血必净注射液对急性百草枯中毒大鼠IL-1、IL-6、TNF-α的影响

张志刚，任 静，贾 东，赵 敏

在我国，百草枯中毒已成为内科常见的急危重症，病死率极高，可达60.3%～87.8%［1-3］。百草枯可对人体多脏器造成损伤，患者最终多死于多脏器功能衰竭或呼吸衰竭，而其发病机制尚不完全清楚［4］。目前认为可能与百草枯中毒引起的炎性反应有关，因此，如何抑制百草枯引起的炎性反应、减少肺纤维化及多脏器功能损伤成为目前研究的焦点。

大量基础研究以及临床实践证明，血必净具有强效抗内毒素、拮抗内毒素诱导单核巨噬细胞产生的内源性炎性介质及细胞因子失控性释放的作用，同时提高超氧化物歧化酶活性等作用［5-8］。

本研究通过检测 IL-1、IL-6、TNF-α 的表达水平，探讨血必净对百草枯引起的炎性反应的抑制作用，从而为临床治疗提供依据。

1 实验材料和方法

1.1 材料 雄性Wistar大鼠30只，体质量200～250 g，由我院实验动物部提供。饲养室温度20～25℃，恒温，湿度65%恒湿，饲养动物均单笼饲养，自由饮水。血必净注射液由天津红日药业有限公司惠赠;20%百草枯购于辽宁省农业科学院;免疫组织化学所需试剂:ELISA试剂盒，酶联免疫吸附法PBS缓冲液，均购自沈阳万类生物科技有限公司;蒸馏水、生理盐水等均由我院实验室提供。主要仪器:ELISA酶标检测仪，微量移液器，塑料滴头;37℃孵育箱，-80℃深低温冰箱，高速离心机等。

1.2 实验方法

1.2.1 实验动物分组及中毒模型制造 适应性饲养1周后，将大鼠按照随机原则分组编号，分为Ⅰ组(空白对照组)、Ⅱ组(百草枯染毒组)、Ⅲ组(血必净治疗组)，每组10只。Ⅰ组大鼠给予生理盐水10 mL/kg灌胃;Ⅱ、Ⅲ组大鼠给予百草枯20 mg/kg灌胃(将20%百草枯稀释至0.2%百草枯，给予10 mL/kg=20 mg/kg灌胃)，观察大鼠的生命状态，注意大鼠有无死亡。

1.2.2 实验动物的治疗及标本采集、分析 在上述动物处置30 min后，Ⅰ、Ⅱ组大鼠分别给予生理盐水10 mL/kg腹腔注射，1次/d，直至大鼠被处死;血必净治疗组大鼠分别给予血必净注射液10 mL/kg腹腔注射，1次/d，直至大鼠被处死。上述大鼠在处理后3、7、14d分别取眶内眦静脉血，于4℃高速离心机3 000 r/min高速离心15 min后，取上层血清，置于-80℃冰箱待检。采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清IL-1、IL-6、TNF-α。

1.3 统计学分析 采用SPSS 16.0统计软件进行分析，数据以表示，两组间比较采用单因素独立样本t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 实验结果

大鼠在14d内死亡1只，为染毒组大鼠，其余大鼠均存活;Ⅱ组及Ⅲ组大鼠较Ⅰ组萎靡，且皮毛较暗淡。大鼠均于第14天采血后采用寰椎脱位法处死。实验结果见表1、表2。

表1 三组大鼠血清IL-1、IL-6值

表2 三组大鼠血清TNF-α值

由表1、表2可见，染毒组及血必净治疗组IL-1、IL-6、TNF-α 浓度较空白组明显升高，且差异有统计学意义(P＜0.001)，说明百草枯对大鼠机体造成了一定的炎性损伤;而血必净治疗组IL-1、IL-6、TNF-α浓度较染毒对照组明显降低，且差异有统计学意义(P＜0.001)，说明血必净注射液对急性百草枯中毒大鼠IL-1、IL-6、TNF-α有一定的抑制作用。

3 讨论

目前，许多学者认为，百草枯可以损伤内皮细胞的活性和细胞膜的功能，这是百草枯引起肺纤维化的原因之一。Tsukamoto等［9-10］发现，百草枯处理过的肺微血管内皮细胞活力丧失、细胞膜功能发生障碍、NADPH减少、抗氧化防御系统酶活性增加，说明百草枯直接破坏内皮细胞，且与氧化应激有关。同时，百草枯中毒后，肺部出现大量炎性细胞浸润，包括肺泡巨噬细胞等;而肺泡巨噬细胞能合成释放大量具有多种生物活性的细胞因子、前炎症介质、趋化因子及蛋白酶等，在肺炎、肺纤维化发生发展过程中具有重要意义［11］。百草枯对肺泡巨噬细胞的毒性具有时间-剂量依赖性，肺泡巨噬细胞对百草枯摄取与浓度呈线性关系，随着时间延长，细胞内外浓度可达到平衡，百草枯是通过弥散作用进入巨噬细胞的。另外，中性粒细胞一旦被激活，本身又将产生一系列的细胞因子和其他炎性介质如中性粒细胞弹性蛋白酶(BALFNE)等，形成级联放大网络，导致恶性循环，进一步加重组织、器官损伤，其中肺纤维化是患者死亡的重要原因［12］。

血必净注射液由中药红花、赤芍、川芎、丹参、当归、鱼腥草等组成，具有活血化瘀、疏通经络、溃散毒邪的作用，临床上主要用于治疗急危重症如全身炎症反应综合征(SIRS)及MODS等，其有效成分为红花黄色素A、川芎嗪、丹参素、阿魏酸、芍药苷、原儿茶醛等［13-14］。现代药理证明，赤芍、丹参、红花可以改善微循环，增加血流量;降低炎症反应以及毛细血管的通透性，减少炎性渗出，促进炎症吸收，抑制炎性肉芽肿形成，因而可以充分降低感染过程的病理损害;而且还可以增强RES的吸附功能以及白细胞的吞噬能力，使血肿以及其他坏死组织易被吞噬细胞吞噬吸收。川芎嗪可以直接改善红细胞变形性，抑制血小板聚集，抑制TXB2的合成和释放，促进PGI2的合成。另外，川芎嗪还可以阻止缺氧时细胞外钙离子内流，产生扩血管作用［15］。

刘达兴等［16］在对健康成年犬体外循环肺损伤的研究中发现，血必净注射液能减轻体外循环后血浆中TNF-α、IL-6和IL-8水平，对体外循环肺损伤有保护作用。孙元莹等［17］发现，血必净注射液能显着抑制急性肺损伤大鼠TNF-α表达，对急性肺损伤具有良好的治疗作用。在本实验研究中，血必净治疗组，大鼠血清中检测TNF-α、IL-1、IL-6的表达水平都明显低于染毒组，说明血必净有效地抑制了急性百草枯中毒引起的炎性反应，减少了对机体的进一步损伤。从而为百草枯中毒的救治提供有力的证据。

［1］刘伟，赵敏.血必净联合甲强龙治疗百草枯中毒患者肺损伤的研究［J］.实用药物与临床，2009，12(1):13-15.

［2］胡志辉，魏宝强.百草枯中毒诊治进展［J］.实用中医药杂志，2012，28(2):151-152.

［3］罗战云.急性百草枯中毒16例救治体会［J］.中华劳动卫生职业病杂志，2007，25(6):330.

［4］谢东辉，郑兰荣.百草枯中毒救治23例分析［J］.实用医学杂志，2007，23(21):3409-3411.

［5］程冕，刘莉，史有松.血液灌流联合血必净注射液治疗重度有机磷农药中毒疗效分析［J］.中国医药，2010，5(1):44-45.

［6］郑玉兰.血必净注射液治疗慢性肺源性心脏病失代偿期的临床疗效分析［J］.中国医药，2010，5(4):305-306.

［7］何国鑫，胡慧敏，罗文朝，等.血必净注射液对急性肺损伤大鼠氧自由基变化的影响［J］.实用医学杂志，2009，25(12):1916-1919.

［8］马俊清，路伟，黄杨，等.血必净注射液对百草枯刺激的大鼠肺微血管内皮细胞损伤的保护作用［J］.中国急救医学，2008，28(9):808-812.

［9］Tsukamoto M，Tampo Y，Sawada M，et al.Paraquat-induced oxidative stressed dysfunction of the glutathione redox cycle in pulmonary microvascular endothelial cells［J］.Toxicology and Applied Pharmacology，2002，178:82-92.

［10］Tsukamoto M，Tamop Y，Sawada M，et al.Paraquat-induced membrane dysfunction in pulmonary microvascular endothelial cells［J］.Pharmacology ＆ Toxicology，2000，86:102-109.

［11］付丹，向颜霞.百草枯中毒［J］.中国小儿急救医学，2010，17(4):296-299.

［12］姜文，何庆.百草枯急性肺损伤中毒机制的研究进展［J］.华西医学，2006，21(3):649-650.

［13］郑雪冰，孙晓莉，马国芳.血必净对百草枯中毒患者血清转化生长因子B1和型前胶原肽水平的影响［J］.临床荟萃，2010，25(17):1544-1546.

［14］李铁刚，张嵘.血必净治疗百草枯中毒的病例分析［J］.实用药物与临床，2007，10(3):159-160.

［15］王丹丹，吕小华，陈科.川芎嗪治疗重症急性胰腺炎的研究［J］.现代中西医结合杂志，2008，17(1):10-11.

［16］刘达兴，卢斌，梁贵友，等.静脉滴注血必净对体外循环肺损伤的保护作用研究［J］.中国药房，2008，19(24):1860-1862.

［17］孙元莹，郭茂松，李志军，等.血必净对急性肺损伤大鼠肿瘤坏死因子-α表达的影响［J］.时珍国医国药，2006，17(4):531-532.