复方景葛胶囊的质量标准研究

郝云芳，张潞，倪艳，李先荣

(山西省中医药研究院，山西 太原 030012)

复方景葛胶囊的质量标准研究

郝云芳，张潞，倪艳，李先荣*

(山西省中医药研究院，山西 太原 030012)

目的：建立复方景葛胶囊的质量标准。方法：采用薄层色谱法(TLC)对处方中红景天、刺五加进行定性鉴别，采用紫外可见分光光度法(UV-Vis)对制剂中的总皂苷进行含量测定，采用高效液相色谱法(HPLC)对制剂中的葛根素进行定量测定。结果：TLC能定性检出红景天、刺五加，斑点清晰，且阴性对照无干扰；UV-Vis法测定每100 g复方景葛胶囊中总皂苷的含量为20.897 g(n=3)；HPLC法测定葛根素含量在0.0796～1.592 μg线性良好，r=0.999 9；平均加样回收率为99.39%，RSD=1.54%。结论：所建立的定性、定量检测方法操作简便、结果准确可靠、重现性好，能有效地控制复方景葛胶囊的质量。

复方景葛胶囊；质量标准；薄层色谱法；紫外可见分光光度法；高效液相色谱法

复方景葛胶囊是正在研究的中药复方制剂，由刺五加、葛根、红景天等中药组成，具有缓解体力疲劳、提高缺氧耐受力、增强免疫力的功效[1]。根据药物性质和应用特点，将其研制成胶囊剂并采用HPLC测定其有效成分含量，进行质量控制。方中君药刺五加具有益气健脾，补肾安神的功能，其主要标志性成分为总皂苷；臣药葛根具有解肌退热，生津止渴，透疹，升阳止泻，通经活络，解酒毒的功能，其主要标志性成分为葛根素；红景天具有益气活血，通脉平喘功能，其主要标志性成分为红景天苷或总皂苷[2]，与方中其他药味合为佐使。

为了方便、快速地检测复方景葛胶囊的质量，作者采用TLC对方中红景天、刺五加进行了定性鉴别，并建立了总皂苷和葛根素的含量测定方法。

1 仪器与试药

Agilent高效液相色谱仪，Agilent化学工作站；TU-1901型双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；KQ3200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；BP211D型电子天平(德国赛多利斯)；SE202F型电子天平(奥豪斯仪器有限公司)。

葛根素对照品(批号：110752-200912，供含量测定用)、芦丁对照品(批号：100080-200707，供含量测定用)、人参皂苷Re对照品(批号：110754-201123，供含量测定用)、红景天对照药材(批号：120304)、刺五加对照药材(批号：120703)均购自中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯(天津市四友精细化学品有限公司)，水为去离子水，其余试剂均为分析纯。复方景葛胶囊(自制，批号：1207073，1206100，1204096)。

2 薄层色谱鉴别

2.1 红景天[3]

取3个批次复方景葛胶囊各1份，每份1 g，置具塞锥形瓶中，分别加甲醇20 mL，超声处理30 min，放冷，滤过，用少量甲醇分次洗涤容器及残渣，洗液与滤液合并，挥干，残渣加水20 mL溶解，置分液漏斗中，加石油醚(60～90 ℃)振摇提取3次，每次20 mL，弃去石油醚液，水层加乙酸乙酯振摇提取3次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，挥干，残渣加甲醇5 mL使溶解，置氧化铝柱(中性氧化铝5 g，用水湿法装柱，加15 mL水预洗)上，加70%甲醇30 mL洗脱，收集洗脱液，挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，离心，取上清液，作为供试品液。

另取红景天对照药材1 g、缺红景天阴性制剂1 g，按上述供试品处理方法得对照药材溶液、阴性对照液。再取红景天苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录ⅥB)试验，分别吸取上述6份溶液5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(6∶3∶1∶1)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应位置上，显相同的黄色斑点；而阴性制剂在相同位置无此斑点存在。薄层鉴别色谱图见图1。

1～3.复方景葛胶囊；4.红景天对照药材；5.红景天苷对照品；6.缺红景天阴性对照品图1 红景天TLC图

2.2 刺五加

取3个批次复方景葛胶囊各1份，每份5 g，按《中国药典》2010版一部刺五加鉴别项下内容处理[4]，得3份供试品溶液。另取刺五加对照药材5 g，同法制成对照药材溶液。再取缺刺五加阴性制剂5 g，同法制成阴性药材试液。按照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录ⅥB)试验，吸取上述5份溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(19∶1∶0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在于对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；而阴性制剂在相同位置无此斑点存在。薄层鉴别色谱图见图2。

1～3.复方景葛胶囊；4.刺五加对照药材；5.缺刺五加阴性对照品图2 刺五加TLC图

3 总皂苷的含量测定[5]

3.1 试样处理

将本品研细，取约0.5 g，精密称定，置100 mL容量瓶中，加少量水，超声处理30 min，再用水定容至100 mL，摇匀放置，吸取上清液1.0 mL，进行柱层析。

3.2 柱层析

层析柱(15 mm×200 mm)，内装3 g D-101净品型大孔吸附树脂，上加1 g中性氧化铝，先用25 mL浓度为70%乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25 mL水洗柱，弃去洗脱液；精确加入1.0 mL已处理好的试样溶液，用25 mL水洗柱，弃去洗脱液；再用25 mL浓度为70%乙醇洗脱总皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，置于60 ℃水浴蒸干，以此作显色用。

3.3 显色

在上述已挥干的蒸发皿中准确加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL，转动蒸发皿，使残渣全部溶解，再加0.8 mL高氯酸，混匀后，移入试管中，60 ℃水浴上加热10 min，取出，冰浴冷却后，准确加入冰醋酸5.0 mL，摇匀后，以1 cm比色皿中于560 nm处与标准管一起进行比色测定。

3.4 标准管

吸取人参皂苷Re对照品溶液(0.99 mg·mL-1)200 μL，从“柱层析…”起与试样相同操作，测定吸光度值。

3.5 计算

以人参皂苷Re为基准计算复方景葛胶囊中总皂苷的含量。经计算，测得每100 g复方景葛胶囊中总皂苷的含量为20.897 g(n=3)。

4 葛根素的含量测定[5]

4.1 色谱条件

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水 (25∶75)；流速：1.0 mL·min-1；测定波长：250 nm；柱温：室温；理论塔板数按葛根素峰计算不低于2 000。

4.2 供试品溶液的制备

取本品内容物，研细，取约0.5 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇50 mL，称定重量，超声处理30 min(250 W，50 kHz)，取出放冷，补足减失的重量，0.45 μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。

4.3 阴性制剂溶液的制备

按全方比例称取缺葛根的其他中药，按制剂工艺制备成粉末，取约0.5 g，精密称定，其余步骤同供试品溶液的制备方法。

4.4 线性关系的考察

精密称取葛根素对照品，加30%乙醇制成每1 mL 含79.6 μg的溶液，分别精密吸取1，2，5，10，15，20 μL进样，依法测定，以葛根素含量(μg)为横坐标(X)，峰面积积分值(A)为纵坐标(Y)绘制标准曲线，得回归方程：Y=4.231 4X-38.844，(r=0.999 9)，因此在0.079 6～1.592 μg具有良好的线性关系。

4.5 稳定性试验

取同一批样品(批号：1207073)，按供试品溶液的制备方法制备，每隔2 h测定1次，共测6次，结果表明，供试品液中葛根素在10 h内稳定，RSD=1.83%，表明供试品在10 h内稳定性良好。

4.6 精密度试验

取同一批样品(批号：1207073)，按供试品溶液的制备方法制备，连续进样6次，测定峰面积，计算RSD=1.08%(n=6)，表明仪器的精密度良好。

4.7 重复性试验

取同一批样品(批号：1207073)，研细，混匀，取约0.5 g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备，平行制备6份，测定含量，每份测2次，取平均值。经计算得平均含量为5.76 mg·g-1，RSD=0.62%(n=6)。

4.8 加样回收率试验

取约0.25 g供试品(批号：1207073)，共6份，精密称定，分别精密添加一定量的对照品，按供试品溶液制备方法制备，测定葛根素峰面积并计算加样回收率，结果见表1。

4.9 样品测定

按以上所建立的HPLC含量测定方法，对3批样品中葛根素进行含量测定。按供试品溶液的制备方法操作，精密吸取供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，每份测定2次，取平均值，计算样品中葛根素的含量，结果见表2。

表1 葛根素加样回收率试验

表2 3批复方景葛胶囊样品中葛根素的含量测定 /mg·g-1

5 讨论

复方景葛胶囊具有缓解体力疲劳、提高缺氧耐受力、增强免疫力等功效，建立总皂苷和葛根素的含量测定方法可有效控制药品的质量，是品质评价的一项重要指标。实验研究结果表明，所采用的方法简便、灵敏，重现性及稳定性均良好，方法可靠，适于作为复方景葛胶囊中总皂苷和葛根素的定量方法，可为其进一步研究开发奠定基础。

[1] 季宇彬，耿欣，汲晨锋.红景天研究进展[J].天津中医药，2007，(1)：81-85.

[2] 白鸿 保健食品功效成分检测方法[M].北京：中国中医药出版社，2011：30-53.

[3] 王毓杰.藏药红景天及其复方抗缺氧有效成分研究[D].成都：成都中医药大学，2006.

[4] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：192-193.

[5] 卫生部卫生法制与监督司.保健食品检验与评价技术规范[S].2003：306-307.

StudiesonQualityStandardofFufangJinggeCapsule

HAO Yun-fang，ZHANG Lu，NI Yan，LI Xian-rong*

(ShanxiInstituteofTraditionalChineseMedicine，Taiyuan030012，China)

Objective：To establish the quality standard for Fufang Jingge Capsule.Methods：The qualitative identification of Rhodiolae Crenulatae Radix et Rhizoma and Acanthopanacis Senticosi Radix et Rhizoma Seu Caulis was carried out by TLC，the content of total saponins was determined by UV-Vis and the content of puerarin was determined by HPLC.Results：The relevant spots on TLC plates were clear without any interference by the blank reference.The content of total saponins of per 100 g Fufang Jingge Capsule was 20.897 g(n=3).The content of puerarin showed a good linearity in the range of 0.079 6-1.592 μg.The average recovery rate was 99.39%，RSD was 1.54%.Conclusion：Established qualitative and quantitative methods were simple，accurate，reliable and reproducible，and can be effectively used for the quality standard of Fufang Jingge Capsule.

Fufang Jingge Capsule；Quality standard；TLC；UV-Vis；HPLC

2013-01-31)

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李先荣，E-mail:xrli-01@163.com