高效液相色谱法测定银栀口服液中绿原酸的含量

李 翔，刘皈阳，马建丽，周 亮，高 磊

银栀口服液来自民间验方银栀汤，由金银花、连翘、栀子、薄荷、牛蒡子、桔梗、甘草等多味中药组成，具有辛凉解表、清热肃肺的功能，主治外感风热。方中金银花具有清热解毒、疏散风热的功效，绿原酸为其主要有效成分，具有抗菌、抗病毒等作用［1-2］。为了有效控制银栀口服液的质量，本试验采用HPLC法测定方中君药金银花中绿原酸的含量，可以为建立该制剂的质量控制标准提供借鉴。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪;Mettler AE240电子天平。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号:0753-200111);银栀口服液(10 mL/支，批号:120305、120312、120319);甲醇为色谱纯，水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm ×150 mm，5 μm);流动相:甲醇-0.5%冰醋酸溶液(20∶80);流速:1.0 mL/min;检测波长:327 nm;柱温:30℃;进样量:10 μL。理论塔板数按绿原酸峰计算不低于5 000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品10.92 mg，置于50 mL量瓶中，用甲醇定容，摇匀，即得218.4 μg/mL的对照品储备溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密量取银栀口服液1 mL，置于100 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性溶液的制备 按处方制备不含金银花药材的样品，按“2.2.2”项下方法制成阴性溶液。

2.3 专属性试验 取对照品溶液、供试品溶液、阴性溶液各10 μL，按“2.1”项下色谱条件进样测定。结果阴性对照溶液对绿原酸的测定无干扰(见图1)。

2.4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mL，置于 10 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。取上述溶液，分别进样。以绿原酸浓度(μg/mL)为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程:Y=30.45 X+4.536(r=0.999 8，n=6)。结果表明，绿原酸在2.184～109.2 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μL，重复进样6次，测定峰面积。结果RSD为0.76%(n=6)，表明方法精密度良好。

2.6 稳定性试验 取供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24 h进样测定峰面积。结果RSD为1.21%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

图1 高效液相色谱图

2.7 重复性试验 取同一批号样品6份(批号:120305)，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，测定绿原酸含量。结果表明，绿原酸的平均含量为0.507 3 mg/mL，RSD 为1.80%(n=6)，表明方法重现性良好。

2.8 加样回收试验 分别精密称取已知含量为0.507 3 mg/mL的样品6份(批号:120305)，分别精密加入 218.4 μg/mL绿原酸对照品溶液1.2 mL，按“2.2.2”项下方法制备溶液，测定绿原酸含量，计算回收率，结果见表1。

表1 绿原酸加样回收率试验结果(n=6)

2.9 样品含量测定 按“2.2.2”项下方法制备样品溶液，依法测定样品中绿原酸的含量，结果批号为120305、120312、120319的3批样品中绿原酸的含量分别为0.507 3、0.523 8、0.537 2 mg/mL，RSD分别为1.80%、1.62%、1.55%(n=3)。

3 讨论

3.1 目前，测定制剂中绿原酸含量的文献较多，大多采用含磷酸溶液的流动相体系进行分离测定，对色谱柱的寿命影响较大，且易引起基线的波动［3-6］。本试验通过比较磷酸溶液和冰醋酸溶液组成的流动相体系发现，采用甲醇-冰醋酸溶液作为流动相即可避免绿原酸的色谱峰拖尾现象，通过进一步优化冰醋酸溶液的浓度，发现0.5%冰醋酸溶液可以满足色谱系统适应性的要求。

3.2 从3批次样品的测定结果可以发现，不同批次银栀口服液中绿原酸含量较为一致，说明该口服液的生产工艺稳定，能够保证产品质量的可靠性。另外，方法学考察中重复性试验、样品溶液稳定性、加样回收率均符合要求，可以保证含量测定结果的准确性。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［S］.北京:化学工业出版社，2010:205.

［2］吴卫华，康桢，欧阳冬生，等.绿原酸的药理学研究进展［J］.天然产物研究与开发，2006，18:691.

［3］高旺，张骥鹏.HPLC法测定消炎片中绿原酸的含量［J］.实用药物与临床，2009，12(3):201-202.

［4］陈珂，宋岚，邝明，等.高效液相色谱法测定杏杷止咳颗粒中绿原酸含量［J］.中国药业，2011，20(1):26-27.

［5］师永花.双波长RP-HPLC法测定清开灵胶囊中栀子苷和绿原酸的含量［J］.实用药物与临床，2011，14(4):300-303.

［6］徐英宏，关丁越，姜清华.治咽颗粒的鉴别及其绿原酸含量测定［J］，实用药物与临床，2011，14(6):694-698