富含抗菌肽乳酸菌发酵豆粕替代鱼粉对罗非鱼生产性能及免疫功能的影响

山东宝来利来生物工程股份有限公司 李晓颖 王 静 谷 巍

抗菌肽是生物体免疫系统产生的一类抵抗外界病原体感染的小分子肽类物质，具有非特异性的抗菌、抗病毒等作用，且不破坏正常细胞。本试验以高产抗菌肽的乳酸菌发酵脱皮豆粕添加到罗非鱼日粮中，部分替代鱼粉，研究富含抗菌肽乳酸菌发酵豆粕替代鱼粉对罗非鱼生长性能及免疫功能的影响，为植物发酵蛋白在水产饲料中的应用提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 抗菌肽发酵豆粕：为产抗菌肽乳酸菌发酵脱皮豆粕，由山东宝来利来生物工程股份有限公司提供。

1.2 试验设计 选取平均体重为（56.0±0.56）g的健康罗非鱼240条，随机分成4组，每组3个重复，每个重复20条，驯养10 d。对照组饲喂基础日粮，试验基础日料参照NRC鱼类营养需要，以全鱼粉作为蛋白源，配制罗非鱼配合日粮。试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别用20%、40%、60%富含抗菌肽乳酸菌发酵豆粕替代基础日粮中等量的鱼粉。

1.3 饲养管理 试验罗非鱼饲养在室内水族箱内，按体重的3%投喂饲料，每天2次，投饲时间为 09∶00和17∶00， 投饲后2 h捞取剩余饲料，烘干，称重。试验期为40 d。试验期间每天记录罗非鱼的摄食量和死亡鱼数量，试验结束后尾椎静脉采血，4000 r/min，离心15 min，分离血清。测定血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、溶菌酶（LZM）含量。

1.4 统计分析 试验数据采用SPSS13.0软件进行单因子方差分析，用LSD进行组间多重比较，试验结果均以“平均数±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 抗菌肽发酵豆粕对罗非鱼生产性能的影响由表1可知，在试验开始时，各试验组平均体重差异均不明显，10日龄时，与对照组相比，试验Ⅰ组的平均日采食量和平均日增重分别降低2.95%和3.73%，但差异均不显著（P＞0.05）；试验Ⅰ组饵料系数比对照组提高1.14%，但差异不显著（P＞0.05）；与试验Ⅰ组和对照组相比，试验Ⅱ组和Ⅲ组日增重、日采食量均显著降低，饵料系数显著升高（P＜0.05）；试验Ⅱ组日增重和日采食量均显著高于试验Ⅲ组（P＜0.05）。这说明在日粮中用抗菌肽发酵豆粕替代鱼粉是可行的，但是高剂量添加会影响罗非鱼的生长。

表1 抗菌肽发酵豆粕对罗非鱼生产性能的影响

20日龄时，各组的初始体重虽然差异不显著，但是对照组和试验Ⅰ组的体重均高于试验Ⅱ组、Ⅲ组，与试验Ⅰ组和对照组相比，试验Ⅱ组、Ⅲ组，平均日增重和平均日采食量显著降低，试验Ⅱ组和Ⅲ组的饵料系数均显著高于试验Ⅰ组和对照组（P＜0.05）。试验Ⅱ组平均日增重和平均日采食量与试验Ⅲ组相比差异显著（P＜0.05）。

30日龄时，对照组与试验Ⅰ组的初始体重差异不显著，但均显著高于试验Ⅱ组、Ⅲ组 （P＜0.05）；试验结束时，对照组和试验Ⅰ组的日增重和饵料系数差异均不显著（P>0.05），但均与试验Ⅱ组和Ⅲ组差异显著（P＜0.05）；试验Ⅱ组的平均日增重和平均日采食量与试验Ⅲ组相比差异显著（P＜0.05），分别较试验Ⅲ组提高18.25%和9.27%。通过比较不同添加水平抗菌肽发酵豆粕对罗非鱼不同生长阶段生长性能的影响可以看出，抗菌肽发酵豆粕在饲料中替代鱼粉是可行的，但高剂量的添加对罗非鱼生长发育具有明显的抑制作用。

2.2 抗菌肽发酵豆粕对罗非鱼血清生化指标的影响

2.2.1 抗菌肽发酵豆粕对罗非鱼血清TP、ALB含量的影响 由图1可知，试验Ⅰ组TP含量比对照组提高1.58%，但差异不显著（P＞0.05），而试验Ⅱ组、Ⅲ组的TP含量分别比对照组降低5.66%（P＞0.05）和10.46%（P＜0.05）。试验Ⅰ组ALB含量最高，比对照组高10.54%，差异显著（P＜0.05）；试验Ⅱ组、Ⅲ组的ALB含量与对照组相比差异均不显著（P＞0.05），但均显著低于试验Ⅰ组。

由图2可知，随着日龄的增加各试验组的TP、ALB含量均有所增加，但各组间TP、ALB含量差异均不明显，其中，试验Ⅰ组TP、ALB含量最高，分别比对照组提高1.2%和0.77%。

由图3可知，到试验结束时，各试验组间TP、ALB含量差异均不显著，试验Ⅰ组的TP、ALB的含量最高，分别比对照组提高0.29%和0.38%。

2.2.2 抗菌肽发酵豆粕对罗非鱼血清LZM含量的影响 由图4可知，对照组和试验Ⅰ组LZM含量呈现逐渐递增趋势，而试验Ⅱ组、Ⅲ组含量呈现递减趋势，在试验前期对照组LZM含量最低，各试验组LZM含量均高于对照组。其中，试验Ⅱ组LZM含量最高，较对照组提高20.81%，各组间差异均显著（P＜0.05）；随着日龄的增加对照组和试验Ⅰ组LZM含量逐渐增加，试验Ⅱ组、Ⅲ组逐渐降低，到试验结束时，试验Ⅰ组含量最高，比对照组提高4.59%，差异不显著（P>0.05），但显著高于试验Ⅱ组、Ⅲ组（P＜0.05）。

3 讨论

抗菌肽作为饲料添加剂，已在畜牧生产中广泛应用。宋理平等（2010）研究发现，在凡纳滨对虾的饲料中添加重组抗菌肽制剂，可使其摄食量增加，相对增重率显著提高。王阿荣等（2011）研究表明，抗菌肽能提高断奶仔猪的生长性能和免疫功能。黄永彤等（2004）研究报道，抗菌肽在代替抗生素防治肉鸡病害方面有明显效果，并对多种细菌有较明显的杀灭作用。

豆粕的蛋白质含量为42%～45%，且必需氨基酸含量、氨基酸构成比例以及消化率均优于其他植物性饼粕类原料，经过微生物发酵处理的豆粕，营养素水平有所提高，并可获得有益微生物，同时抗营养因子水平显著降低。尽管发酵豆粕有效能含量和氨基酸水平不及鱼粉，但大量饲养试验表明，发酵豆粕替代全部或部分鱼粉不会影响动物的生产性能和健康水平（刘勇，2009；Refstie 等，2005）。

本试验结果表明，在饲料中适量添加含有抗菌肽成分的发酵豆粕代替鱼粉，能促进罗非鱼的生长发育、提高采食量及降低饵料系数，但值得注意的是，添加中、高剂量抗菌肽发酵豆粕会严重影响罗非鱼的生长性能，原因可能是乳酸菌发酵脱皮豆粕替代鱼粉，影响了饲料适口性及氨基酸组成。高剂量抗菌肽发酵豆粕替代鱼粉时，影响作用更为明显。此外，陈晓生等（2006）研究表明，添加高剂量抗菌肽可能会抑制肠道有益菌的生长。

通过测定不同组别的血液指标，可以看出在整个试验过程中，低剂量替代组即试验Ⅰ组TP、ALB含量均最高，但与其他各组均无显著差异。一定浓度范围内的发酵豆粕对罗非鱼血清TP、ALB含量无显著影响，这表明，罗非鱼具有自身稳定调节系统，可以保持血清TP、ALB含量处在稳定状态。

LZM是机体非特异性免疫功能的重要体液因素，在试验前期试验Ⅱ组、Ⅲ组的含量高于对照组和试验Ⅰ组，说明高剂量替代能显著增加血清中LZM含量，但是随着日龄的增加，这两组LZM含量明显下降，原因可能是试验Ⅱ组、Ⅲ组罗非鱼在后期采食量下降影响了免疫功能。姜珊等（2011）研究报道，高剂量的抗菌肽对肝脏组织有一定的破坏性作用。LZM含量的下降，可能与该因素也有一定的关系，有待进一步验证。

刘勇（2009）研究表明，鲜杂鱼-豆粕替代奥尼罗非鱼幼鱼饲料中2／3鱼粉 （占饲料6%），不影响机体生长性能。在本试验中，抗菌肽发酵豆粕替代20%鱼粉（占饲料5.4%），对罗非鱼的生长性能影响不大，进一步说明抗菌肽发酵豆粕代替鱼粉的适宜比例与品种和生长阶段等有一定关系。本试验结果证实，富含抗菌肽乳酸菌发酵豆粕替代20%的鱼粉（占饲料5.4%），对罗非鱼生长性能及血清免疫指标具有促进和增强作用。

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