顶空气相色谱法测定水杨酸甲酯乳糖苷中残留溶剂研究

北京协和药厂（100050）何秀峰 刘冬 夏鹏飞 沈珑瑛 赵立敏

水杨酸甲酯苷类化合物具有解热、镇痛、消炎等与水杨酸相类似的作用，对水杨酸进行结构修饰，合成了新的水杨酸类衍生物—水杨酸甲酯乳糖苷（MSG）[1]，本品在二甲基亚砜中易溶，在甲醇中溶解，在水和乙醇中微溶，在乙腈、丙酮、乙酸乙酯和二氯甲烷中不溶。该产品按照其生产工艺要求，在合成反应中分别使用了甲醇、乙醇、二氯甲烷及乙酸乙酯共4种有机溶剂，其中甲醇为重结晶用溶剂。

参照国家食品药品监督管理局药品审评中心《化学药物残留溶剂研究的技术指导原则》要求及有关文献[2][3][4]，并经大量试验研究，建立了同时测定水杨酸甲酯乳糖苷中甲醇、二氯甲烷等上述4种残留有机溶剂含量的顶空气相色谱法。按照ICH及《中国药典》2010版关于残留溶剂的有关规定[2][4][5]，制定各溶剂的限度为：本品1g中含甲醇不得超过300µg，乙醇及乙酸乙酯不得超过500µg，二氯甲烷不得超过60µg。根据该原料的溶解特征，笔者根据其溶解特性以二甲基亚砜为溶媒，采用外标法进行试验，经方法学考察结果表明各组分的分离度、重现性良好，试验方法合理，简单易行，测定结果准确可靠，可作为水杨酸甲酯乳糖苷中甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯残留溶剂的有效测定方法。

1 仪器与试药

Agilent 7890A气相色谱仪、Agilent G1888顶空进样装置，配有Agilent MSD ChemStation 操作控制及积分软件；METTLER TOLEDO AL-204-IC电子分析天平。

甲醇（美国Dikma公司，批号：94951），乙醇（北京化工厂，批号：20090921），二氯甲烷（北京化工厂，批号：20091011），乙酸乙酯（北京化工厂，批号：20021025），二甲基亚砜（北京化工厂，批号：20091105）。

水杨酸甲酯乳糖苷（批号：100510、100517、100524），由宁波天衡制药有限公司提供。

1.1 对照品贮备液的制备 分别取无水乙醇、乙酸乙酯适量，精密称定，加入二甲基亚砜制成每1mL含乙醇、乙酸乙酯各10mg溶液，作为乙醇、乙酸乙酯对照品贮备液；取甲醇适量，精密称定，加二甲基亚砜制成每1mL含甲醇6mg溶液，作为甲醇对照品贮备液；取二氯甲烷适量，精密称定，加二甲基亚砜制成每1mL含二氯甲烷1.2mg溶液，作为二氯甲烷对照品贮备液。

1.2 混合对照品溶液的制备 精密量取上述对照品贮备溶液各1mL，置于50mL量瓶中，加入二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液；精密量取上述对照品贮备溶液各0.8mL、1.2mL，分别置于2个50mL量瓶中，加入二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为80%混合对照品溶液、120%混合对照品溶液用于回收率的测定。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 采用色谱柱为DB-624交联毛细管柱（30m×0.53 mm，i.d，3µm），以氦气为载气，氢火焰离子化检测器（FID），进样口温度为250℃，检测温度250℃。柱温采用程序升温：80℃保持，保持5min，后以10℃/min升至220℃，保持3min；流速为2.5mL/min，分流比为1∶30。顶空条件：顶空瓶预热温度90℃，加热时间30min；定量环温度120℃，平衡时间0.5min，填充时间0.5min，进样时间1.0min；传输线温度180℃。

2.2 分离度试验 精密量取混合对照品溶液5.0mL于20mL顶空瓶中，按上述方法进行测定，记录色谱图。甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯的分离度均＞1.5，取对照溶液连续进样6次，所得待测各溶剂峰面积的相对标准偏差均小于5.0%，符合《中国药典》2010年版二部的相关规定。

2.3 线性范围及标准曲线 精密称取甲醇75.0mg、乙醇、乙酸乙酯各125.0mg、二氯甲烷15.0mg，置于一个10mL量瓶中，以二甲基亚砜稀释至刻度摇匀，作为标准曲线储备溶液。精密量取该溶液2.0mL置于一个10mL量瓶中加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为标准曲线溶液。按比例精密稀释成不同浓度标准溶液6瓶，按上述方法进行测定，以浓度为横坐标，以各溶剂峰面积为纵坐标，进行线性回归，结果见附表1。

附表1 线性范围与回归方程

附表2 水杨酸甲酯乳糖苷的平均回收率

附表3 三批水杨酸甲酯乳糖苷的残留溶剂测定结果（%）

2.4 最小检测限 按照信噪比3∶1，本方法溶液中甲醇、乙醇、二氯甲烷及乙酸乙酯的最小检测限分别为0.35µg/mL、0.61µg/mL、0.52µg/mL、0.54µg/mL。

2.5 精密度试验 精密量取对照品混合溶液各5.0mL至6个顶空瓶中，照上述方法测定，根据甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯的峰面积计算RSD%分别为3.25%、2.28%、4.27%、2.33%，均小于5.0%。

2.6 回收率试验 分别精密称取水杨酸甲酯乳糖苷200mg置于18个20mL顶空瓶中，其中5份分别加入80%混合对照品溶液5mL、5份加入混合对照品储备液5mL、5份加入120%混合对照品储备液5mL、3份加入5mL二甲基亚砜，充分混匀，作为供试品溶液；取混合对照品溶液5mL，置于顶空瓶中，封盖、摇匀，作为对照品溶液。按照上述方法进行测定，通过积分确定其峰面积，按外标法计算试样中甲醇、乙醇、二氯甲烷及乙酸乙酯的平均回收率，结果见附表2。

2.7 样品测定 精密称取水杨酸甲酯乳糖苷3批供试品各200mg（每批两份平行），于6个顶空瓶中分别加入二甲基亚砜5.0mL，封盖，超声溶解，照上述方法进行测定，结果3批供试品中均未检出乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯的有机溶剂残留，甲醇残留量符合规定，结果见附表3。

3 讨论

3.1 预热温度及时间的选择 本试验根据样品的热稳定性以及溶解度分别选择于70、90及110℃条件下预热，经过比较在温度相对较低的条件下，样品的回收率较低，而过高的温度对于样品的稳定性以及低沸点的溶剂也会造成一定影响；笔者又对预热时间进行了考察，分别在预热20、30、40min后进行测定。最终笔者选择了90℃、预热30min作为预热条件。

3.2 预热条件下样品的稳定性 本品在90℃条件下进行了热破坏实验，分别于30、45、90min取样采用HPLC方法进行测定，未检测到水杨酸乳糖苷，说明甲酯键在该条件下比较稳定，不会在加热过程中发生断裂产生甲醇。

3.3 水杨酸甲酯乳糖苷残留溶剂的测定水杨酸甲酯乳糖苷为一个新的非甾体抗炎药，目前笔者正在进行其质量标准及制剂处方的研究。本文建立的水杨酸甲酯乳糖苷中残留溶剂的测定方法能够同时测定生产工艺中涉及的4种有机溶剂的残留，所建立的方法准确、可靠，可用于水杨酸甲酯乳糖苷中残留溶剂的测定，保障药品的安全、有效。