高效液相色谱法检测中药制剂中的消炎成分

胡巧爱

(永康市食品药品检验所，浙江永康321300)

中药制剂往往有一药多用的效果，这是由于重要的成分错综复杂，很难提取和分离。如小儿双解止泻颗粒，除止泻作用外还有解毒清热即西医所说的消炎作用;又例如复方肿节风喷雾剂除利咽抗菌作用外也具有清热抗菌消肿之效，这都属于中药成分的消炎作用。本实验采用高效液相色谱法，分别以黄芩苷和异秦皮靛为指标，来建立小儿双解止泻颗粒和复方肿节风喷雾剂的成分含量检测方法。

1 检测仪器与药剂

1.1 仪器

(1)仪器组一:日本岛津产高效液相色谱仪，SPD－10AVP检测器，SCL－AVP色谱工作站，LC－10AVP泵，KQ－400DB型超声波清洗器，ALl04型梅特勒电子分析天平。(2)仪器组二:Agilentl100型高效液相色谱仪，VWD紫外检测器，;G131lA四元泵，;G1313A手动进样阀，HypersilC18不锈钢填充柱为色谱柱。

1.2 药剂

(1)药剂组一:小儿双解止泻颗粒供试品(批号030404，030405，030406，);黄芩苷对照品;色谱纯为磷酸、甲醇、四氢呋喃;其他分析纯。(2)药剂组二:复方肿节风喷雾剂供试品(批号083712，083713，083714);异秦皮靛对照品;色谱纯为乙腈，双蒸水;其他分析纯。

2 方法与结果

2.1 条件

(1)组一:美国PhenomenexC18柱;流动相为甲醇－水－四氢呋喃 － 磷酸(100:150:25:0.1);流速为 1.0mL·min－1;检测波长为287nm;进样量 20μL;理论塔板系数 ＞2500[1]。(2)组二:美国PhenomenexC18柱;流动相为乙腈－0.1%磷酸水溶液(20:85);流速为1.0mL·min－1;检测波长为346nm;进样量 10μL;理论塔板系数 ＞1200[2]。

2.2 实验方法

2.2.1 供试品药液的制备

(1)组一:量取供试品10g并将其研细，准确称取0.1g放置在5mL量器内，加水1.5mL后使用超声融化，再加入6mol/L的HCl，充分混合后用水浴加热6min，静置20min后离心，去上清液，沉淀后用50%的乙醇溶解再置于50mL的量瓶中，再用50%的乙醇补液至刻度处，充分混合后过滤，续滤液为供试品溶液。(2)组二:精确量取复方肿节风喷雾剂供试品溶液每次10mL，经三氯甲烷萃取共5次，将萃取液合并后蒸干，将析出品加入甲醇溶解，所得液体即供试品溶液，置于25mL的量瓶中。

2.2.2 线性关系考查

(1)组一:准确量取乙醇黄芩苷对照品溶液，用50%溶液稀释至对照品溶液，然后以进样量 0.035、0.070、0.105、0.140、0.175、0.210μg 在上述条件下进行峰面积测定，以黄芩苷量(μg)作为横坐标，峰面积为纵坐标，测绘标准曲线并得到回归方程[3]为 Y=453379.5X －42669.1，r=0.996，黄芩苷进样与锋面积线性关系良好的范围为0.031～0.21μg。好的范围在2.24～71.14μg。(2)组二:准确量取异秦皮靛对照品，加甲醇稀释至对照品溶液，充分摇匀后，分别精确量取0.05，1.00，2.00，2.00，2.00，4.00mL，分别置于容积为 100，100，100，50，25，25mL 的量瓶中，用甲醇稀释补液至刻度[4]，充分混合后精确量取各10μL，滴入高效液相色谱仪中进行峰面积测定，同组一的方法得到回归方程为Y=421.582X+4.569，r=0.998，异秦皮靛进样与峰面积线性关系良好的范围在 2.24～71.14μg·mL－1。

2.2.3 精密度试验

(1)组一:准确量取对照品溶液20μL，连续5次进样进行峰面积测定，统计结果得到RSD=0.71%(n=5)。(2)组二:同组一的做法，得到RSD=1.17%(n=5)。

2.2.4 稳定性试验

(1)组一:准确量取 20μL 供试品溶液，在 0、2、4、8、12h时进行同样的测定，得到的结论为黄芩苷的峰值基本没有变化，统计得到RSD=0.73%。(2)组二:同组一法得到RSD=0.81%。

2.2.5 重现性试验

(1)组一:精确称取5 份0.1g的样品，按 2.2.1(1)的步骤方法再次制备试剂，同法进行提取测定，得到的结果为RSD=0.84%(n=5)。(2)组二:与组一同样原理进行组二的重复性试验，得到的结果为RSD=1.77%(n=5)。

2.2.6 回收率实验

(1)组一:准确量取已经实验过的5份供试品各0.1g，分别加入适量的对照品，重复2.2.1(1)步骤，对溶液进行提取制备和测定，得到的平均回收率[5]为 101.35%，RSD=1.11%(n=5)。

(2)组二:与组一同样原理对组二的实验用品进行处理，进行组二回收率试验，得到的处理结果为平均回收率为92.46%，RSD=2 .27%。

2.2.7 测定样品

(1)组一:分别取不同批次的样品精确量取试液5μg，将其注入到高效液相色谱仪中[6]，测定峰面积并计算含量，数据统计结果见表1。

表1 小儿双解止泻颗粒中黄芩苷的含量测定结果(mg/g，%)

(2)组二:同组一相同原理测定峰面积并计算药物含量，得到的结果见表2。

表2 复方肿节风喷雾剂中异秦皮靛的含量测定结果(mg·mL－1，%)

3 结论

笔者参考相关文献，发现其他的药品检测方法对中药制剂复杂的药物成分无法有效的分离提取[7]，就更不能对其药物成分进行分析测算精确，而使用高效液相色谱法对小儿双解止泻颗粒中黄芩苷的含量测定及对复方肿节风喷雾剂中异秦皮靛的含量测定实验的操作步骤简单、方便快捷，不需要对药物成分进行分离，可以直接检测成分含量，而且检测过程中通过精密度试验、稳定性试验、重现性试验、回收率实验、测定样品等重重筛查，反复精确验证，保证了实验结果的可靠性。高效液相色谱法确实是检测中药制剂中药品成分的有效方法。

4 讨论

近年来，由于抗生素的滥用导致细菌耐药性逐年增强，消炎药物的疗效越来越不理想，这就使得中药制剂的消炎效果日益为医疗工作者所重视。中药制剂的抗炎效果理想且使细菌产生耐药性的比率明显偏低，但是，由于其本身成分复杂的原因致使中药制剂无法在临床上大量推广。采用高效液相色谱法检测中药制剂中的消炎成分，高效、便捷、回收率高、可以较高精度地为中药制剂检测药物成分的含量，是中药制剂质量控制的可靠依据。

[1]何鹏，刘乐乐，李国香.HPLC法测定小儿双解止泻颗粒中黄芩苷的含量[J].内蒙古医学院学报，2004，26(1):46-47

[2]严喜鸾，朱建航，张宝.高效液相法测定复方肿节风喷雾剂中异秦皮靛的含量[J].江落中医学院学报，2005，17(6):32

[3]高红梅，张啸环.高效液相色谱法测定解郁安神颗粒中栀子苷的含量[J].长春中医药大学学报，2011，27(1):12-13

[4]井伟，唐熙，吕水源，等.高效液相色谱法检测食品接触产品中的三聚氰胺及其衍生物的迁移量[J].分析测试学报，2011，30(3):269-273

[5]付建武，彭红，周玉春，等.高效液相色谱波长转换法测定西红花苷－1和栀子苷的含量[J].时珍国医国药，2009，20(12):2939

[6]江西省贵溪县卫生局肿节风科研领导小组.草药肿节风的研究[J].中草药通讯，1972，(6):41-47

[7]郭平，李章万，蒋学华.HPLC测定12种中成药制剂中黄芩苷的含量[J].药物分析杂志，1995，15(5):13-16