MDR1基因＋3435C／T基因型单核苷酸多态性对硼替佐咪治疗的多发性骨髓瘤预后的影响

张 伟，董 理

（1．长春市中心医院，吉林 长春130051；2．中国医科大学附属第四医院）

多发性骨髓瘤 （multiple myeloma，MM）是常见浆细胞克隆性异常增生的血液系统恶性肿瘤［1］。其临床特点是进行性的骨质破坏。临床表现骨痛、高钙血症、病理性骨折、弥漫性骨质疏松等［2］。复发病例再次化疗组与对照组治疗无统计学意义，这可能是由耐药性所引起的，可严重影响患者的生活质量和预后［3］。本文通过测序检测多发性骨髓瘤患者MDR1基因＋3435C／T的单核苷酸多态；应用Kaplan－Meier来确认 MDR1基因＋3435C／T的单核苷酸多态性对患者生存期的影响及MDR1基因＋3435C／T对硼替佐咪治疗的多发性骨髓瘤者预后的影响。

1 对象与方法

1．1 对象 长春市中心医院骨科及血液科2008至2011年经病理证实的多发性骨髓瘤标本89例。单纯手术治疗组45例，中位年龄60（40－76）岁，硼替佐咪化疗治疗组44例，中位年龄67（50－84）岁。

1．2 方法 从组织样本中提取全基因组DNA，通过PCR检测MDR1基因rs1045642序列。PCR引物： Forward：5′－CTTCGGAACGCTAAGAACAAACT－3′ 23bp； Reverse：5′－TCTGAGGTCTTCTCTCTGAAATC－3′23bp。

产物大小为：328bp［4］。PCR扩增循环参数：95℃预变性5min，接着进入循环，首先95℃变性30 s；然后按53℃复性40s；接着72℃延伸45s，循环33次后72℃延伸10min。产物通过软件Chromas处理。经测序公司测序在＋3435位点发现C／T单核苷酸基因多态性。

1．3 统计学分析

实验数据用SPSS17．0统计学处理，组间样本均数比较采用方差分析，以P＜0．05作为有无显著性差异的判断标准。通过Kaplan－Meier方法以存活时间为非独立变量，来检验当控制某一层因素后对其他研究因素不同水平的生存时间比较的影响分别进行分析，存活期的组间比较应用差异显著性log－rank检验（生存期为患者第一次手术为起始）。

2 结果

2．1 MDR1基因序列分析

肿瘤进展机制研究提示，人群中不同个体之间的基因存在差异性或多态性，可能与多种疾病的发生发展有密切的关系。在89例骨髓瘤患者中，检测MDR1基因rs1045642＋3435位点的多态性，47例患者（52．8%）为 ＋3435C／T基因型，氨基酸改变为L1145M，比有些报道要高；42例患者（47．2%）为 ＋3435T／T型。并未检测出＋3435C／C基因型，测序见表1。

表1 C／T单核甘酸多态性测序结果

2．2 MDR1＋3435C／T基因状态对多发性骨髓瘤患者生存期的影响

89例骨髓瘤患者的平均生存期为40．4月。接受手术治疗的患者（n＝45）的平均生存期为38．2月，接受硼替佐咪治疗的患者（n＝44）的平均生存期为42．8月（P＜0．05）。硼替佐咪治疗的患者预后效果较好，这与文献结果一致［5］。检测 MDR1＋3435C／T基因型患者的平均生存期为43．3月，MDR1＋3435T／T基因型患者的平均生存期为37．5月（P＝0．024）。MDR1＋3435位点C／T基因型似乎对多发性骨髓瘤患者的生存期影响更大。（各组生存期见表2）

表2 89例患者经硼替佐咪治疗与手术治疗后的生存期（月）

2．3 MDR1＋3435C／T基因状态对经硼替佐咪治疗的多发性骨髓瘤患者生存期的影响

在44例经硼替佐咪治疗的患者的样本中，有22例为MDR1＋3435C／T基因型，22例是 MDR1＋3435T／T基因型，其平均生存期分别为46．2月和39．3月（P＝0．041）。数据显示 MDR1＋3435位点CT基因型对硼替佐咪用药患者的生存期有显著的影响。（各组生存期见表2）

3 讨论

骨髓瘤是成人最常见的恶性肿瘤，是具侵袭性的肿瘤，诊断为多发性骨髓瘤的患者，平均生存期小于3年［6］。

骨髓瘤的发生和发展是一个多因素的结果，具体发病机制不完全清楚［7］，骨髓细胞向瘤细胞的转变也是一个复杂的过程。实验表明有很多基因和蛋白参与了这一过程，导致细胞周期发生变化、信号传导通路异常，从而导致细胞增殖和血管增生的异常，在骨髓瘤的发生和发展中起到一定作用［8］。

干细胞治疗是骨髓瘤最有效方法，化疗是重要的辅助治疗手段，对放疗敏感的患者，化疗也是很好的联合方法［9］。硼替佐咪虽然临床应用后反应良好［10］，同其他化疗药物一样，多发性骨髓瘤对硼替佐咪也易产生耐药性。目前研究认为CYP2C19基因和MDR1基因功能在对抗硼替佐咪耐药有一定作用［11］。本研究提示 MDR1＋3435位点C／T基因型似乎对多发性骨髓瘤患者的生存期影响更大。在44例接受硼替佐咪治疗的患者样本中，MDR1＋3435位点C／T基因型患者（n＝22）与 MDR1＋3435位点T／T基因型患者（n＝22）两组样本量相对平衡，发现两组生存期统计学有显著差异（P＝0．041）。在89例骨髓瘤患者的研究中，MDR1＋3435位点C／T基因型患者占52．8%，高于之前的研究［12］，不能排除这种高频性的表型由样本数量较少或种族差异所引起的。

在少量样本中，MDR1＋3435C／T基因型的作用效果可能不能充分显示，然而相对平衡的数据却有利于对患者生存期的分析。在小样本研究中，MDR1＋3435位点C／T基因型的影响并没有完全体现在患者的存活上。

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