除痹片对佐剂性关节炎大鼠的抗炎镇痛作用及其机制

朱建泉,陈皋阳,刘延庆

(江苏省扬州市苏北人民医院,江苏扬州,225001)

中医临床实践证明,传统中药具有较好的抗炎镇痛作用,并被广泛地应用于各种病症的治疗。本研究在此基础上采用自行研制的中药复方制剂除痹片,建立佐剂性关节炎(AA)大鼠模型,探讨除痹片对AA大鼠的抗炎镇痛作用及其相关机制,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 动物和分组

健康SD大鼠 48只,清洁级,雄性,体质量250～320 g,均由中科院上海实验动物中心提供。将48只大鼠随机分为6组(正常对照组、模型组、除痹片高剂量组、除痹片中剂量组、除痹片低剂量组和阿司匹林组),每组8只。

1.2 药物和试剂

除痹片药物组成包括细辛、川芎、红花、白花蛇等;阿司匹林由无锡阿斯利康制药有限公司生产(0.5 g/片,批号200407002);SOD、MDA 检测试剂盒购自南京聚力生物医学研究所;弗氏完全佐剂(FCA)购自GIBCO公司。

1.3 AA大鼠模型的建立[1]及给药方法

除正常对照组给予等剂量生理盐水注射外,其他各组大鼠均于右后足跖皮下进针至踝关节,注射弗氏完全佐剂(FCA)0.1 mL致炎,注射佐剂侧(右后肢)足跖从第1天起持续肿胀约5 d,而后肿胀逐渐消退。第8天再次持续肿胀,继发性反应大多于第11天左右发生,主要表现为注射佐剂对侧(左后肢)足跖肿胀,尾部、耳部及前肢关节也有不同程度的肿胀。致炎后第17天起,除痹片高、中、低剂量组分别给予800、400及200 mg/kg浓度灌胃给药;正常对照组和模型组均给予10mL/kg的生理盐水;阿司匹林组给予100mg/kg阿司匹林灌胃给药,1次/d,连续10 d。

1.4 除痹片对AA大鼠足趾肿胀度的影响

于致炎前及给药后1、4、7、10 d(即致炎后第18、21 、24、26天)用排水法测量致炎足及对侧足的足跖体积,以致炎前和致炎后不同时间足爪容积的变化指标—肿胀度(mL)[(致炎后后足趾肿胀值-致炎前后足趾肿胀值)/致炎前后足趾肿胀值×100%]作为观察项目,分别观察除痹片对AA大鼠原发性及继发性足跖肿胀的影响。

1.5 AA大鼠的测痛试验[3]

造模前用辐射热照射右侧踝关节内侧,记录缩腿反应潜伏期(s),作为造模前基础痛阈。致炎后27 d,于末次给药后30、60、90、120及150 min时各测一次炎症部位的缩腿阈。

1.6 AA大鼠血清LPO和SOD的测定

致炎后第27天,采取动物腹腔注射戊巴比妥钠60mg/kg麻醉 ,取血 ,以3500r/min离心10 min提取血清,用分光光度计比色法测定血清SOD活性及LPO含量。

1.7 统计学方法

实验结果采用Excel统计软件分析,实验数据以均数±标准差表示,组间显著性差异采用 t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 除痹片对AA大鼠右后足跖原发性肿胀的影响

本研究结果表明,与模型组相比,除痹片中、高剂量组给药后7 d(即致炎后24 d)时,AA大鼠右足跖原发性肿胀抑制显著(P<0.01);除痹片大剂量组的抑制效果明显优于阿司匹林组,但仅第26天差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 除痹片对大鼠右后足原发性肿胀的影响( ±s)

表1 除痹片对大鼠右后足原发性肿胀的影响( ±s)

与模型组比较,＊P<0.05、＊＊P<0.01;与阿司匹林组比较,#P<0.05。

组别 n右后足肿胀度/%18 d 21 d 24 d 26 d模型组 8 67.9±12.6 71.1± 9.5 65.5±9.7 63.3±10.6阿司匹林组 8 63.0± 8.1 60.4±10.3＊ 55.6± 7.8＊＊ 45.1± 6.7＊＊除痹片大剂量组 8 65.3± 7.7 57.2± 9.3＊＊ 49.3±10.5＊＊ 36.0± 5.2＊＊#除痹片中剂量组 8 66.4± 9.4 59.6± 9.4＊ 54.7±10.6＊＊ 45.7± 9.7＊＊除痹片小剂量组 8 69.8±10.1 67.7± 9.5 59.9±7.1 52.3± 7.5＊

2.2 除痹片对AA大鼠左后足跖继发性肿胀的影响

实验数据表明,对于AA大鼠多发性关节炎足肿胀的影响,与模型组比较,除痹片中、高剂量组在给药后第4天(即致炎后第21天)差异有统计学意义(P<0.05),于第 7天(致炎后第24天)、第10天(致炎后第26天)差异最为显著(P<0.01);阿司匹林组亦有显著的抑制作用,但效果明显弱于除痹片大剂量组,且2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 除痹片对大鼠左后足继发性肿胀的影响( ±s)

表2 除痹片对大鼠左后足继发性肿胀的影响( ±s)

与模型组比较,＊P<0.05、＊＊P<0.01。

组别 n左后足继发性肿胀度/%18 d 21 d 24 d 26 d模型组 8 36.4±6.1 39.3±5.5 40.5±6.9 36.3±4.8阿司匹林组 8 37.6±4.3 33.1±5.0＊ 31.8±6.4＊ 25.7±6.5＊＊除痹片大剂量组 8 35.8±6.8 30.0±8.7＊ 25.1±6.2＊＊ 20.9±6.5＊＊除痹片中剂量组 8 37.0±5.1 30.9±8.8＊ 28.3±4.9＊＊ 25.0±5.0＊＊除痹片小剂量组 8 38.1±6.1 35.4±5.3 33.1±6.4 30.1±4.0＊

2.3 除痹片对AA大鼠痛阈的影响

致炎后大鼠痛阈明显降低,与正常大鼠比较差异有统计学意义(P<0.01)。灌胃除痹片30～150 min内,关节炎局部的缩腿阈明显提高,各阶段痛阈值与给药前AA大鼠相比差异均有统计学意义(P<0.01),表明除痹片能提高炎性疼痛模型痛阈值,对慢性炎症性疼痛有镇痛作用,在给药后30～90 min达到峰值,持续 150 min以上。见表3。

表3 除痹片对AA大鼠痛阈的影响( ±s,n=8)

表3 除痹片对AA大鼠痛阈的影响( ±s,n=8)

与致炎前比较,＊＊P<0.01;与模型组比较,##P<0.01。

组别痛阈/s致炎前 致炎后 治疗后30 min 治疗后60 min 治疗后90 min治疗后120 min治疗后150 min模型组 8.30±0.44 5.33±0.65＊＊5.30±0.61 5.41±0.50 5.29±0.41 5.42±0.22 5.21±0.47阿司匹林组 8.11±0.61 5.13±0.37＊＊8.01±0.60##7.91±0.61##7.82±0.62##7.17±0.53##6.36±0.43##除痹片大剂量组 8.20±0.54 5.14±0.56＊＊8.01±0.60##8.06±0.61##7.90±0.53##7.79±0.51##7.68±0.46##除痹片中剂量组 8.12±0.71 5.11±0.54＊＊7.85±0.62##7.96±0.58##7.79±0.55##7.67±0.53##7.44±0.50##除痹片小剂量组 8.21±0.64 5.36±0.46＊＊7.71±0.64##7.88±0.69##7.72±0.63##7.50±0.59##7.30±0.56##

2.4 除痹片对AA大鼠血清SOD及LPO的影响

模型组血清SOD活性明显降低,除痹片各剂量组和阿司匹林组AA大鼠血清SOD活性均有不同程度的提高,但仅除痹片大剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);模型组血清LPO含量升高,且除痹片各剂量组、阿司匹林组分别与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。见表4。

表4 除痹片对AA大鼠血清SOD、LPO的影响( ±s,n=8)

表4 除痹片对AA大鼠血清SOD、LPO的影响( ±s,n=8)

与正常对照组比较,＊P<0.05;与模型组比较,#P<0.05,##P<0.01。

组别 给药剂量/(mg/kg)SOD/(U/mL)LPO/(nmol/mL)正常对照组 - 97.0±21.4 7.6±1.7模型组 - 72.5±17.2 12.0±2.0＊除痹片大剂量组 800 99.1±21.1# 7.7±1.4##除痹片中剂量组 400 87.3±20.0 8.3±1.7##除痹片小剂量组 200 76.1±17.4 8.8±1.5##阿司匹林组 100 86.8±19.5 7.7±1.3##

3 讨 论

本研究采用佐剂性关节炎大鼠模型,其疼痛性质与类风湿性关节炎十分相似。本研究结果表明,灌服除痹片后AA大鼠炎症反应明显减轻,痛阈明显升高,且呈一定的剂量相关性,证明除痹片具有确切的抗炎镇痛作用。

在正常情况下,机体含有少量自由基,其产生、利用和清除保持一种动态平衡。研究[2]表明氧自由基对外周神经系统和中枢神经系统均有致痛作用,而自由基清除剂如SOD、VitE等则对此类疼痛具有较强的拮抗作用。本实验检测体内脂质过氧化物(LPO)水平,既反映了自由基产生的强度,又标志着对机体组织的损伤强度;SOD可清除来源于活性氧的自由基,保护细胞膜性结构免受自由基损伤,是代表机体内抗氧化能力的重要指标[3-7]。研究结果表明,AA大鼠体内氧自由基代谢失衡或紊乱,其血清 SOD活性降低,LPO含量增高[8-9]。灌服除痹片后,SOD活性升高,LPO含量降低,趋于正常范围,表明除痹片能提高对氧自由基的清除力,抑制炎症疼痛时自由基的过量产生和释放,起到了抗炎、镇痛的作用。而除痹片对AA大鼠的抗炎镇痛作用可能与其减少自由基对机体的损伤有关。

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