ILK与VEGF在肝细胞癌中的表达及相互关系

河北省沧州市中西医结合医院（000）李胜水 李双标 张凤梅

河北省沧州市人民医院（061001）李秀清3

河北省沧州市青县人民医院（062650）李翠萍4 李丽5

原发性肝癌是肝脏中最常见的恶性肿瘤，其病理类型90%以上是肝细胞癌[1]（hepatocellular carcinoma，HCC）。ILK是新近发现的一个具有3个结构单位的Ser/Thr蛋白激酶，作为整合素和生长因子受体信号传导途径中的一个重要效应物，ILK调节着细胞的粘着、生存、分化和凋亡[2]。其相关蛋白PKB、GSK3等是细胞程序死亡和细胞周期循环的重要调节蛋白。由于这些原因，使得ILK与肿瘤的形成、浸润转移和临床预后等密切相关。血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）也称血管通透因子（VPF）[3]，具有很强的血管生成和增强血管通透性的作用，在肿瘤血管生成中起关键作用，其表达的强弱直接影响着肿瘤的生长、侵袭和转移[4][5][6]。

本研究通过检测ILK和VEGF在肝细胞癌组织中的表达情况，分析表达结果与组织学分级的关系及两者的相关性，并为肝细胞癌的靶向治疗提供一定参考依据。

1 材料和方法

1.1一般资料 收集沧州中西医结合医院2004年1月～2013年6月手术切除标本55例及距肿物至少4cm处正常肝组织20例，且均未在手术前行放、化疗。所有切片均由具有丰富经验的病理科主任医师进行复检。每例选取蜡块4μm连续切片1～2张，进行常规HE染色和免疫组化染色。

1.2实验材料和方法 鼠抗人ILK、VEGF单克隆抗体，DAB显色试剂盒，S-P试剂盒及其他试剂均为福州麦新生物技术公司产品。手术切除标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋后4μm连续切片，采用S-P法常规免疫组化染色，以中性磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗做阴性对照，以已知ILK、VEGF阳性的肝细胞癌组织做阳性对照。

1.3结果判定标准 ILK、VEGF阳性结果的判定均以胞质呈棕黄色至棕褐色颗粒状，而细胞核处空泡状或染色淡为准。每张切片采用随机10个高倍视野下阳性细胞计数，阳性细胞数与细胞总数之比计算阳性百分率。ILK阳性细胞表达率＜10%定为（-），11～30%定为（+），31～75%定为（++），76～100%定为（+++）；VEGF阳性细胞表达率＜6%定为（-），7～25%定为（+），26～75%定为（++），76～100%定为（+++）。

1.4统计方法 采用SPSS10.0统计软件，对ILK、VEGF的表达情况与肝细胞癌病理分级的关系以及各指标之间的相互关系进行统计分析。

2 结果

ILK、VEGF在正常肝组织、肝细胞癌病理分级以及两指标之间的相互关系见附表1和2。

附表1 ILK、VEGF在正常肝组织、肝细胞癌病理分级以及两指标之间的相互关系

在55例肝细胞癌中，ILK49例表达为阳性，阳性率89.1%，阳性染色主要位于癌细胞胞质；在20例正常对照的有4例表达弱阳性（+），其余为阴性，阳性率20%，阳性染色主要位于正常肝细胞。肝细胞癌中ILK阳性表达率显著高于正常肝细胞组（P＜0.05）。中低分化组阳性率93.8%和100%高于高分化组50%（P＜0.05）；且低分化组15例样本中阳性表达（++）11例、（+++）3例，明显高于高分化组8例样本中阳性表达（++）1例、（+++）0例。VEGF有53例表达阳性，阳性率96.4%，阳性染色主要位于细胞胞质，在20例正常对照的有1例表达阳性（++），4例弱阳性（+），其余为阴性，阳性率25%，阳性染色主要位于间质细胞及部分肝细胞。肝细胞癌中VEGF阳性表达率显著高于正常肝细胞组（P＜0.05）。中低分化组阳性率96.4%高于高分化组75%（P＜0.05），且低分化组15例样本中阳性表达（++）10例、（+++）4例，高于高分化组8例样本中阳性表达（++）4例、（+++）0例。55例肝细胞癌标本中二者共同阳性49例，二者共同阴性2例，ILK、VEGF的表达具有明显相关性（P＜0.05）。

附表2 肝细胞癌中ILK、VEGF指标之间的关系

3 讨论

实体肿瘤的生长很大程度上依赖于持续的血管生成，血管的生成对肿瘤的生长、浸润和转移起着非常重要的作用。VEGF与受体结合后通过一系列信号传导机制导致血管内皮细胞分裂增殖，增加微血管的通透性，促进血浆蛋白外漏，基底膜降解，最终导致新的基质及新的血管形成，为肿瘤的生长和转移提供条件。本研究显示，VEGF在肝细胞癌组中阳性表达率显著高于正常肝细胞中的阳性表达率（P＜0.05）；同时中低分化肝细胞癌中VEGF含量明显高于高分化肝细胞癌，表明随着肿瘤细胞分级的增高，VEGF含量表达增强，提示VEGF定量检测可作为肝细胞癌一种早期无创性诊断和预测预后的良好指标。

整合素连接激酶（integrin-linked kinase，ILK）是一种新近发现的丝氨酸/苏氨酸（Ser/Thr）蛋白激酶。它能通过与整合素β1和β3亚单位的结合介导细胞与细胞外基质的连接。目前研究证据显示，ILK的过度表达与多种恶性肿瘤密切相关。ILK在人类前列腺癌、肺癌、喉鳞状细胞癌、卵巢癌、胶质瘤、恶性黑色素瘤、肝癌等组织中均高表达，且表达程度与肿瘤的恶性程度呈正相关，与本研究结果相吻合。

动物实验发现，将ILK过表达的细胞导入裸鼠体内可引发肿瘤[7][8][9][10][11]。本研究显示：在肝细胞癌组织中ILK的阳性表达率89.1%。肝细胞癌组织中ILK呈棕黄色颗粒，定位于肿瘤细胞质。ILK 蛋白在肝细胞癌组的表达率89.1%明显高于正常肝细胞组阳性率20%，且表达强度明显增强；同时中低分化组阳性率93.8%和100%高于高分化组50%（P＜0.05）；且低分化组15例样本中阳性表达（++）11例、（+++）3例，明显高于高分化组8例样本中阳性表达（++）1例、（+++）0例，提示ILK对于促进肝细胞癌的发生发展呈正相关性。

本研究结果表明，VEGF与ILK的表达有明显的相关性，随着ILK表达的升高，VEGF表达也升高，ILK与VEGF存在正相关，且具有明显的统计学意义（P＜0.05），说明它们之间有着某种必然的联系，提示ILK与VEGF在肿瘤发生、发展中可能存在协同作用。

综上所述，ILK与VEGF参与肝细胞癌的发生、发展过程，二者的高表达与肝细胞癌的分化程度密切相关，成为评估肝细胞癌恶性程度的重要生物学指标。