RP-HPLC测定保婴镇惊丸中甘草苷的含量

2013-10-19巩长芹

中国实用医药 2013年23期

巩长芹

·实验研究·

巩长芹

目的建立保婴镇惊丸中甘草苷的含量测定方法。方法采用C18柱，流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(14∶86)，检测波长为276nm，柱温为40℃，流速：1.0 ml/min。结果甘草苷进样量在0.0973μg～0.9730μg之间与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9996)；平均回收率98.0%，RSD(相对标准偏差)=1.08%(n=6)。结论该方法操作简便，准确性好，可作为保婴镇惊丸中甘草苷的质量控制。

保婴镇惊丸；甘草苷；高效液相色谱法；含量测定

保婴镇惊丸收载于部颁标准第八册，由大黄、甘草、朱砂组成，原质量标准中只有性状和检查项目而无含量测定，为了能更好的控制其质量，本文测定了甘草中甘草苷的含量，建立了准确、简便、可靠分析方法，能有效控制其质量，也有利于提高药品生产质量管理水平。

1 材料与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪；Agilent-C18色谱柱；XS205DU电子天平(梅特勒-托利多生产)；电热恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪器厂)；甘草苷对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：111610-201106，含量以93.7%计)；保婴镇惊丸(市售，批号：1012001、1012002、1012003)；乙腈为色谱纯，水为纯化水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件及系统适应性以C18为填充剂；以乙腈-0.2%磷酸溶液(14∶86)为流动相；流速为1.0 ml/min；柱温为40℃；检测波长为276nm。理论板数按甘草苷峰计算应不低于3000。

2.2对照品溶液精密称取甘草苷对照品20.76 mg，置于200 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3供试品溶液参考快胃片的含量测定方法[1]。取本品，剪碎，取约0.7 g，精密称定，精密加入50%甲醇25 ml，称定重量，回流1 h，放冷，用50%甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

2.4专属性按保婴镇惊丸中处方比例精密称取全方中除甘草外的其他药材，按“供试品溶液”条件制备成阴性溶液。照样品测定方法测定，结果在主成分出峰处无干扰。

图1 HPLC图A.对照品 B.供试品

2.5线性关系分别精密吸取对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0μl，注入液相色谱仪，记录峰面积。以对照品进样量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，作标准曲线为Y=1609.09X+4.8507，r=0.9996，结果甘草苷进样量在0.0973～0.9730μg之间与峰面积呈良好的线性关系。

2.6精密度取甘草苷对照品溶液5μl，分别进样6次，以2.1项下的色谱条件测定，以峰面积计算，结果RSD为0.24%，表明仪器的精密度良好。

2.7重复性取同一样品(1012002)6份，按2.3项下的方法制备供试品溶液，以2.1项下的色谱条件分别进样测定，计算含量，结果甘草苷含量的RSD为1.26%，表明重复性良好。

2.8稳定性取同一份供试品溶液(1012002)，分别于0、1、2、4、8、12、24 h进样测定，结果甘草苷的RSD为1.37%，表明样品在24 h内稳定。

2.9加样回收试验取6份已知含量的样品(1012002)，甘草苷的含量为3.12 mg/g，精密称定，取6份，每份中精密加入甘草苷对照品溶液15 ml，按2.3项下的方法制备成供试品溶液，依法，测得量分别为2.5260，2.5319，2.5440，2.5039，2.4968，2.5251 mg，计算得回收率分别为98.01%、98.12%、99.83%、96.78%、97.13%、98.19%，平均值为98.0%，RSD为1.08%。

2.10样品含量测定取3批样品，按供试品溶液的制备方法制备溶液，依法测定按外标法计算含量。结果批号为1012001、1012002、1012003的样品中甘草苷的含量分别为3.13，3.12，3.21 mg/g。