保肝复功丸水煎剂对大鼠急性肝损伤防护作用机制的研究

许 丹 于红刚 金战勇 吴洪斌

1.武汉大学人民医院消化内科 (湖北武汉，430060) 2.武汉市中医医院脾胃病科

保肝复功丸是武汉市中医医院名老中医研制的验方，临床研究发现具有护肝、改善肝功能作用。为探讨其作用机制，又采用脂多糖 (LPS)诱导大鼠急性肝损伤的动物模型，对其进行了实验研究。

1 材料与方法

1.1 动物 清洁级Wistar雄性大鼠 (180～200g)，购自武汉大学医学院实验动物中心。

1.2 药物和试剂 黄芪20g，山药、枸杞、当归、丹参、芍药、沙参、桑椹子、麦冬各15g，柴胡、红花、生地、熟地、山茱萸、五味子、山楂、刺蒺藜、郁金、木香各10g，川楝子8g，加水1500ml，浸泡30分钟，煮沸15分钟，蒸馏，制作不同浓度保肝复功丸水煎剂。试剂:脂多糖 (Lipoplysaccharides，LPS):L2880 E.colio55∶B5，美国Sigma公司;ALT、AST、SOD、MDA、GSH-Px测定试剂盒均购自武汉博士德生物有限公司。

1.3 造模和给药方法 将大鼠适应性喂养1天，按体重随机分为5组:空白组、模型组、保肝复功丸低剂量组、保肝复功丸中剂量组、保肝复功丸高剂量组，每组10只。除空白组外，其余动物腹腔注射LPS 10 mg/kg造模。造模后大鼠常规喂养，自由饮水，饲养室光照10小时，黑暗14小时，温度21～25℃，湿度30% ～70%。造模成功后，空白组及模型组均给予10 ml/kg体积蒸馏水灌胃;保肝复功丸低、中、高剂量组分别于灌胃保肝复功丸415 g/kg、910g/kg、1804 g/kg浓度煎液，1次/d，连续12天。

1.4 血清ALT、AST及肝脏指数测定 全血离心后，取上清液，按照试剂盒说明书进行测定。肝脏指数=肝脏湿重/体重×100%。

1.5 肝脏MDA、SOD、GSH-Px的测定 取肝脏0.2～0.4g，加冷生理盐水9倍，匀浆，离心后去上清液，按试剂盒说明书进行测定。

1.6 统计学方法 采用SPSS 13.0软件进行数据处理，实验数据间均采用(±s)表示，多组间数据比较采用方差分析，两组间数据比较采用t检验，P＜0.05被认为有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠肝脏指数及血清ALT、AST水平检测结果 见表1。

表1 各组大鼠ALT、AST及肝脏指数比较(±s)

表1 各组大鼠ALT、AST及肝脏指数比较(±s)

与空白组比较，*P＜0.05;与模型组比较，#P＜0.05

组别 n ALT(U/L) AST(U/L) 肝脏指数 (%)10 65.38±8.47 217.75±11.00 4.79±1.06模型组 10 703.37±64.2* 837.88±71.45* 6.16±0.78*小剂量组 10 346.20±67.27# 556.88±52.92# 5.74±0.54#中剂量组 10 123.75±30.26# 284.62±25.18# 5.64±0.87#大剂量组 10 79.63±13.45# 209.14±8.43# 5.38±0.58空白组#

2.2 各组大鼠肝组织中MDA、SOD、GSH-PX的检测结果见表2。

表2 各组大鼠肝匀浆中SOD、MDA和GSH-PX的结果比较(x¯±s)

2.3 各组大鼠肝病理组织学观察结果 光镜下空白组大鼠肝小叶结构正常，肝细胞排列整齐，形态正常，结构清晰;模型组大鼠肝细胞存在大量点状及炎性细胞浸润，坏死、小灶性坏死及灶性纤维化，肝细胞索排列紊乱;各治疗组大鼠与模型组大鼠相比肝细胞索排列相对整齐、坏死灶明显减少，炎性细胞浸润显著减少。

3 讨论

LPS是革兰氏阴性细菌细胞壁外膜内毒素的主要成分，由亲水性的多糖O抗原、特异性核心多糖和疏水的类脂A组成。类脂A是革兰氏阴性细菌内毒素的毒性成分，可引起革兰氏阴性细菌激发宿主免疫应答、导致机体损伤［1］。

MDA是自由基攻击生物膜中的不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应的最终产物，其含量的多少可间接反映机体细胞受氧自由基攻击的严重程度［2］。SOD主要作用是催化超氧阴离子的歧化反应，抑制自由基启动的脂质过氧化反应，对机体的氧化与抗氧化平衡起着重要作用，它可减少自由基的产生，降低脂质过氧化物的生成，减轻肝细胞的损伤［3］。GSH-Px是一重要的催化过氧化物分解的酶类，它可以催化过氧化氢和脂质过氧化物的还原。GSH是细胞合成的一种非酶性抗氧化剂，在细胞内起抗氧化作用，是SOD、GSH-Px等酶类的供氢体。GSH保护细胞膜中含巯基的蛋白质和含巯基的酶不被破坏，同时还可对抗自由基对重要脏器的损害，在活体细胞抗氧化中起重要保护作用［4，5］。

血清和肝组织中的ALT活性主要反映肝细胞损伤，AST可反映线粒体的受损程度;肝脏指数是肝脏质量与体质量之比，在一定程度上反映肝脏炎性反应的强度及肿胀程度。

研究表明，黄芪的有效成份之一黄芪多糖具有明确的抗氧化作用［6］，能提高血SOD、过氧化氢酶 (CAT)及GSH-Px活力，降低血浆、脑匀浆及肝匀浆中LPO水平;丹参的水溶性成分丹参酸乙能够直接保护细胞膜，对肝细胞损伤具有防护作用［7］;当归提取物 (ELCAS)能通过增强抗氧化能力，激活ERK信号传导途径，保护内皮细胞免受氧自由基的损伤［8］;郁金具有保护肝细胞、促进肝细胞再生、抗癌、抗菌、抗氧化的作用［9］。本实验结果表明，保肝复功丸可显著降低ALT、AST水平;病理结果也表明保肝复功丸可减轻肝组织炎症反应，促进损伤肝组织的修复。并且在不同剂量的保肝复功丸之间存在着一定的量效关系。可显著升高模型大鼠肝匀浆中SOD活性和GSH-Px水平，并降低模型大鼠肝匀浆中MDA的含量。提示保肝复功丸对LPS诱导的急性肝损伤具有一定的防护作用，其机制可能与其减少自由基生成，抑制脂质过氧化，减少过氧化脂质的形成，增强机体抗氧化能力有关。

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