阿莫西林脂质体的制备及质量评价

李红娇，王 玮，张卫强，杨 博

(1．郑州福源动物药业有限公司，郑州 450008;2．河南大学药学院，河南开封 475004)

脂质体是由磷脂分散在水中形成的具有双分子层的直径仅有几十纳米至数微米的超微球状粒子［1］，具有有效的控制药物释放、控制药物在组织内的分布与在血液中的清除率、药物导弹的靶向作用、提高治疗指数、减少治疗剂量和降低毒性以及对人体无毒性和无免疫抑制作用的特点［2］。目前兽药市场上以脂质体为载药系统的剂型还不是很多，因此，研究以脂质体为载药系统的剂型则有较高的科研价值和市场价值。阿莫西林(Amoxicillin)是一种半合成的耐酸广谱青霉素类抗生素，是目前最主要的兽医临床抗感染药物，其在水中微溶，在乙醇中几乎不溶，半衰期约为61．3 min。本研究以阿莫西林药物为研究对象，将阿莫西林原料药制成脂质体，以期改善阿莫西林在体内的留存时间，提高稳定性、药效，降低毒副作用，以满足临床用药和兽药新剂型发展的需求。

1 材料

1．1 仪器 RE－52AA旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂;SHZ－D(Ⅲ)循环水式真空泵，巩义市予华仪器有限责任公司;JY92－ⅡN超声波细胞粉碎机，宁波新芝生物科技股份有限公司;UV－754分光光度计，上海梭光技术有限公司;DJ－series电子天平，美国康州HZ电子科技有限公司;AB135－S电子天平，梅特勒－托利多公司;激光粒度及Zeta电位分析仪，英国Malvern公司。

1．2 试剂与药品 阿莫西林原料药(批号3081092059，珠海联邦制药股份有限公司);胆固醇(批号20110107，上海伯奥生物科技有限公司);大豆磷脂(批号20110503，上海伯奥生物科技有限公司);Sephadex G－25(批号20090322，安玛西亚中国有限公司);氢氧化钠(批号20030824，天津石英钟厂霸州市化工分厂，AR);磷酸二氢钾(批号20040804，天津市津沽工商实业公司，AR);三氯甲烷(批号20110325，天津市富宇精细化工有限公司，AR)。

2 方法

2．1 阿莫西林脂质体的制备 前期实验以大豆磷脂和胆固醇为膜材，采用薄膜分散法制备阿莫西林脂质体［3］。以包封率为指标，经正交实验L9(34)优化，得到制备的最优工艺:磷脂与胆固醇质量比为3∶1、药脂比为1∶4、水浴温度为45℃、磷酸盐缓冲液 pH 为7．4。

按最优工艺制备阿莫西林脂质体:取大豆磷脂和胆固醇，质量比为3∶1，溶于20 mL三氯甲烷中，在旋转蒸发器上45℃水浴旋转蒸发除去三氯甲烷形成均一薄膜。按药脂比1∶4称取阿莫西林原料药，溶于pH 7．4的PBS缓冲液中，水合2 h，取出，使用超声波细胞粉碎机进行探头超声4 min，得阿莫西林脂质体混悬液。葡聚糖凝胶分离除去未包封的阿莫西林，冷冻干燥得阿莫西林脂质体。

2．2 紫外分光光度法确定测定波长［4－5］取适量阿莫西林原料药溶于蒸馏水中，配成适当浓度，以蒸馏水为空白，在200～400 nm波长范围内扫描。紫外扫描表明:阿莫西林在蒸馏水溶液中的最大吸收波长为272 nm;而大豆磷脂和胆固醇在此波长处不影响阿莫西林药物的含量测定。故选择272 nm为阿莫西林的测定波长。

2．3 标准曲线绘制 取阿莫西林原料药40．0 mg，精密称定后溶于约80 mL蒸馏水中，定容至100 mL。分别取上述溶液 2．0、3．0、4．0、5．0、6．0、7．0 mL稀释至10 mL容量瓶中，分别配成浓度为80、120、160、200、240、280 μg/mL 的溶液，以水为空白对照组，于272 nm处测定其紫外吸收。以浓度(C)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，进行线性回归即得标准曲线方程:A=0．0018C+0．0974，r=0．9976。由方程可知:阿莫西林在80～280μg/mL范围内，吸光度和阿莫西林浓度呈良好的线性关系，能够用于阿莫西林脂质体包封率和载药量的测定。

3 结果

3．1 粒径及其分布 用激光粒度及Zeta电位分析仪测量粒径，粒径分布见图1。

图1 阿莫西林脂质体的粒径及其分布

从图1可以看出阿莫西林脂质体平均粒径为114．6 nm，分散系数为 0．218，峰的跨度小，说明粒径分布集中、均匀。

3．2 包封率测定 采用葡聚糖凝胶法测定包封率。称取一定量Sephadex G－25葡聚糖凝胶，煮沸2 h充分溶胀后，常法装柱(12．3 cm×1．5 cm)。准确量取制得的阿莫西林脂质体混悬液，在Sephadex G－25柱上洗脱，洗脱速度为0．1 mL/min，每次收集流出液1．0mL(共20mL)，然后将每次收集的液体稀释至4．0 mL，测定其吸光度。绘制出洗脱曲线(图2)。

图2 阿莫西林脂质体洗脱曲线

另收集洗脱曲线中第4～9 mL的洗脱液，用甲醇定容，超声振荡后测定其吸光度，代入标准曲线方程计算得出脂质体中包封的药物量。同理可测得脂质体中未包封的药物量。按公式计算包封率:

制得脂质体样品的包封率为(64．89±3．14)%(n=3)，具有良好的重现性和较高的包封率。

4 讨论

4．1 利用正交试验对薄膜法制备阿莫西林脂质体的工艺进行优化，重点考察了大豆磷脂与胆固醇比、药脂比、水浴温度、PBS缓冲液pH等因素对包封率的影响。影响的大小顺序为:PBS缓冲液pH＞药脂比＞磷脂与胆固醇之比＞水浴温度。利用优化工艺制得的阿莫西林脂质体包封率较高、粒径集中均匀，达到了研究的预期目标，发展了兽药脂质体新剂型。

4．2 脂质体的包封率测定方法很多，主要有凝胶过滤法、透析法、超速离心法、超滤法及离子交换法等，其中以葡聚糖凝胶法较为常用。由于阿莫西林微溶于水，脂质体中未包封的阿莫西林以微粒形式存在，超速离心法和超滤法在超速离心过程中使未包封药物和脂质体同时沉淀出来，无法分离。若用透析法进行测定，长时间透析会使脂质体中的阿莫西林渗漏出来，影响其测定。采用葡聚糖凝胶柱分离未包封药物和脂质体来测定其包封率时，由葡聚糖凝胶柱的分离性质及洗脱曲线可知，在第4到9秒内的吸收峰为包封较完整的脂质体中的药物，第二个吸收峰为脂质体中未包封的药物。从测得的洗脱曲线中可以得知，阿莫西林脂质体和未包封药物分离较好，包封率测定较准确。

4．3 阿莫西林为脂溶性药物，但不溶于三氯甲烷，微溶于水，易溶于呈酸碱性的溶液。因此采用薄膜分散法制备时将阿莫西林原料药溶于缓冲液中制备脂质体。制备的关键是类脂溶液形成均一薄膜后，加入PBS缓冲液溶解、分散阿莫西林原料药，使之充分水合，使所制脂质体有较高的包封率，且包封药物不易从脂质体中渗漏。这对于研究具有类似性质的难溶性药物脂质体的制备具有一定意义。研究中对所制备的脂质体进行了粒径的大小和分布、包封率等的质量评价，制备的脂质体粒径已达到纳米级，这将有助于改善阿莫西林脂质体在体内的分布、提高其疗效。

［1］ 黄易昆．脂质体作为药物载体研究进展［J］．中国药师，2005，8(7):549－550．

［2］ 李祖惠，杨 辉．脂质体药物研究进展［J］．中国药业，2005，14(10):75－76．

［3］ 孙庆雪，黄桂华，绍 伟．褪黑素脂质体的制备及理化性质研究［J］．山东大学学报(医学版)，2010，48(1):159 －163．

［4］ 杨 静，李 妍，胡 旭，等．不同厂家的阿莫西林胶囊实时溶出度考察［J］．解放军药学学报，2009，6(25):549 －550．

［5］ 李铁玉，李桂兰，钟 啸．阿莫西林分散片的制备及性质考察［J］．吉林医学，2008，23(29):2158 －2160．