逍遥散及其功效拆方对应激抑郁模型小鼠的影响

杨靖，龚锡平，刘蓉，王哲，武志强，于柳，史玉荣，曾南

抑郁症作为一种常见且发病率不断上升的精神障碍性疾病，受到全球精神卫生部门的密切关注，现今其病因、发病机制和治疗的基础与临床研究亦日益深入。逍遥散是体现“疏肝解郁”功效的经典方剂，临床已广泛应用于精神疾病的治疗，且疗效肯定。课题组前期通过“君臣佐使”拆方研究方法，以小鼠行为绝望抑郁模型为载体，发现逍遥散、柴胡、当归-白芍药对及逍遥散去归芍组均能显著缩短模型小鼠的不动时间[1]。本研究立足于“功效拆方”方法，探讨逍遥散及其方中体现不同治法的功效药组对应激抑郁模型小鼠行为学的影响，以期进一步为逍遥散组方原理的阐释提供实验依据。

1 实验材料

1.1 药物及药液制备

柴胡、当归、白芍、茯苓、白术、薄荷、生姜、炙甘草等药材均购自成都太极大药房，经本校严铸云教授鉴定符合《中国药典》2010版要求。逍遥散组成参考《方剂学》[2]所载（60 kg成人日用量）：柴胡9 g，当归9 g，白芍9 g，白术9 g，茯苓9 g、薄荷1.5 g，生姜9 g，炙甘草4.5 g。受试药物共分6个组：逍遥散组、疏肝药组（柴胡、薄荷）、养血药组（当归、白芍）、健脾药组（白术、茯苓、生姜、炙甘草）、疏肝药+健脾药组（柴胡、薄荷、白术、茯苓、生姜、炙甘草）、养血药+健脾药组（当归、白芍、白术、茯苓、生姜、炙甘草）。各组剂量均按上述所载成人（60 kg）一日用量的30倍计算，即逍遥散30 g﹒kg-1、疏肝药5.25 g﹒kg-1、养血药 9 g﹒kg-1、健脾药15.75 g﹒kg-1、疏肝药+健脾药21 g﹒kg-1、养血药+健脾药24.75 g﹒kg-1。每组药物水煎液制备方法如下：按药物组成要求分别取相应适量药材，加8倍量水浸泡30 min，加热煮沸，文火煎煮 1 h，趁热滤过；再加6倍量水，同法分别煎煮40 min及30 min；合并三次滤液，60℃条件下减压浓缩至所需浓度，药液4℃冰箱保存备用。

盐酸阿米替林（amitriptyline hydrochloride），批号039K1600，SIGMA公司，给药剂量10 mg﹒kg-1。

1.2 实验动物

ICR小鼠，雄性，体重18~22g，四川省医学科学院实验动物中心提供，合格证号为scxk（川）2008-24。

1.3 主要仪器

小鼠悬尾试验箱（40 cm×30 cm×40 cm，自制）；小鼠强迫游泳试验箱（42.5 cm×30.8 cm×18.8 cm，自制）；ZZ-6小鼠自主活动测试仪（成都泰盟科技有限公司）；LT501E 500 g/0.1g电子天平（常熟市天量仪器有限责任公司）；RE-5203旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵（巩义市予平仪器有限公司）；BS323S 320g/0.001g电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。

2 实验方法

2.1 逍遥散及其功效拆方对小鼠悬尾试验的影响

取健康雄性ICR小鼠，按体重分层随机分为8组：逍遥散组、疏肝药组、养血药组、健脾药组、疏肝药+健脾药组、养血药+健脾药组、空白对照组、阿米替林组。各组小鼠分别灌胃给予相应药物或蒸馏水，每日1次，连续7 d。末次给药1 h后，将小鼠尾端（距尾尖1.5 cm处）用透明胶带固定于悬尾箱中水平金属棒上，使其呈倒悬状态，头部离箱底约30 cm，适应2 min，观察并记录随后4 min内小鼠累计保持不动状态的时间。

2.2 逍遥散及其功效拆方对小鼠强迫游泳试验的影响

参照Elzbieta N[3]等试验方法加以改进，分组及给药方法同“2.1”。各组小鼠于实验前24 h进行15 min游泳适应训练。末次给药1 h后，将小鼠头部朝下放入自制游泳盒中（水温23～25℃，水深10 cm），适应2 min，观察并记录随后4 min内小鼠累计不动时间（小鼠在水中停止挣扎，呈漂浮状态，仅有细小的肢体运动以保持平衡）。

2.3 逍遥散及其功效拆方对小鼠自主活动的影响

分组及给药方法同“2.1”。末次给药后1 h 将小鼠放入ZZ-6小鼠自主活动测定仪中，适应2 min，观察并记录随后4 min内小鼠的平行活动次数和站立次数。

2.4 统计方法

各组数据均用x±S表示，计量资料符合正态分布且满足方差齐性者采用SPSS13.0单因素方差分析（One-Way ANOVA），不符合者采用非参数检验秩和法分析。

3 实验结果

无论小鼠悬尾试验还是小鼠强迫游泳试验均显示，逍遥散、疏肝药、养血药、疏肝药+健脾药、养血药+健脾药组能明显缩短4 min内小鼠的不动时间（P＜0.01），健脾药组则对小鼠不动时间无显著影响（P＞0.05）。所有药物组在所试剂量下对小鼠自主活动无明显影响（P＞0.05）。实验结果见表1、表2、表3。

表1 逍遥散及其功效拆方对小鼠悬尾试验的影响（ x±S）

表2 逍遥散及其功效拆方对小鼠强迫游泳试验的影响（ x±S）

表3 逍遥散及其功效拆方对小鼠自主活动的影响（ x±S）

4 讨论

复方分解研究（即拆方研究）一直是传统复方药理研究的重要内容。基于复方整体药理研究的结果，按特定组方规律对全方进行分解研究，可利于揭示复方中各组药物的配伍关系，为阐释中药复方作用原理的科学实质提供实验依据。目前常见的中药复方拆方研究方法主要有以下5类：①单味药或小药组研究[4～5]；②君臣佐使拆方[6]；③正交设计拆方[7～8]；④功效拆方[9~11]；⑤复方化学组分拆方[12]。

基于“君臣佐使”组方原则对经典方剂逍遥散抗抑郁作用的拆方研究表明，君药——柴胡在全方抗抑郁作用的发挥中具有重要地位，是体现逍遥散抗抑郁效应的重要组分[1]；进一步将逍遥散全方分解为君药、臣药、君臣药、全方去君药、全方去君臣药等小药组，发现君臣配伍（柴胡+当归、白芍）是逍遥散发挥抗抑郁作用的重要配伍形式[13]。上述研究方法均以“君臣佐使”组方理论为指导，是从中药复方的基本构成框架入手分析逍遥散抗抑郁效应的组成合理性，但并不能完全解释逍遥散抗抑郁作用的组方特点。本研究引入“功效拆方”（或称为“功效药队”）的研究模式[14]，意在确定逍遥散“疏肝解郁、养血健脾”治法与全方抗抑郁效应之间的对应关系。

中医基础理论认为，肝的生理特性为“体阴而用阳”，即肝主藏血又主疏泄，只有肝藏血功能正常，肝气条达舒畅，人体才能具有正常的生理功能。且五行之中，肝属木，脾属土，木本克土，加之病变肝木之亢，故极易引起脾土失司，正所谓“见肝之病，知肝传脾，当先实脾”。因此在治疗中医肝系统病变时常以疏肝养肝为要，兼以顾护脾胃。针对肝生理情况的特殊性，逍遥散组方的基本思路立足于“肝郁”这一中心病理环节，以柴胡、薄荷疏发郁遏之肝气，加之当归、白芍养血涵阴以补肝体助肝用，辅以白术、茯苓、生姜、炙甘草健脾除湿防止传变。疏肝、养血、健脾三种治法相辅相成，由主证到次证，由局部到全身，层次清晰，最终达到调畅情志、改善周身的作用，并因此形成疏肝、养血、健脾三组功效药组。因此，本研究所设立的拆方组别为：逍遥散（全方八味药）、疏肝药（柴胡、薄荷）、养血药（当归、白芍）、健脾药（白术、茯苓、生姜、炙甘草）、逍遥散去养血药（即疏肝药+健脾药，柴胡、薄荷、白术、茯苓、生姜、炙甘草）、逍遥散去疏肝药（即养血药+健脾药，当归、白芍、白术、茯苓、生姜、炙甘草），以期从中医治法的角度探讨逍遥散抗抑郁作用的科学内涵和功效搭配的合理性。

结果显示，逍遥散、疏肝药、养血药、逍遥散去养血药、逍遥散去疏肝药组均能显著改善应激抑郁模型小鼠的行为学指标，且在有效剂量下不影响小鼠的自主活动，而健脾药组作用不明显，由此提示疏肝药组和养血药组在逍遥散全方中扮演重要的角色，初步表明柴胡-薄荷药组所体现的疏肝治法和当归-白芍药组所体现的养血治法是逍遥散治疗抑郁症的重要治法，实验结果与“君臣佐使”拆方研究结果基本吻合。然而关于“疏肝”治法和“养血”治法抗抑郁效应的关联性、差异性及选择性等问题，有待今后更深入的研究。

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