1000例妇女宫颈人乳头瘤病毒基因分型检测结果分析

吴夏枫，喻 晶，刘晓翌，张银汉

（北京大学深圳医院 检验科，广东 深圳518036）

宫颈癌是威胁全球女性健康最为严重的疾病之一，是全球女性最常见的第3位肿瘤，而且78%发生在发展中国家，为仅次于乳腺癌的女性第2位高发恶性肿瘤。许多研究表明，人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）与子宫颈癌的发生密切相关，已发现至少120种不同的HPV亚型，其中约50余种亚型可感染生殖器官，是宫颈癌的主要致病因子，特别是高危亚型是女性子宫颈癌发生的直接原因［1，2］。文献表明，HPV亚型分布存在明显的地区差异和种族差异。因此对本地区HPV亚型感染进行详细调查对宫颈癌早期预防和早期治疗具有重要意义。为探讨本地区妇女感染HPV及HPV亚型的分布情况，我们对1000名妇女进行HPV基因分型检测，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1．1 研究对象

选择2011年1月份－2011年8月份在本院妇科门诊检查的妇女，共1000名。患者年龄范围18－65岁，有性生活史，排除细菌性、霉菌性以及滴虫性阴道炎。取材时要求月经干净期，48小时内无性生活史，白带清洁度检查正常。

1．2 研究方法

1．2．1 HPV标本采集 行常规妇科检查，先用窥阴器暴露宫颈，干棉签擦拭干净子宫颈口分泌物，取宫颈刷置于宫颈口内2－3cm，顺时针旋转5圈，获颈管脱落细胞，存于装有细胞保存液的洗脱管。做好样本标识，－20℃保存，一周内完成检测。

1．2．2 主要仪器与试剂 仪器：基因扩增仪为德国Eppendorf 5331，杂交箱为英国 Unitherm。试剂：HPV基因分型检测试剂盒由深圳亚能生物技术有限公司提供，可同时检测23种HPV病毒亚型。包括18种高危亚型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4；5种低危亚型：6、11、42、43、44。

1．2．3 HPV DNA 提取 充分洗脱宫颈刷，取1 ml洗脱液转移到1．5ml离心管中，13 000rpm离心10min，弃上清液。加入50μl裂解液悬浮沉淀，沸水浴加热10min。13 000rpm离心10min，保留上清液待用。

1．2．4 PCR扩增 取出PCR反应管，在管盖上做好标记，分别加入已提取待测样品5μl。加样结束后把PCR反应管放置扩增仪中进行扩增。

1．2．5 分析结果 把已扩增的PCR产物按照说明书进行杂交，洗膜，显色、膜条扫描和保存、读取结果。

结果判定：实验结果有效的前提是每张膜条在质控点（PC）必须出现蓝色显色信号。除PC质控点外，膜条上各检测位点有蓝色显色位点即提示感染相对应基因型的HPV，包括单一感染和混合性感染；检测位点没信号，说明未感染膜条上包括的23种基因型HPV。

2 结果

2．1 HPV基因型分布情况

受检1000例标本中检测HPV阳性标本为245例，阳性率为24．5%。23种基因亚型中共检测出20种，未检出基因型为44、83和MM4。在245例阳性标本中共计278株HPV基因亚型（包括多重感染的重复计算），其中低危亚型组85株（30．57%），高危亚型组193株（69．42%）。低危亚型 组 主 要 以 HPV6 型 （9．71%）、HPV11 型（8．63%）、HPV43型（7．19%）为主；高危亚型组则以 HPV16 型 （16．19%）、HPV52 型 （11．87%）、HPV58型（10．43%）、HPV66型（9．35%）为主，结果见表1。HPV阳性者中，单一基因亚型阳性标本167例，占16．7%，多重基因亚型阳性标本78例，占7．8%，其中包括两项基因亚型阳性52例（5．2%），三项基因亚型阳性19例（1．9%），四项基因亚型阳性7例（0．7%）。

根据年龄将患者分为≤26岁、26－35岁、36－45岁、46－55岁和56－65岁5个年龄组。各年龄组HPV感染率分别为19．72%、19．55%、27．85%、26．69%和31．91%。各年龄组HPV感染率差异不存在统计学意义（χ2＝8．90，P＞0．05）。结果见表2。

表1 HPV基因亚型分布（株数）

表2 不同年龄患者HPV感染阳性率

3 讨论

在1987年，ZHr Hausen［3］首先提出人乳头瘤病毒感染与宫颈癌发病相关的假设之后，经国内外学者20余年的研究，现已明确HPV感染是宫颈癌的直接病因和发病的必要条件，并且HPV的感染是宫颈癌的相对危险性增加250倍。

本研究采用反向斑点杂交法对1000例女性进行HPV亚型检测，总感染率为24．5%。据研究资料，湘潭地区感染率为21．79%，沈阳地区为17．0%，杭州为27．8%，本研究的结果与报道有所不同，可能与HPV地域性差异、受检人群的不同和采用HPV检测方法不同相关［4－6］。研究认为，目前世界最常见的HPV基因型是HPV16，其他常见基因亚型存在地域差异。欧洲的主要分布型别以HPV16、31、18为主，南美地区的以 HPV16、58、18为主，亚洲地区为 HPV16、18、33［7］。从国内的统计资料来看，除HPV16型感染率最高之外，其他常见亚型在各地区分布还是略有差异，山西省为HPV58、52型，沈阳地区为 HPV52、58型，潍坊地区为HPV58、33型。本研究结果显示，HPV16、52、58型为主要的感染型别，与无锡地区、湘潭地区等的报道一致，与重庆地区 HPV16、58、52有所差别［8］。这种差别既提示HPV亚型分布具有一定的人群和区域特点，也提示不同检测方法所覆盖的HPV检查型别有差异。

HPV感染率具有年龄分布特点，Smith J S认为≤25岁是女性HPV感染的高峰期，随年龄的增加，感染率有所下降；中年妇女（35－50岁）感染率的高低具有地域性；老年妇女感染率存在不同趋势［9］。文献报道，大多数感染呈一过性，感染几率可高达25%－29%，年轻妇女机体免疫功能强，约60%－70%可在一年内消失，两年内约90%可清除感染，35岁后感染几率从5%－10%转为持续性感染状态［10］。本研究结果显示，≤35岁感染率接近20%，且随着患者年龄增加，感染率呈逐渐上升趋势。这可能与患者个人性行为、卫生习惯，不重视早期症状，健康意识缺乏等有关。而56－65岁年龄段的感染率高达31．91%，原因可能是更年期女性绝经期体内雌激素水平下降和机体免疫力降低，还有可能与老年妇女生活习惯改变，引起的持续感染和反复感染。

总之，HPV感染的基因型别和年龄分布在在地区及人群间差异较大，且和人生活习惯，性行为方式密切相关。因此，做好HPV基因亚型检测，才能早期发现，早期诊断，早期干预宫颈细胞癌前病变，从而有效语法宫颈癌的发生，降低宫颈癌的死亡率。

［1］Walhoomers JMM，Jacobs MV，Manos MM，et al．Human papillomavirus is a necessary cause of invasive cervical cancer worldwide［J］．J Pathol，1999，189（1）：12．

［2］Bosch FX，Manos MM，Munoz N，et al．Prevalence of human papillomavirus in cervical cancer：a worldwide perspective：International Biological Study on Cervical Cancer（IBSCC）Study Group［J］．J Natl Cancer Inst，1995，87（11）：796．

［3］zur Hausen H．Papilloma virus and cancer：from basic studies to clinical application［J］．Nat Rev Cancer，2002，2：342．

［4］张咏梅，周 晶，龚志红．湘潭地区HPV感染及不同亚型分布［J］．中国现代医生，2010，34：108．

［5］张 新，王纯雁，石菊芳，等．沈阳市妇女人乳头瘤病毒感染型别分布的研究［J］．中华流行病学杂志，2007，28（10）：954．

［6］李 伟，范超明，陈 军，等．杭州地区女性人乳头瘤病毒各亚型感染情况的研究［J］．中国卫生检验杂志，2009，19（12）：2896．

［7］CliffordGM，Gallus S，HerreroR，et al．Worldwide distribution of human papillomavirus types in cytologically normal women in the International Agency for Research on Cancer HPV prevalence surveys：apooled analysis［J］．Lancet，2005，366（9490）：991．

［8］夏吉荣，杨双双，祝佳丽，等．重庆地区妇女人乳头瘤病毒感染的调查分析［J］．重庆医学，2012，41（9）：892．

［9］Smith J S，Melendy A，Rana R K，et al．Age－specific prevalence of infection with human papillomavirus in females：A global review［J］．J Adolesc Health，2008，43（4）：S5．

［10］赵 蓉，张为远，张淞文，等．2006－2008年北京地区25－54岁育龄妇女HPV亚型感染状况的调查［J］．中华妇产科杂志，2011，46（3）：184．