sB7-H3与原发性高血压患者尿微量白蛋白的关系

张小民 赵楚敏 刘春荣 宋月霞 张光波

B7-H3是新发现的免疫分子，该分子在肿瘤免疫及自身免疫病方面具有重要作用［1］。在项研究中，我们利用sB7-H3酶联检测方法，通过对96例高血压合并蛋白尿患者血清标本的检测，对sB7-H3的表达与疾病的关系进行了分析。我们发现sB7-H3可能与高血压肾损害病变程度密切相关。报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2009年6月至2010年12月唐山市人民医院收治的原发高血压病患者96例，根据MAU分为观察组(n=48)，30≤UAE(尿白蛋白排泄量) ＜300 mg/24 h和对照组(n=48)，UAE＜30 mg/24 h。选择同期健康体检者40例作为健康组。

1.2 纳入与排除标准 所有病例均符合“2005年高血压诊断治疗指南”判定标准。排除标准：恶性肿瘤、继发性高血压、外周血管病及合并心、肝、肾功能不全、瓣膜病、糖尿病、甲亢、结缔组织病及自身免疫性疾病。

1.3 方法

1.3.1 鼠抗人B7-H3单克隆抗体(克隆号为4H7和21D4)来源于苏州大学生物技术研究所;sB7-H3酶联检测试剂盒来自苏州大学附属第一医院临床免疫学实验室。

1.3.2 生化指标及sB7-H3蛋白的检测：观察组和对照组分别与住院后次日清晨6∶00～7∶00，健康组体检当日清晨空腹抽取外周静脉血5 ml，2 500～3 000 r/min离心3～5 min分离血清6 h内完成，-70℃冻存待测。采用免疫透射比浊法测定血浆C-反应蛋白(CRP)，试剂盒由Beckman公司提供，常规生化测定血浆总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDLC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、肌酐(Cr)。血清中sB7-H32蛋白的检测严格按照临床免疫学实验室方法进行实验操作。简言之：以鼠抗人B7-H3单抗4H7为包被抗体，4℃过夜;次日用1%BSA封闭，4℃过夜;洗板后，加入B7-H3融合蛋白作为标准品，和1∶10稀释的血清样本作为待检测标本，同时加入生物素标记的21D4单抗(bio-21D4)，室温孵育3 h，洗板后加入avtin-HRP室温反应30 min，洗板后加入TMB显色，以OD450 nm为检测波长，在Bio-Rad 550酶标仪上读取OD值。以软件Curve-Expert 1.3进行结果分析。

1.3.3 血压测定：采用袖带汞柱式血压计测右上臂血压，取Korotkoff第一音和第五音为收缩压和舒张压，测量3次，各间隔1 min，取其平均值。均在安静休息15 min后测血压。

1.3.4 MAU的检测：于入院或就诊次晨收集24 h尿，甲醛防腐，测24 h尿量，并充分混匀后取少量离心，取上清液存放在-24℃冰箱动存备用。采用放射免疫法(RIA)用北京和仪器厂bh6020型放免计数器测定尿的微量白蛋白浓度。根据MAU的浓度×尿量，得UAE(mg/24 h)。

1.4 统计学分析应用SPSS10.0统计软件，计量资料以±s表示，组间比较采用单因素方差分析，计数资料采用χ2检验，相关性采用直线相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况 3组血脂血糖等一般情况比较基本相同(P＞0.05)，健康组与对照组、观察组的血压比较差异有统计学意义(P＜0.05)，对照组与观察组血压比较差异无统计学意义(P ＞0.05)。见表1。

表1 3组一般情况比较±s

表1 3组一般情况比较±s

注：与健康组比较，*P ＜0.05;与观察组比较，#P ＜0.05

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2.2 2组sB7-H3、CRP比较 检测结果表明观察组患者体内sB7-H3及CRP表达水平较对照组相比明显升高(P＜0.01)。见图 1、2，表 2。

图1 sB7-H3在高血压伴MAU的表达

图1 CRP在高血压伴MAU的表达

表2 sB7-H3在高血压合并MAU患者体内的表达分±s

表2 sB7-H3在高血压合并MAU患者体内的表达分±s

注：与对照组比较，*P＜0.01

对照组(n=48) 23±9 3.9±1.2观察组(n=48) 35±11* 6.4±1.1*

3 讨论

研究证实共刺激分子免疫球蛋白B7家族及细胞因子与高血压、冠心病大动脉病变密切相关［1，2］。但与微动脉特别是微循环的相关性笔者尚未见报道。研究显示hs-CRP水平＞0.77 mg/L时，尿微量白蛋白的发生明显增高，提示炎症反应参与了微量白蛋白尿的发生。微量白蛋白尿预示非特异性血管功能失常，特别是内皮功能失调。研究显示炎性反应具有促进内皮功能损害的作用，并参与了高血压病及高血压病肾功能损害的发生发展［3-5］。可能还伴随免疫功能的异常［6］。而微量蛋白尿与内皮功能障碍呈明显负相关。为进一步探讨微量蛋白尿与免疫反应的关系，我们利用酶联检测试剂药盒，通过对96例高血压患者血清的检测，结果发现sB7-H3在高血压合并微量蛋白尿患者体内的表达水平明显高于对照组(P＜0.01)。观察结果显示，CRP、sB7-H3的增高与微量蛋白尿的变化呈相关性，高血压微量蛋白尿组的CRP sB7-H3显著增高。证实了免疫反应及慢性炎症在高血压微量白蛋白尿的发生发展中发挥重要作用与上述报道一致也进一步证实高血压病合并微血管病变与免疫反应及慢性炎症密切相关。

总之，该项研究从血管免疫炎症机理入手，利用sB7-H3酶联检测方法，通过对96例高血压合并微量蛋白尿患者血清中sB7-H3的表达及分析，首次发现sB7-H3在高血压合并微量蛋白尿病人血清中具有远较对照人群为高的表达水平。鉴于此，B7-H3能协同刺激CD+4，CD+8T细胞的增殖，特异性的促进干扰素-γ(IFN-γ)分泌表达，对白细胞介素-8(IL-8)，肿瘤坏死因子-α(TNF-α)也有适度的上调作用［7］。因此，sB7-H3 通过参与血管免疫炎性反应，促进肾小球损伤的发生和发展。本研究提示，通过某种途径对sB7-H3介导的免疫炎性反应进行有效的干预也许是治疗高血压肾损害的新途径，这也为我们研究高血压肾血管病变的免疫学机制提供了新的线索与思路。

1 张小民，宋月霞，刘春荣，等.sB7-H3与高血压合并颈动脉粥样硬化的关系.中华高血压杂志，2007，15：76-77.

2 张小民，赵楚敏，宋月霞，等.sB7-H3与急性心肌梗死预后的关系.心脏杂志，2010，22：81-83.

3 严江涛，叶辉，江道文.微量白蛋白尿与血浆高敏C反应蛋白的关系.中华心血管病杂志，2005，33：534-535.

4 赖剑波，江勇，姚志军.苯那普利对高血压肾病患者鸟微量白蛋白和C反应蛋白的影响.中华高血压杂志，2009，17：76-77.

5 Liao YH，Wei YM，Wang M，et al.Autoantibodies against AT1-receptor and 1-adrenergic receptor in patients with hypertension.Hyertens Res，2002，25：641.

6 谢秀梅，李志凌，李兢，等.老年原发性高血压微量白蛋白尿与血管内皮功能及颈总动脉粥样硬化.高血压杂志，2006，14：94-96.

7 Chapoval AI，Ni J，Lau JS，et al.B7-H3：a costimulatory molecule for T cell activation and IFN-γ production.Nat Immunol，2001，2：269-274.