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痔疮止血丸质量标准研究

2013-09-27汝秋明韩润淑

中国现代中药 2013年6期
关键词:荆芥芦丁薄层

汝秋明,韩润淑

(1.吉林省食品药品检验所,吉林 长春 130033;2.永吉县食品药品监督管理局,吉林 永吉 132000)

痔疮止血丸质量标准研究

汝秋明1*,韩润淑2

(1.吉林省食品药品检验所,吉林 长春 130033;2.永吉县食品药品监督管理局,吉林 永吉 132000)

目的:建立痔疮止血丸的质量标准。方法:采用TLC鉴别处方中的地榆、陈皮和荆芥。用HPLC测定槐花中芦丁的含量。用DiamonsilTM(钻石)C18色谱柱,流动相为乙腈-1%冰醋酸溶液(20∶80),流速为1 mL·min-1,检测波长为257 nm,柱温为30 ℃。结果:TLC鉴别色谱特征斑点明显。芦丁进样量在0.130 9~1.9741 μg与峰面积呈良好的线性关系。平均回收率为99.8%,RSD=0.9%(n=6)。结论:所建立的TLC和HPLC方法专属性强,重复性好,可用于痔疮止血丸的质量控制。

痔疮止血丸;TLC;HPLC;地榆;陈皮;荆芥

痔疮止血丸收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》第十册,由槐花、荆芥、陈皮、地榆等6味中药组成的复方制剂,具有清热解毒,渗湿利尿功效,用于肾盂肾炎和急慢性尿路感染治疗。原质量标准中只有定性鉴别项目,我们通过研究,在痔疮止血丸质量标准中增加了荆芥、陈皮、地榆的TLC鉴别和槐花的含量测定项,为该制剂的质量控制提供了可靠的方法。

1 仪器与试药

日本岛津LC-2010C高效相色谱仪;日本岛津UV-2201紫外-可见分光光度计;ZF-I紫外光灯。预制硅胶G薄层板、预制硅胶GF254薄层板、预制硅胶H薄层板(薄层层析用,青岛海洋化工集团)。

没食子酸对照品、橙皮苷对照品及荆芥对照药材、芦丁对照品(批号:100080-200306,供含量测定用),均购自中国食品药品检定研究院。痔疮止血丸(吉林长源药业有限公司,批号:20070201,20050501,20061001)。乙腈为色谱纯,水为纯化水,其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 地榆的鉴别 取本品60粒,剪碎,加硅藻土3 g研匀,加水50 mL,煮沸30 min,放冷,离心,取上清液,用盐酸饱和的乙醚15 mL振摇提取,分取乙醚层,挥干,加甲醇约1 mL使溶解,作为供试品溶液。另取没食子酸对照品适量,加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液,作为对照品溶液。按处方比例及生产工艺制备缺地榆阴性样品,并按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述3种溶液各5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(6∶3∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%三氯化铁乙醇溶液[1-3]。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,且阴性对照无干扰,见图1。

1.没食子酸对照品;2~4.样品;5.阴性对照品图1 地榆薄层色谱图

2.1.2 陈皮的鉴别 取本品剪碎,称取3 g,加硅藻土2 g研匀,加50%甲醇30 mL,加热回流1 h,滤过,滤液浓缩至约1 mL,作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品适量,加甲醇制成饱和溶液,作为对照品溶液。按处方比例及生产工艺制备缺陈皮阴性样品,并按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述3种溶液各2 μL,分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以三氯化铝试液[4-7],置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,且阴性对照无干扰,见图2。

1.橙皮苷对照品;2~4.样品;5.阴性对照品图2 陈皮薄层色谱图

2.1.3 荆芥的鉴别 取本品剪碎,称取1 g,加硅藻土0.7 g,加石油醚(60~90 ℃)20 mL,密塞,时时振摇,放置过夜,滤过,滤液浓缩至约1 mL,作为供试品溶液。另取荆芥对照药材0.8 g,同法制成对照药材溶液。按处方比例及生产工艺制备缺荆芥阴性样品,并按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液,照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述3种溶液各10 μL,分别点于同一硅胶H薄层板上,以石油醚(60~90 ℃)-乙酸乙酯(17∶3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛的5%硫酸乙醇溶液,在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,且阴性对照无干扰,见图3。

1~3.样品;4.荆芥对照药材;5.阴性图3 荆芥薄层色谱图

2.2 槐花含量测定

2.2.1 色谱条件 采用迪马-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;柱温:30 ℃;流速:1 mL·min-1;流动相:乙腈-1%冰醋酸溶液(20∶80);检测波长257 nm;进样量:10 μL;理论板数按芦丁峰计应不低于4 000[8]。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取120 ℃减压干燥至恒重的芦丁对照品适量,加甲醇制成每1 mL中含0.1 mg的溶液,即得,见图4。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品,剪碎,取适量,精密称定,精密加入等量的硅藻土,研匀,精密称取约1 g,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50 mL,称定重量,放置过夜,超声处理(功率250 W,33 kHz)40 min,放冷,称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液即得,见图5。

2.2.4 阴性对照试验 按处方比例取相当于0.5 g中所含群药适量(不含槐花),按工艺制备缺槐花阴性对照品,再按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液,量取10 μL注入液相色谱仪,按上述方法测定,结果表明阴性对照的色谱图在芦丁相应的保留时间处无干扰峰,见图6。

2.2.5 线性关系考察 精密称取芦丁对照品20 mg,置200 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液,精密量取1,3,5,7,9,11,13,15,17,19 μL分别注入液相色谱仪,以进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程Y=1 797 716X+1.460,r=1.000,结果表明芦丁进样量在0.130 9~1.974 1 μg与峰面积呈良好的线性关系。

图4 芦丁对照品HPLC图

图5 痔疮止血丸供试品HPLC图

图6 阴性对照品HPLC图

2.2.6 精密度试验 取同一对照品溶液,照上述色谱条件,连续进样6次,每次10 μL,记录峰面积,结果RSD=0.6%。

2.2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液,按上述色谱条件,分别在0,4,8,12,24 h进样,记录峰面积,结果RSD=0.8%,表明24 h内供试品溶液中芦丁的含量基本稳定。

2.2.8 重现性试验 取本品(批号:20070201),照2.2.3方法制备6份样品测定,计算含量,结果平均含量为9.790 mg·g-1,RSD=1.2%。

2.2.9 回收率试验 取本品(批号:20070201,含量为9.790 mg·g-1),剪碎,取适量,精密称定,精密加入等量的硅藻土,研匀,精密称取约0.5 g,精密加入芦丁对照品溶液(0.103 9 mg·mL-1)25 mL,70%甲醇25 mL,照上述方法测定,计算回收率,结果见表1。

2.2.10 样品含量测定 按上述方法测定3批样品(20070201,20050501,20061001)含量,结果芦丁含量分别为9.790,6.308,4.494 mg·g-1。

表1 芦丁对照品回收率试验

3 讨论

3.1 展开剂的选择

地榆鉴别试验参考《中国药典》2010年版一部“地榆”项下【鉴别】(2)的方法[9],由于原展开剂Rf值小,将用水饱和的甲苯改为甲苯,Rf适中。

3.2 测定波长的选择

取芦丁对照品的70%甲醇溶液,经UV-2201紫外-可见分光光度计在220~300 nm的波长范围内进行扫描,确定芦丁在257 nm波长处有最大吸收,故选择257 nm为本实验的测定波长。

3.3 流动相的选择

参照《中国药典》2010年版一部槐花药材含量测定项下的流动相,即甲醇-1%冰醋酸溶液(32∶68)[10],但本品用此流动相分离效果不好,而改为乙腈-1%冰醋酸溶液(20∶80)。

3.4 提取方法的考察

供试品溶液分别超声30,40,60 min,计算芦丁含量分别为8.493,9.890,9.871 mg·g-1。说明超声40 min,基本能使样品提取完全,因此采用上述供试品溶液的制备方法。

3.5 方法评价

实验建立的TLC和HPLC方法专属性强,重复性好,可用于痔疮止血丸的质量控制。

[1] 曾聪彦,梅全喜,高玉桥,等.槐榆片的薄层鉴别[J].山西中医学院学报,2006,8(5):46-47.

[2] 谭朝阳,谭智艳,罗怀浩,等.痔炎消胶囊质量标准研究[J].中国实验方剂学杂志,2009,15(4):20-22.

[3] 陈哲妮,黄婉峰.地榆炭配方颗粒的质量控制研究[J].现代中药研究与实践,2012,26(2):66-68.

[4] 王少妹,罗杰,何军,等.复方陈香胃片质量标准研究[J].中国现代中药,2007,9(1):20-22.

[5] 金阳.健脾颗粒质量标准研究[J].中成药,2007,29(9):1403-1405.

[6] 何建峰,刘红,余卫兵,等.小儿至宝丸中陈皮、人工牛黄及广藿香的薄层色谱鉴别[J].中国药业,2010,19(17):34.

[7] 姜泽,李东飞,姚为民,等.补金片质量标准研究[J].中国现代中药,2011,13(4):37-40.

[8] 翟旭峰,刘法锦,王怀豫,等.槐花配方颗粒质量标准研究[J].中成药,2004,27(12):29-31.

[9] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:中国医药科技出版社,2010:117.

[10] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:中国医药科技出版社,2010:333.

QualityStandardofZhichuangZhixueWan

RU Qiu-ming1*,HAN Run-shu2

(1.JinlinProvicialInstituteforFoodandDrungControl,Changchun130033,China) (2.YongjiFoodandDrungofAdministration,Yongji132000,China)

Objective:To establish the quality standard of Zhichuang Zhixue Wan.Methods:Sanguisorbae Radix,Citri Reticulate Pericarpium and Schizonepetae Herba were identified by TLC.The content of rutin in Sophorae Flos was determined by HPLC.The Diamonsil C18column(250 mm×4.6 mm,5 μm)was used,the mobile phase was acetonitrile-0.1% glacial acetic acid(20∶80),the flow rate was 1 mL·min-1and detection wavelength was 257 nm,column temperature 30 ℃.Results:The developed TLC spots were quite clear.The linear range of rutin was 0.130 9~1.974 1 μg,the average recovery was 99.8%,RSD=0.9%(n=6).Conclusion:The established TLC and HPLC methods are exclusive,reproducible and suitable for the quality control of Zhichuang Zhixue Wan.

Zhichuang Zhixue Wan;TLC;HPLC;Sanguisorbae Radix;Citri Reticulate Pericarpium;Schizonepetae Herba

2012-10-24)

*

汝秋明,E-mail:rqiuming@sina.cn

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