康妇涌泉颗粒中β-脱皮甾酮的含量测定

樊秦娥，吴立兵

康妇涌泉颗粒(批准文号:鄂药制字Z2011148)是湖北医药学院附属太和医院研制的一种妇产科用口服颗粒剂，具有补气养血、去瘀生新、通经下乳的功效。用于产后气血虚弱、四肢无力、乳汁稀少或乳腺炎初期，乳腺胀痛，防治清宫后盆腔感染等症［1］。康妇涌泉颗粒由黄芪、当归、党参、漏芦、大枣、玄参、青皮、白芷、小通草、炒王不留行、蒲公英、甘草等12味中药组成。漏芦是佐药，该药物为菊科植物祁州漏芦Rhaponticum uni florum(L.)DC.的干燥根，味苦、寒、平，归胃经。具有清热解毒、消痈、下乳的作用，常用于乳痈肿痛、痈疽发背、癗疠疮毒、乳汁不通、湿痹拘栾等症［2］。其主要药理活性成分为β-脱皮甾酮，由于受条件的限制，该制剂到目前为止尚无定量标准。为了提高该制剂质量标准，笔者参考相关文献试验对该制剂中各味药物的主要药理活性成分进行含量测定，现报道如下。

1 仪器与材料

戴安UItiMate3000型高效液相色谱仪(美国戴安公司);UP5200HE超声震荡仪(熊猫集团南京电子计量有限公司，500 W，50 Hz);分析天平(上海精科天平厂，FA2004，精度 0.000 1 g);β-脱皮甾酮对照品(中国食品药品研究院提供，批号:111746-2013212);康妇涌泉颗粒(湖北医药学院附属太和医院制备，规格:15 g/袋，10袋/盒，批号:20130310、20130312、20130314)。超纯水(湖北医药学院附属太和医院新鲜制备);甲醇为色谱纯;冰醋酸为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件［3-4］色谱柱:Diamonsil-C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流 动 相:甲 醇-水(31∶69)，检测波长 247 nm，流速 1.0 mL/min，进样量10 μL，柱温30 ℃。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取β-脱皮甾酮对照品适量，用60%甲醇溶解制成每1 mL含20 μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液 精密称取康妇涌泉颗粒2.0 g，置100 mL圆底烧瓶中，精密加入60%甲醇20 mL，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用60%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

2.2.3 阴性样品溶液 精密吸取不含漏芦的康妇涌泉颗粒2.0 g，按“2.2.2”项溶液的制备方法制备，即得。

2.3 系统适用性试验 分别取“2.2”项下的各溶液，在“2.1”色谱条件下进样，记录色谱图，结果对照品溶液、供试品溶液在同一时间有相同色谱峰出现，阴性样品溶液在此处无色谱峰出现，样品分离度良好，表明在该色谱条件下样品中的其他成分对β-脱皮甾酮含量测定无干扰。见图1。

2.4 线性方程的建立 取β-脱皮甾酮对照品用60%甲醇溶解，分别制成每1 mL含 β-脱皮甾酮5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、160.0 μg 的系列溶液，分别在“2.1”色谱条件下进样，以浓度为纵坐标、峰面积值为横坐标进行线性回归，得回归方程为Y=0.093 7X+0.183 1，r=0.999 4，β-脱皮甾酮在5.0～160 μg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 取“2.2.1”项下的对照品溶液，在“2.1”色谱条件下分别进样5次，记录峰面积值，结果RSD为0.74%，表明该仪器精密度良好。

图1 高效液相色谱图

2.6 稳定性试验 取“2.2.1”项下的对照品溶液，于0、3、6、12、24 h 分别取样，在“2.1”色谱条件下进样测定峰面积值，结果RSD为1.05%，说明β-脱皮甾酮对照品溶液在24 h内稳定。

2.7 重复性试验 精密称取同一批号(201130310)的康妇涌泉颗粒样品6份，每份2.0 g，按“2.2.2”项下供试品溶液的方法制备，在“2.1”色谱条件下进样，测定峰面积值，结果RSD为1.22%。

2.8 回收率试验 精密称取同一批号(20130310)已测知含量的康妇涌泉颗粒1.0 g(含量70.0 μg/g)于100 mL圆底烧瓶中，共9份，3个样品一组，分别精密加入“2.2.1”项下浓度为20.0 μg/mL 的 β-脱皮甾酮对照品溶液 1.0、2.0、3.0 mL，按“2.2.2”项下供试品溶液的制备方法制备，在“2.1”色谱条件下进样，记录峰面积值，按外标法计算β-脱皮甾酮回收率，结果见表1。

表1 康妇涌泉颗粒中β-脱皮甾酮回收率试验结果(n=6)

2.9 含量测定 取3批样品，照“2.2.2”项下供试品溶液制备方法制备，在“2.1”色谱条件分别测定峰面积，按外标法计算含量，结果见表2。

表2 康妇涌泉颗粒中β-脱皮甾酮含量测定结果(n=3)

3 讨论

康妇涌泉颗粒系由多种中药组成的复方制剂，成分比较复杂，制备时经过煎煮、浓缩、干燥、制粒等过程，煎煮时不能保证所有药理成分完全溶出，在浓缩、干燥过程中部分药理成分可能被破坏等，因此，对其中相关成分进行检测尤为重要。

β-脱皮甾酮在漏芦中含量较低，本试验参考2010年版中国药典(一部)标准对其进行最低限量(≥0.04%)控制。取样2 g用60%甲醇回流提取，目的是使样品中所含β-脱皮甾酮能充分溶出。β-脱皮甾酮在60%甲醇中的溶解效果较好，故选用60%甲醇做溶剂。在选择流动相时曾用乙腈-0.03%磷酸溶液(58∶42)为流动相，但分离度较差。后改用甲醇-水(39∶61)为流动相［5-6］，则检出效果良好。该方法专属性强，适用于康妇涌泉颗粒中β-脱皮甾酮的质量控制。

［1］湖北省食品药品监督管理局.湖北省医疗机构制剂质量汇编［Z］.2000年版:304-305.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:348.

［3］孙宇，卿德刚，张娟，等.鹿草根中 β-蜕皮甾酮的含量测定［J］.药物分析杂志，2012，32(9):1614-1616.

［4］陈玉敏，曹红，水彩红.HPLC法测定牛膝胶囊中β-脱皮甾酮的含量［J］.中国医药指南，2011，9(17):212-213.

［5］林大专，王广树，杨晓虹，等.牛膝中新脱皮甾酮类成分的研究［J］.中国药学杂志，2006，41(17):1295-1297.

［6］李文莉，汪文涛，雷玉萍.RH-HPLC法测定脉络宁注射液中脱皮甾酮的含量［J］.华西药学杂志，2001，16(4):382-383.