 h为C组，2.0～12.0 h为D组，12.0～24.0 h为E组，24.0～48.0 h为F组，48.0～72.0 h为G组，72.0～96.0 h为H组，96.0～168.0 h为I组。各组再严格按照操作规程分别进行如下检测：

1.3.1胆红素测定

采用重氮盐法，按试剂盒操作说明书操作。

1.3.2母婴血型测定

以试管法进行产妇血型正反定型，新生儿正定型。

1.3.3直接抗人球蛋白试验

将患儿红细胞用生理盐水洗涤2次，配成2%红细胞生理盐水悬液，取小试管2只，分别加入2%红细胞悬液1滴，其中一管加入广谱抗人球蛋白试剂1滴，另一管加入盐水1滴。混匀后立即以3 000 r/min离心15秒观察结果。在显微镜下若有3个或4个以上红细胞的凝集均匀分布在游离的细胞中间，则为阳性，无凝集则为阴性。若盐水管出现凝集则说明患儿红细胞本身有自凝现象，试验结果无参考意义。

1.3.4红细胞抗体热放散试验

将患儿红细胞用生理盐水洗涤3到4次，取压积红细胞1 m，加等量生理盐水置56 ℃水浴中不断振摇7～8 min，取出后置于盛有56 ℃热水的离心管中，立即以2 000 r/min离心3 min，取上层释放液，分3管分别加入A、B、O型5%红细胞悬液1滴，置37 ℃致敏30 min，取出后生理盐水洗涤3次，加入广谱抗人球蛋白试剂1滴，以3 000 r/min离心15秒观察结果。

1.3.5游离抗体测定实验

取小试管3只，各加入患儿血清2滴，再分别加入5% A、B、O型红细胞盐水悬液1滴，混匀后37 ℃致敏30 min，取出后生理盐水洗涤3次，加入广谱抗人球蛋白试剂1滴，以3 000 r/min离心15秒观察结果。

1.4ABO血型HDN的判定

根据直接抗人球蛋白试验(改良法)、释放试验和游离抗体测定实验阳性[2]。

1.5高胆红素血症的标准

(1)24 h>103 μmol/L，(2)48 h>154 μmol/L，(3)3 d以上>220.6 μmol/L；以间接胆红素为主[3]。

1.6统计学分析

各组患儿高胆红素血症发生率的比较均选Pearson卡方检验，P<0.05时不同就检日期的高胆红素血症发生率差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1ABO-HDN 3项试验反应关系

统计数据显示：直抗阴性、游离和释放试验结果阳性的百分数为42.42%(42/99)；血清学三项指标均阳性约占32.32%(32/99)；只有释放试验为阳性占20.20%(20/99)；游离阴性、直抗和释放阳性约占3.03%(3/99)；只有游离试验为阳性约占2.02%(2/99)。通过上述数据发现新生儿溶血病的三项试验中，热抗体放散实验阳性率达到97.98%，游离抗体实验阳性率为76.74%，直接抗人球蛋白实验阳性占比只为35.35%，并且释放试验与游离、直抗试验阳性率比较均有显著的差别(P<0.05),具有统计学意义。

2.2送检标本各时间段与ABO-HDN阳性率的分析

通过对99例新生儿溶血病患儿标本不同送检时间的HDN阳性率进行卡方检验可知：A组的阳性标本数为0，阳性率0%，随着就检时间段增加，其HDN阳性率大致逐渐增高，I组的HDN阳性率最高为81.82%。A组的阳性率与B～I组各组的阳性率之间存在显著的差异(P<0.05),具有统计学意义，见表1。

表 1 送检标本各时间段例数及高胆红素血症阳性率

与B～I组比较，*P<0.05

3 讨 论

新生儿溶血病系因母婴血型不合而产生同族血型的免疫性溶血,在我国以ABO血型不合多见，是引起HDN的主要原因，也是发生高胆红素血症的常见原因，约占20%。主要发生在母亲为O型血、胎儿为A型或B型血，其次是Rh血型不合[4]。ABO-HDN往往只有出现黄疸、核黄疸、溶血性贫血等典型临床表现时才得到临床确诊，但此时的病情已经开始恶化，临床治疗十分棘手，严重影响治疗效果以及新生儿智力发育不全等后遗症，给我国新生儿健康造成巨大威胁。因此，在ABO-HDN患儿出现黄疸、溶血、核黄疸等严重表现之前，进行有效的ABO-HDN 3项血清学检测是十分必要的，更有助于减少临床误诊率及进行临床干预，以降低新生患儿病死率，对我国优生优育、提高人口素质是很有必要性的。

ABO-HDN常见于O型母亲所产的A或B型新生儿，并且50%发生在第一胎[5]，由于患儿可以出现不同程度的高胆红素血症，严重者可引起新生儿神经系统不可逆损伤等后遗症。目前临床上常对怀疑为ABO-HDN患儿进行血型血清学3项实验室检测，血清学3项试验包括：直接抗人球蛋白试验、血清游离抗体试验及抗体释放试验，主要是检测新生儿红细胞上的免疫抗体。通过上述数据发现，新生儿溶血病的3项试验中，热抗体放散实验阳性率达到97.98%，游离抗体实验阳性率为76.74%，直接抗人球蛋白实验阳性占比只为35.35%，并且释放试验与游离、直抗试验阳性率比较均有显著的差别，具有统计学意义。因此，临床上诊断ABO-HDN的3项血清学试验中，将直抗或释放试验阳性者，即可诊断为新生儿ABO溶血病，而只是游离试验阳性者只能作为参考，不能作为诊断指标[6]；热抗体释放试验是最敏感的指标，对早期确诊ABO-HDN疑似病具有重要临床意义。此外，在本次试验中有些就检标本的3项血清学检测中虽然只是释放(20.20%)或者游离抗体(2.02%)试验为阳性，不能直接确诊为新生儿溶血病，但也并不能说明新生患儿的红细胞表面没有结合类抗体，有可能是由于抗原发育不完全，反应强度不及成人，其表面抗原部位数目只占成人的25%～50%[7]，加之反应时间相对不足等原因，因此在反应灵敏性和强度(抗原抗体结合率)都与成人有显著差别。不过在临床实践中热抗体放散实验所用时间较长，可先进行相对需要时间较短的直接抗人球蛋白实验和游离抗体实验，若出现阳性就向临床初步报告危急值，之后再进行热抗体释放试验，可为临床尽早治疗争取时间，但直接抗人球蛋白实验和游离抗体实验为阴性就必须进行热抗体释放试验才能向临床报告。此外，有研究表明，孕妇怀孕期间抗体滴度的增加与新生儿高胆红素血症有非常显著的相关性[8]，孕妇在产前进行抗体滴度测定对预防新生儿溶血病也具有重要意义。因此，新生儿溶血3项试验应与抗体滴度有机结合，提高新生儿溶血病的诊断率。

由于母婴ABO血型不合引起新生儿红细胞表面免疫抗体包被，随之在网状内皮系统被巨噬细胞及自然杀伤细胞释放的溶酶体酶溶解而破坏，产生高胆红素血症而表现出黄疸、溶血性贫血病情的严重性不仅与血型(ABO)不合有关，也与新生儿溶血病发病时间有关。由表1可知：随着就检时间的增加，高胆红素血症阳性率也在增加(0%～81.82%)，与有关报道不一致[9]。并且A组与B～I各组的阳性率之间存在显著的差异(P<0.05)，具有统计学意义。虽然A组患儿没有出现高胆红素血症，达不到ABO-HDN典型临床表现的诊断标准，但血清学3项试验最终确诊A组均为ABO-HDN患儿，也与后期的临床诊断相符合。此外，从表1中发现D组阳性率(25%)和H组阳性率(75.0%)分别低于C组(33.3%)、G组(76.19%)，这可能是由于本次研究收集标本容量过少，或者是由于红细胞表面的溶血性抗体数量偏少所造成的。从表1中可发现ABO-HDN患儿血中的胆红素浓度高峰期是在出生后第1～3天，而后又随就检时间的增加呈下降趋势，本实验研究结果与相关文献相一致[10]，而临床实际送检时间段也主要集中在患儿出生后0～72 h内(68例、68.68%)与其相吻合。因此，临床上应该在出现病理性黄疸之前进行新生儿溶血病3项血清学检查，其中热抗体释放试验是诊断新生儿溶血病最敏感的指标，并且在出生后30 min内进行血清学检查的临床意义最大，这也与有文献研究结论“血清学检测的阳性率受就检时间的影响较大，就检时间越早检出率越高[2]”相吻合。但从本次报告的数据发现，HDN 3项试验阳性模式与送检时间相关性并不明显，可能与母亲溶血抗体在宫内就已经产生并与患儿红细胞结合，且发生时间个体差异较大。同时有文献也提到3项试验反应强度与溶血程度相关性也不大，这是因为HDN的严重程度还与其他多种因素有关[1]，故难以从反应模式上推断整个ABO-HDN病程所处阶段。从本组病倒后期临床治疗得知，76.77%的患儿血浆中尚有富余抗体可以继续致敏红细胞，因此加重高胆红素血症症状，有必要尽早治疗。

综上所述，对于ABO-HDN疑似患儿临床上应该在出现病理性黄疸、溶血性贫血等典型临床症状之前进行新生儿溶血病3项血清学检查，其中热抗体释放试验是诊断新生儿溶血病最敏感的指标，就检时间越早，越有利于ABO-HDN早期确诊，出生后半小时内进行血清学检查的临床意义最大，对减少误诊漏诊、提高早期确诊率、临床早期干预及治疗都具有重要意义。

[1] 桂 芹，王 昱，陈 晶，等.孕妇血型抗体与新生儿ABO溶血病的关系研究[J].第三军医大学学报，2007,29(7):632-634.

[2] 李 勇，马学严.实用血液免疫学血型理论和实验技术[M].北京：科学出版社，2006:420-421.

[3] 詹小静，杨娇英，李 洁，等.O型孕妇IgG抗体效价与新生儿溶血病性高胆红素血症相关性[J].中国热带医学，2009,9(5):861-862.

[4] 林甲进.O型血孕妇高IgG抗A(B)效价与新生儿溶血病病情程度的关系[J].现代中西医结合杂志，2005,14(8):1016.

[5] 曹文武，刘渝霞.153份母婴ABO血型不合新生儿溶血样本检测结果分析[J].中国输血杂志，2005,18(6):494-495.

[6] 谭淑云，刘凤华.血型血清学检验结果与ABO型新生儿溶血病发病率及高胆红素血症的关系[J].黑龙江医学，2010,34(2):117-118.

[7] 梁金凤.113例新生儿溶血病血清学检测结果分析[J].中国妇幼保健，2012,27(27):4233-4234.

[8] 雷红霞，牛 芳，屠晓华，等.孕妇血型IgG抗体与新生儿溶血病关系研究[J].中国输血杂志，2004,17(5):344-346.

[9] 刘 峰，李归宁，李敏芳，等.ABO新生儿溶血病早期诊断指标的回顾性分析[J].中国妇幼保健，2012,27(14):2170-2173.

[10] 顾秀兰.ABO血型系统新生儿溶血病早期诊断探讨[J].中小儿急救医学，2008,15(5):436-437.

Theanalysisof99casesofneonatalABOhemolyticdiseaseserologicaltest

KANG kai,LU Xing-bing,LIAN Zheng-qiu

(Department of Blood Transfusion,Chengdu third People’s Hospital,Chengdu,Sichuan,Province,610000,China)

ObjectiveTo investigate the relationship of ABO HDN serologic test results to high blood bilirubin,through the analysis of high blood bilirubin of ABO hemolytic disease of newborn (ABO HDN) and serological test results,as well as a systemic review evaluation serological detection diagnosis method.MethodsThe related serological tests and serum bilirubin from 99 cases diagnosed with ABO HDN were detected at the same time.ResultsResults showed that 99 cases of ABO hemolytic disease of newborn hot antibodies in children with radiation experiments positive rate reached up to 97.98%,free antibody test positive rate was 76.74%;by contrast the direct anti globulin test positive accounted for only 35.35%;Specimens of 30 minutes after birth to check high bilirubin levels,0 cases,the incidence was 0%.With the prolonging of the test time,the higher incidence of newborn children ABO hemolytic disease,the higher blood bilirubin positive rate.Moreover,the high bilirubin positive rate of ABO HDN group A compared with group B～I were significant differences statistically (P<0.05).ConclusionThree serologic test for neonatal hemolysis disease should be carried out before pathologic jaundice was observed in the clinical.Hot antibody release test was the most sensitive indicators for diagnosis of hemolytic disease of newborn,and serological examination within half an hour after birth is the most significantly in the clinical.

Newborns hemolytic disease;ABO blood type disagreement;Serological diagnosis; Bilirubin levels

1673-2995(2013)04-0244-04

R722.1

A

康 凯(1978-)，男(汉族)，主管技师，本科.

2013-03-15)

新生儿溶血病(hemolytic disease of newborn,HDN)是因母体内存在与其胎儿红细胞不合的IgG血型抗体引起的胎儿或新生儿同种免疫性溶血。在母婴血型不合引起的HDN中，以ABO血型系统最为常见，即ABO-HDN，占新生儿溶血的85.3%[1]，多发于O型孕妇所生的非O型婴儿，这与O型母亲体内含有不同滴度的抗-A(B)IgG抗体有关。由于母亲体内缺乏胎儿的红细胞血型抗原，当胎儿红细胞通过胎盘进入母体循环后，使母体产生相应的免疫抗体，此抗体又经胎盘进入胎儿血液循环，并与胎儿红细胞膜表面的相应抗原结合，这些被免疫抗体包被的红细胞随之在网状内皮系统被巨噬细胞及自然杀伤细胞释放的溶酶体酶溶解而破坏，产生高胆红素血症而表现出黄疸、溶血性贫血，严重的可导致流产、新生儿生理缺陷或死亡，少数病例新生儿出生后出现智力发育不全等后遗症。如何在新生儿溶血病患者出现高端红素血症之前确诊将具有重要的临床意义。本研究将2011年11月18日至2012年11月18日某院产房或新生儿室因母婴ABO血型不合送检且“3项试验”至少1项为阳性的99例确诊的ABO-HDN患儿血清学检测，结果分析如下。