植物乳杆菌代谢产物对肉仔鸡肠道菌群和血清抗氧化指标的影响

2013-10-25山东宝来利来生物工程股份有限公司张志焱刘海涛李金敏李伟张菊谷巍

中国饲料 2013年3期

山东宝来利来生物工程股份有限公司张志焱刘海涛李金敏李伟张菊谷巍

乳酸菌是动物微生态制剂的主要菌种之一，其代谢产物中含有大量的乳酸、乙酸等有机酸以及抑菌素、维生素、消化酶、游离氨基酸等成分，对动物生长有促进作用，并且其中含有的乳酸菌素、过氧化氢和罗伊氏素等多种物质具有抑菌活性，对动物的肠道致病菌和腐败菌有较强的拮抗作用（邱宝生等，2004）。目前对乳酸菌活菌制剂类产品作为动物微生态产品添加剂使用的研究很多，但对其代谢产物的使用效果研究还鲜有报道，本研究就将植物乳杆菌的发酵离心上清液作为肉仔鸡的开口保健产品，探讨植物乳杆菌的代谢产物对肉仔鸡肠道菌群和血清抗氧化指标的影响，为乳酸菌代谢产物的应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 乳酸菌发酵代谢产物的制备

1.1.1 供试菌株植物乳杆菌LP99（Lactobacillus LP99），由山东宝来利来生物工程股份有限公司菌种保藏中心保存。

1.1.2 培养基 MRS培养基：葡萄糖20 g，柠檬酸铵2 g，乙酸钠5 g，磷酸氢二钾5 g，硫酸锰0.2 g，硫酸镁0.5 g，蛋白胨 10 g，牛肉膏 10 g，酵母膏5 g，土温－801 g，蒸馏水 1000 mL，pH 6.0。

1.1.3 发酵代谢产物的制备将植物乳杆菌LP 99菌种接种在MRS斜面培养基中，37℃培养复壮，24 h后传代，再接种到装有100 mL MRS液体培养基的100 mL盐水瓶中，37℃恒温培养箱培养24 h，接种到装有1 LMRS液体培养基的1 L三角瓶中，37℃恒温培养箱培养24 h，3500 g离心，取上清液即为植物乳杆菌LP 99的发酵代谢产物。

1.2 试验动物及饲养管理选用1日龄健康AA肉仔鸡300只，分为空白对照组、抗生素组和发酵上清液组。其中发酵上清液组分为1、2 mL/d·只和3 mL/d·只三个剂量组，均采用1∶1稀释方式饮水使用；抗生素选用氟苯尼考（山东农业大学提供），3 g兑20 kg水饮用。从2日龄开始饮用，每个组设3个重复，每个平行20只肉鸡。采用双层笼养，自由采食。试验周期为10 d。

1.3 日粮组成与营养水平采用玉米-豆粕型基础日粮，参照2004年我国肉仔鸡营养标准（NY/T33-2004）进行配制。日粮组成及营养水平见表1。

表1 日粮组成及营养水平（风干基础）

1.4 测定指标

1.4.1 肠道菌群试验期间每3 d每组分别随机抽取三只鸡屠宰，屠宰鸡均取直肠前端肠段放入液氮中，以备微生物测定。测定时在超净工作台中称取直肠前端肠段内容物1 g，加入到装有100 mL灭菌生理盐水和玻璃珠的250 mL三角瓶中，摇床振荡30 min，10倍递倍稀释混匀平板法计数，分别计数大肠杆菌，沙门氏菌、乳酸杆菌的活菌数。

大肠杆菌用伊红美蓝培养基，沙门氏菌用SS琼脂培养基，乳酸杆菌用LBS培养基，大肠杆菌和沙门氏菌在37℃培养箱中培养24 h后计数，乳酸杆菌在37℃培养箱中培养48 h后计数。活菌数以每克肠道内容物中细菌个数的对数lg CFU/g表示。

1.4.2 血清抗氧化指标的测定试验期间每5 d每组分别随机抽取三只鸡心脏采血，离心制备血清，-80℃冻存，用于抗氧化指标的测定。

GSH-Px活性的测定采用二硫代二硝基苯甲酸法，SOD活性的测定采用黄嘌呤氧化酶法，MDA含量的测定采用硫代巴比妥法。试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，操作过程按试剂盒说明书进行。

1.5 数据处理试验数据经Excel处理后，采用SPSS16.0进行方差分析，采用其中的Duncan’s法进行多重比较，P＜0.05为差异显著性标准。

2 结果

2.1 乳酸菌代谢产物对肉仔鸡肠道菌群的影响由表2可见，各乳酸菌代谢产物组和抗生素组的沙门氏菌和大肠杆菌的数量均显著低于对照组（P＜0.05），抗生素组的乳酸菌活菌数显著低于对照组和乳酸菌代谢产物组（P＜0.05），且乳酸菌代谢产物组的乳酸菌活菌数高于对照组，这说明抗生素在杀灭沙门氏菌和大肠杆菌的同时，也杀死了大量的有益菌——乳酸菌，而乳酸菌代谢产物在抑制沙门氏菌和大肠杆菌的同时，还有利于乳酸菌的生长繁殖。

表2 乳酸菌代谢产物对肉仔鸡肠道微生物的影响lg CFU/g

2.2 乳酸菌代谢产物对肉仔鸡血清抗氧化指标的影响由表3可见，饮用植物乳杆菌LP 99发酵代谢产物5 d和10 d后，各乳酸菌代谢产物组均能显著地提高血清中GSH-Px的活性（P＜0.05）。SOD活性各乳酸菌代谢产物组均高于对照组，但只有2 mL组与对照相比差异显著（P＜0.05），1 mL组和3 mL组与对照相比均差异不显著（P＞0.05）。抗生素组（氟苯尼考组）鸡只血清中的GSH-Px活性和SOD活性与对照组相比均无显著提高。

表3 GSH-Px和SOD活性测定结果

3 讨论

3.1 乳酸菌代谢产物对肉仔鸡肠道菌群的影响大量研究证明，在雏鸡日粮中添加乳酸菌制剂可显著增加肠道益生菌的数量，有利于动物肠道健康。李雪平等（2011）研究报道，日粮中添加乳酸菌制剂可显著提高回肠中乳酸菌的含量，显著降低回肠、盲肠中大肠杆菌的含量。王晶等（2009）研究发现，与抗生素组相比，添加同源乳酸菌能更好抑菌和低聚木糖可以使肉鸡空肠的乳酸菌数提高20.21%（P ＜ 0.05）。许提森（2008）报道，投喂乳酸菌活菌制剂后，鸡肠道中的鸡伤寒沙门氏菌的数量明显下降。但目前大量的研究均集中于乳酸菌活菌微生态制剂在肉鸡日粮中的应用效果研究，对其发酵代谢产物的应用效果研究还鲜见报道。本试验利用植物乳杆菌LP99的液体发酵代谢产物，采用饮用方式，饲喂肉仔鸡结果表明，2～10日龄的肉仔鸡饮用乳酸菌的代谢产物，在提高肠道乳酸菌数量的同时，可以显著降低鸡伤寒沙门氏菌和大肠杆菌的数量。说明乳酸菌的代谢产物可以很好地维持有益菌的优势作用，同时其中的有机酸、细菌素和过氧化氢等有效地抑制了沙门氏菌、大肠杆菌的繁殖，从而可以减少有毒代谢产物，减少肠道疾病的发生。试验同时证明，抗生素氟苯尼考在杀灭沙门氏菌和大肠杆菌的同时，也杀死了大量的有益菌——乳酸菌，从而破坏了健康鸡只的肠道菌群平衡。

3.2 乳酸菌代谢产物对肉仔鸡血清抗氧化指标的影响体内抗氧化酶主要包括GSH-Px、SOD等。GSH-Px是动物体内广泛存在的一种重要的催化过氧化物分解的酶类，它可将H2O2还原为H2O，作用是清除体内的自由基，保护细胞免受自由基的毒性损伤。本试验结果证实，饮用植物乳杆菌LP99发酵代谢产物能显著提高血清中的GSH-Px的活性（P＜0.05），从而明显地提高机体的抗氧化机能，增强肉鸡的免疫力。而抗生素氟苯尼考组的GSH-Px活性和SOD活性与对照组相比均无显著差异。